摘要: 目的 探索 CAST/ EiJ 小鼠对多种病原体易感的可能原因,分析 CAST/ EiJ 小鼠外周血和脾内的免疫细胞表型,明确 CAST/ EiJ 小鼠的免疫细胞构成。 方法 利用流式细胞术,通过细胞表面标记物 CD3、CD4、CD8、CD11b、CD11c、CD19、CD27、CD49b 和 TCRβ 检测 CAST/ EiJ 小鼠和 C57BL/ 6J 小鼠外周血和脾内经典型树突状细胞(cDCs)、自然杀伤细胞(NK)、B 淋巴细胞、T 淋巴细胞及其亚群的细胞比例。 结果 CAST/ EiJ 小鼠与 C57BL/ 6J 小鼠的 cDCs 细胞比例无明显差异,但 cDC1 细胞亚群比例偏低;CAST/ EiJ 小鼠的 NK 细胞(主要是成熟 NK 细胞亚群)和 T 淋巴细胞(主要是 CD8+T 细胞)比例都显著低于 C57BL/ 6J 小鼠,而 CAST/ EiJ 小鼠的 B 淋巴细胞比例高于C57BL/ 6J 小鼠。 结论 CAST/ EiJ 小鼠中 NK 和 T 淋巴细胞比例显著低于 C57BL/ 6J 小鼠。

摘要: 目的 探究FEM1B 对HIV 潜伏库细胞ACH-2 的凋亡影响及作用。 方法 利用慢病毒转染构建FEM1B 过表达的ACH-2 细胞株,采用FITC-Annexin-V/7-AAD 染色检测FEM1B 过表达的ACH-2 细胞株的细胞自发凋亡以及TRAIL 作用24 h 后的细胞凋亡情况,以及用qPCR 检测TRAIL 作用前后细胞上清病毒载量。 结果 FEM1B 过表达的细胞株的细胞自发凋亡没有显著变化,但在TRAIL 作用下,过表达FEM1B 的细胞株的凋亡率显著增加,同时FEM1B 过表达后TRAIL 作用下ACH-2 的上清病毒载量明显上升。 结论 FEM1B 能够促进TRAIL 作用下HIV 潜伏细胞的细胞凋亡和病毒载量。

摘要:FEM1B 是一种高度保守的基因,其编码的蛋白FEM1B 是锚定重复蛋白家族的一员,其空间构象中包含7 个串联的模体。FEM1B 能够参与调控包括细胞凋亡、蛋白质泛素化修饰、细胞还原应激和DNA 复制应激等在内的多种生物学功能。研究发现,FEM1B 能够促进结直肠癌、人T 细胞急性淋巴细胞白血病和弥散性大B 细胞淋巴瘤中肿瘤细胞的凋亡,在非小细胞肺癌中,FEM1B 的表达下调能够抑制肿瘤细胞的增殖,侵袭和迁移。此外,FEM1B 的结构与HIV 调控蛋白Vif 具有一定的相关性。FEM1B 的上述特征可能使其成为癌症治疗和调控HIV 感染的一个新靶点。

摘要: 目的 研究程序性细胞死亡蛋白 2(programmed cell death protein 2,PDCD2)过表达对 T 淋巴细胞株 Jurkat 及 HIV 潜伏感染 T 细胞株 ACH2 凋亡的影响。 方法 用 T 淋巴细胞株 Jurkat 及 HIV 潜伏感染 T 细胞株 ACH2 作为细胞模型,采用慢病毒转染技术分别在上述细胞株过表达 PDCD2 基因,在未刺激和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor (TNF)-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)刺激 24 h 后,经 PE-Annexin V、 7-AAD 检测细胞凋亡的情况。 结果 在无刺激剂的情况下,Jurkat 和 ACH2 细胞的凋亡率并未因细胞内 PDCD2 表达量的增加而改变;在 TRAIL 刺激下,与对照组相比,高表达 PDCD2 基因的 Jurkat 和 ACH2 细胞凋亡率显著增高, 有统计学差异(P<0.05)。 结论 PDCD2 能促进 TRAIL 刺激下 T 细胞及 HIV 潜伏感染 T 细胞的凋亡水平。

摘要: 目的 探讨烟酰胺(NAM)对 SIV/ SHIV 感染猴 CD4+T 细胞中潜伏病毒的激活效果及其机制。 方法 采集血浆病毒载量长期阴性的 SIV/ SHIV 感染猴外周血,分选 CD4+T 细胞,分别加入 NAM、GS-9620、Prostratin 等潜伏感染激活剂,检测细胞上清病毒载量,流式分析 CD4+T 细胞的表面活化分子 CD69、CD38、HLA-DR 以及辅助受体 CXCR4、CCR5 的表达情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测核内抗原 SIRT1 表达量的变化。 结果 NAM 对 SIV/ SHIV 感染猴 CD4+T 细胞中潜伏病毒具有一定的激活效果,与 GS-9620 联合使用,可以更大程度的激活潜伏病毒。 同时,并不引起 T 细胞广泛活化,虽小幅上调辅助受体 CXCR4 的表达,但并不影响 CCR5 的表达,可以显著降低细胞核内抗原 SIRT1 的表达。 结论 NAM 可以作为潜伏感染激活剂的一个选择。

摘要: 目的 比较不同诱导刺激剂对 T 细胞活化标志物 CD69、CD38、HLA-DR 和核内增殖标记 Ki67 的表达量的影响,为研究 T 细胞激活功能和作用研究提供依据。 方法 采集健康恒河猴外周血,分离 PBMC,分别加入常规剂量的 PMA+ Ionomycin、α-CD2 / α-CD3 / α-CD28 和 PHA-P+IL-2,在不同的时间点检测 CD4+T 细胞和 CD8+T 细胞表面标志物 CD69、CD38、HLA-DR 和核内增殖标记 Ki67 表达情况。 结果 流式细胞术结果表明,在刺激剂作用 72 h 时,与其它两种刺激剂相比,α-CD2 / α-CD3 / α-CD28 刺激后的 CD4+T 细胞和 CD8+ T 细胞上的 CD69 和 Ki67 表达量更高,HLA-DR+CD4+T 细胞和 HLA-DR+CD8+T 细胞的比例与另外两组组间比对无差异,同时 CD38+ CD4+T 细胞和 CD38+CD8+T 细胞的比例在 α-CD2 / α-CD3 / α-CD28 与 PHA-P+IL-2 组间比较无统计学差异(P>0. 05);在 PMA +Ionomycin 刺激下,检测到上述四种分子的表达量都很低。 结论 CD2 / α-CD3 / α-CD28 活化 T 细胞效果最佳, PHA-P+IL-2 次之,PMA+Ionomycin 作用弱。 在选择 T 细胞活化作用程度方面,可进行针对性选择。

摘要: 目的 通过建立 SIVmac239 潜伏感染恒河猴模型,研究 CD32 在静息型、活化型和/ 或记忆性 CD4+T 细胞亚群的表达特征,并分析其作为艾滋病潜伏库标志物的可能。 方法 SIVmac239 慢性感染的恒河猴给予联合抗逆转录病毒疗法,建立 SIVmac239 潜伏感染恒河猴模型。利用该模型,检测各阶段样本中血浆病毒载量、CD4+T 细胞计数、CD4 / CD8 细胞比值,及 CD32 在不同 CD4+T 细胞亚群中的表达变化。 结果 同感染前相比,CD32 在 SIV 感染后处于活化状态的幼稚 T 细胞中表达增加,在 HLA-DR+ CD4+T 细胞中表达增加,但 CD32 在静息型 CD4+T 细胞和各静息型记忆性 T 细胞亚群的表达无显著差异。 结论 本研究为 CD32 不是艾滋病潜伏库标记物这一观点提供数据支持,并为后续艾滋病治愈研究提供信息。

摘要: 目的 通过细胞内细胞因子染色(intracellular cytokine staining, ICS)检测 CD8+ T 细胞反应强度,探究不同保存条件对 CD8+ T 细胞活性影响。 方法 采集 9 只恒河猴外周血,分离外周血单个核细胞(PBMC),一部分新鲜细胞直接用于检测,剩余细胞冻存至-80℃和液氮,冻存 1 周和 1 年再用于检测,检测时用阳性刺激物进行刺激,流式分析活细胞比例,MIP-1β、TNF-α、IL-2、IFN-γ 四种细胞因子分泌情况和细胞脱粒标志物 CD107a 的表达情况。 结果 随着冻存时间的增加,细胞存活率降低,且液氮冻存比-80℃冻存有更高的存活率。在细胞因子分泌和细胞脱粒标志物 CD107a 的表达情况中,冻存一年的细胞 MIP-1β、TNF-α 分泌量显著高于正常细胞,细胞状态发生了改变,冻存一周的细胞与新鲜细胞状态更为相近。 结论 想要保持低的细胞死亡率和正常的 CD8+ T 细胞反应,应使用新鲜细胞或短期冻存的细胞进行测量 CD8+ T 细胞反应水平的实验。

摘要:检测 SIVmac239(猴免疫缺陷病毒)感染恒河猴血浆细胞因子的浓度并分析其与疾病特征的相关性。 方法 SIVmac239 慢性感染的中国恒河猴,给予为期 147 d 的 HAART (高效抗逆转录病毒治疗)。测定血浆病毒载量及细胞因子浓度,检测外周血 T 淋巴细胞亚群变化,并分析血浆细胞因子和疾病特征的相关性。 结果 HAART 治疗期间 SIVmac239 感染的恒河猴血浆病毒载量降低到检测限以下。大部分细胞因子的浓度在感染后增高并在 HAART 治疗期间持续升高。在停止 HAART 治疗后,IL-1β、IL-6、IL-10、TGF-β1 和 IL-2 浓度稍有下降,但仍明显高于感染前。 TNF-α、IFN-α、IFN-γ 则持续增高。只有 IP-10 在 HAART 治疗期间浓度出现了下降 IL-6、IL-1β 和 TGF-β1 与血浆病毒载量呈负相关,IP-10 与血浆病毒载量呈正相关。结论 建立感染和 HAART 治疗中多数细胞因子均升高,停药以后多数细胞因子浓度降低但仍高于正常水平。 IL-6、TGF-β1、IP-10 这三种细胞因子无论变 化趋势还是与疾病特征的相关性都与临床相符合。

摘要:目的 建立微滴式数字 PCR 技术(droplet digital PCR,ddPCR)作为关键指标,实现精准检测艾滋病动物模型中细胞及组织中 SIV DNA 载量,用于储存库隐匿病毒实时动态评估。 方法 根据成熟的 qPCR 方法,对微滴式 dPCR 的反应条件进行了优化,确定最适退火温度;通过对 10 倍系列稀释 pGEM-SIVgag477 质粒标准品的检测,确定 ddPCR 检测范围。 并通过对若干 DNA 样品的多次检测,判断该检测方法的稳定性。 结果 ddPCR 的退火 温度为 60℃ ;检测范围是 0. 3~ 3. 96×104 copies/ μL;微滴式 dPCR 与 qPCR 有良好的相关性,相关系数 r = 0. 9981。 结论 本研究建立了基于微滴式 dPCR 的 SIV 病毒 DNA 的绝对定量方法,可有效的对细胞和组织中病毒储存库样 本中病毒 DNA 载量进行动态绝对定量,极大提高了模型应用评价的准确度。