摘要: 目的　通过比较卵巢切除(ovariectomized, OVX)及老龄(Old)两种模型的心血管相关指标,明确模拟雌激素缺乏的两种模型的相同点及不同点,为研究G 蛋白偶联受体30(G protein-coupled receptor 30,GPR30)的心肌保护机制选取合适的动物模型提供依据。 方法　建立OVX 和Old 两种动物模型,通过超声心动图、ELISA、Western blot、形态学以及透射电镜等方法,比较各组的心功能、雌激素水平,心肌组织雌激素受体水平、心肌纤维化程度以及心肌组织线粒体变化。 结果　OVX 组的心脏功能、雌激素水平及雌激素受体蛋白水平具有时间依赖性,OVX-8W 的心脏功能显著低于正常对照组,雌激素水平及雌激素受体蛋白水平呈持续性下降;Old 组的心脏功能显著低于正常对照组及OVX 组,雌激素水平以及雌激素受体蛋白水平均显著低于正常对照组及OVX-4W 组;Old 模型组可见明显的心肌纤维化,心肌细胞显著变大,心体比显著增高,心肌细胞线粒体结构肿胀变形、嵴断裂,有空泡化。 结论　OVX 及Old 两种动物模型均可成功模拟雌激素水平降低。在与纤维化相关的心肌梗死、心力衰竭以及线粒体等能量代谢的相关研究中,建议选择Old 动物模型;如果选择OVX 模型,建议实验观察终点在OVX 后4 周以上;雌激素与血压、肥胖、缺血再灌等研究建议选择OVX 模型。

摘要: 目的　观察氟化钠(NaF)亚慢性染毒对雄性大鼠心脏、肝、肾以及睾丸组织病理损伤及功能的影响,并探讨其可能的作用机制。 方法　将32 只Wistar 雄性大鼠随机分为对照组和低、中、高剂量NaF 组,每组8 只,分别予0、12、24、48 mg/ kg 氟化钠溶液灌胃,每周染毒6 d,持续16 周。记录大鼠氟牙症发生情况,体重变化及计算大鼠心脏、肝、肾和睾丸脏器系数;ELISA 法检测大鼠血清SOD、CAT、GSH-Px、MDA 活力/ 含量水平;采用HE 染色观察心脏、肝、肾和睾丸组织病理损伤;生化法检测大鼠心肌酶谱、肝功能和肾功能;并对大鼠精子质量进行分析。 结果　与对照组相比,低、中、高剂量NaF 组大鼠上、下颌切牙均呈不同程度的氟牙症改变,提示造模成功。高剂量NaF 组大鼠体重低于其余3 组(P<0. 05),低剂量NaF 组和高剂量NaF 组肾脏器系数高于对照组(P<0. 05)。与对照组相比,中、高剂量NaF 组CAT、GSH-Px 活力均下降(P<0. 05);高剂量NaF 组血清中MDA 含量水平升高(P<0. 05);HE 染色结果提示与对照组相比,低、中、高剂量NaF 组心脏、肝、肾和睾丸均出现不同程度的病理性损伤;与对照组相比,各剂量NaF 组LDH 和CK-MB 含量水平升高(P<0. 05),中、高剂量NaF 组大鼠血清中ALT 和AST 含量升高(P<0. 05),高剂量NaF 组大鼠血清中GGT含量升高(P<0. 05),低、中、高剂量NaF 组大鼠血清中BUN 和Scr 含量升高(P<0. 05),低、中、高剂量NaF组大鼠的精子数量下降,精子活率和精子畸形率上升(P<0. 05)。 结论　氟化钠亚慢性染毒可使大鼠多脏器组织出现损伤效应,其机制可能与氧化应激诱导有关。

摘要: 目的　研究雷帕霉素是否可以通过抑制mTOR 活性降低铝暴露引起的p-tau 蛋白的沉积。 方法24 只SD 大鼠随机分为四组:对照组、低剂量麦芽酚铝组、中剂量麦芽酚铝组和高剂量麦芽酚铝组。Morris 水迷宫检测大鼠的学习记忆能力;Western blot 检测海马组织中p-tau 蛋白、p-mTOR 和PSD95 的变化情况;PC12 细胞分为对照组、铝处理组、铝+溶剂对照组、铝+雷帕霉素100 nmol 组、铝+雷帕霉素300 nmol 组和铝+雷帕霉素500 nmol 组,Western blot 检测蛋白变化情况。12 只大鼠分为铝处理组和铝+雷帕霉素组,Morris 水迷宫检测大鼠的学习记忆能力;Western blot 检测海马组织中p-tau 蛋白、p-mTOR 和PSD95 的变化情况。 结果　水迷宫实验中, 铝处理组大鼠的逃避潜伏期均比对照组延长,中、高剂量麦芽酚铝组逃避潜伏期明显低于对照组((35. 24±4. 78)、(25. 92±8. 80) vs (20. 32±6. 04),P<0. 001);铝处理组大鼠的目标象限停留时间和穿越平台次数均随着铝剂量的升高而减少(P<0. 05)。与对照组比较,铝处理组大鼠的海马组织中,p-mTOR/ mTOR 和p-tau/ tau 的水平均明显增高(P<0. 05);PSD95 蛋白明显降低(P<0. 05)。在PC12 细胞中,与单独铝处理组相比,雷帕霉素干预组的p-mTOR/ mTOR 和p-tau/ tau 的表达均有所减少,尤其在雷帕霉素300 nmol 和雷帕霉素500 nmol 干预组中,p-tau 可恢复至正常对照组水平,PSD95 也明显回升(P<0. 05)。与单独铝处理组大鼠比较,雷帕霉素干预组的大鼠学习记忆能力明显改善,同时海马组织中p-mTOR/ mTOR 和p-tau/ tau 的表达均减少,PSD95 也明显回升。 结论　mTOR 磷酸化激活参与了铝引起的p-tau 蛋白过度沉积,雷帕霉素可以通过抑制mTOR 的磷酸化活性降低磷酸化tau 蛋白的沉积。

摘要: 目的　研究调元散对孤独症大鼠行为及脑内γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)、炎症因子的影响,评价调元散对孤独症是否有改善治疗作用。 方法　取40 只丙戊酸(valproic acid,VPA)诱导的孤独症大鼠随机分为模型对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,另取10 只正常大鼠作为空白对照组。低、中、高剂量组动物分别灌胃给予调元散(2. 5 g/ kg、5 g/ kg、10 g/ kg),空白对照组和模型对照组灌胃给予等体积的纯净水,1 次/ d,连续30 d。动物给药后分别进行旷场实验和三箱社交实验,随后麻醉、放血处死,取大脑皮层检测GABA、取海马检测IL-1β、IL-6。 结果　与空白对照组比较,模型对照组在旷场实验中的中央路程百分比、中央时间百分比降低(P=0. 026,P=0. 044),边上路程百分比和边上时间百分比升高(P= 0. 026,P= 0. 044),在三箱社交实验中对陌生鼠的探索次数减少(第二阶段P= 0. 011,第三阶段P = 0. 041),大脑皮层中GABA 升高(P= 0. 002),海马中IL-1β、IL-6升高(P=0. 011,P=0. 003)。与模型对照组比较,高剂量组旷场实验的中央路程百分比、中央时间百分比升高(P=0. 007,P=0. 021),边上路程百分比、边上时间百分比降低(P=0. 007,P= 0. 021),在三箱社交实验中对陌生鼠的探索次数增加(第二阶段P=0. 032,第三阶段P= 0. 002),大脑皮层中GABA 降低(P= 0. 006)、海马中IL-1β、IL-6 降低(P=0. 001,P=0. 000)。 结论　调元散可减轻VPA 诱导孤独症大鼠的刻板行为,增加模型大鼠的社交次数,对孤独症大鼠有一定的改善治疗作用。

摘要: 目的　探讨不同缺血时间对中国小型猪急性心肌缺血再灌注损伤的影响,为建立适合的小型猪心肌缺血再灌注模型提供依据。 方法　中国小型猪29 只,随机分为假手术组(6 只)、缺血30 min 组(7 只)、缺血60 min 组(7 只)及缺血90 min 组(9 只)。各组戊巴比妥钠麻醉后行左冠状动脉造影,后将球囊经导丝交换入冠脉左前降支中部,术中连续心电监护记录ST 段改变情况、室颤及除颤次数,再灌注3 h 后处死。于缺血前、再灌即刻、再灌后1 h、2 h 及3 h 采集超声心动图,描记心脏收缩功能左心室射血分数(left ventricular ejection fraction, EF)及左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening, FS);检测血清肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme, CKMB)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH) 及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD) 活性,丙二醛(malondialdehyde ,MDA)含量。TTC/ 伊文思蓝双重染色观察心肌梗死面积,硫磺素S 染色法观察再灌后无复流面积。 结果　缺血90 min 组动物死亡率较缺血30 min 组、缺血60 min 组高;随缺血时间增长,室颤及除颤次数明显增加(P<0. 05,P<0. 01);缺血90 min 组再灌注3 h 时EF 值、FS 值较其他组明显降低(P<0. 05,P<0. 01);模型组动物在心电图缺血性改变、心肌梗死及无复流面积、心肌组织染色及血清CK-MB、LDH、SOD、MDA 含量方面无显著性差异。 结论　心肌缺血90 min 再灌注小型猪模型的恶性心律失常及死亡率高,缺血30 min 再灌注3 h 条件建立的模型能复制临床疾病的特征性病变且死亡率低,适合于发病机制及药物作用研究。

摘要: 目的　探究METTL3(methyltransferase like 3,METTL3)介导的m6A(N6 甲基腺苷)修饰对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264. 7)焦亡的影响。 方法　ox-LDL(50 μg/ mL)诱导RAW264. 7 细胞24 h 后,对METTL3 进行敲低或过表达,检测培养细胞RNA m6A甲基化水平,荧光定量PCR 和Western blot 法检测METTL3 和细胞焦亡相关基因NLRP3、NF-κB p65、GSDMD-N、Caspase-1 mRNA 和蛋白表达水平,乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测细胞死亡率,酶联免疫吸附法检测炎症细胞因子IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α 和IL-10 的含量。 结果　ox-LDL 能够促进RAW264. 7 巨噬细胞METTL3 的表达和RNA m6A 甲基化水平,同时也能促进炎症因子IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α 的分泌(P<0. 05),降低IL-10(P<0. 05)的表达。在ox-LDL 诱导基础上,METTL3 过表达后,RNA m6A 甲基化水平升高,NLRP3、NF-κB p65、GSDMD-N、Caspase-1 表达显著增加,促炎细胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18 水平升高,抗炎细胞因子IL-10 水平降低,LDH 释放增加,METTL3 敲低后结果相反。 结论　METTL3 介导的m6A 修饰能够显著促进ox-LDL 诱导的巨噬细胞焦亡和炎症反应。

摘要: 目的　探讨甘草泻心汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠水通道蛋白3、4 的影响。 方法　清洁级SD 大鼠32 只,抽取8 只作为空白组,余下24 只采用4%葡聚糖硫酸钠复制UC 模型,模型成功后随机分为模型组,西药组(美沙拉嗪缓释颗粒),中药组(甘草泻心汤),每组8 只,持续灌胃2 周,每天1 次。检测并记录体质量、疾病活动指数、结肠长度、结肠黏膜损伤指数、组织病理学改变和结肠组织学损伤指数,血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、IL-6,结肠水通道蛋白3(AQP3)、水通道蛋白4(AQP4)蛋白和mRNA。 结果　与空白组相比,模型组和给药组血清TNF-α、IL-1β、IL-6 浓度升高(P<0. 05);模型组和给药组结肠AQP3、AQP4 蛋白表达降低(P<0. 05);模型组、给药组结肠AQP3 mRNA 表达和模型组、西药组结肠AQP4 mRNA 表达降低(P<0. 05)。中药组结肠AQP4mRNA 表达与空白组相比无统计学差异(P>0. 05)。与模型组相比,给药组血清TNF-α、IL-1β、IL-6 浓度降低(P<0. 05);中药组血清TNF-α、IL-1β、IL-6 浓度比西药组更低(P<0. 05);给药组结肠AQP3、AQP4 蛋白和mRNA 表达升高(P<0. 05);中药组结肠AQP4 蛋白表达比西药组更高(P<0. 05);中药组结肠AQP3、AQP4 mRNA 表达比西药组更高(P<0. 05)。 结论　甘草泻心汤能有效改善UC 大鼠体质量、疾病活动指数、结肠黏膜损伤指数、组织学损伤指数等情况,其可能通过改善结肠AQP3、AQP4 蛋白和mRNA 表达,调节血清TNF-α、IL-1β、IL-6 水平,推测这些可能是甘草泻心汤治疗UC 的效应机制。

摘要: 目的　建立miR-100 基因敲除小鼠模型,初步探索miR-100 基因缺失对小鼠造血系统发育的影响。 方法　通过将EIIa-Cre^- ;miR-100^{fl/ fl} 小鼠和EIIa-Cre⁺ ;miR-100^{+/ +} 小鼠进行配繁,培育出EIIa-Cre⁺ ;miR-100^{fl/ fl}(miR-100^{-/ -} )小鼠,也就是miR-100 全身敲除小鼠。通过PCR 技术以及q-PCR 技术鉴定小鼠基因型并验证miR-100 基因在小鼠骨髓和脾的敲除效率。分离小鼠外周血、骨髓、脾,制备单细胞悬液,利用血细胞计数、流式细胞术、甲基纤维素血细胞集落形成实验分析该基因缺失对小鼠造血系统的影响。并通过q-PCR 和RNA 结合蛋白免疫沉淀实验(RIP)验证miR-100 与Mospd2 之间的关系。 结果　PCR 和q-PCR结果表明,成功构建miR-100 基因敲除小鼠。血细胞计数、流式细胞术及甲基纤维素血细胞集落形成实验结果表明,miR-100 基因缺失小鼠外周血髓系细胞比例增多,但其对小鼠骨髓和脾的髓系细胞,T/ B 淋巴细胞、红细胞的比例和绝对细胞计数无影响,并且miR-100 基因缺失对小鼠骨髓造血干祖细胞群体比例和数量及骨髓单个核细胞集落形成能力无影响。q-PCR结果表明,miR-100 缺失可以促进小鼠骨髓细胞中Mospd2 的表达。RIP 实验表明,miR-100 以AGO2 蛋白复合物的形式与Mospd2 结合在一起,进而调控Mospd2 的表达。 结论　本研究成功建立了miR-100 基因敲除小鼠模型,发现该基因缺失影响小鼠外周血髓系细胞占比,验证了miR-100 与Mospd2 之间的关系。本研究为进一步了解该基因在小鼠造血调控中的作用提供指导。

摘要: 目的　探讨葫芦巴碱(trigonelline,TRG)对妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)大鼠血脂代谢及胰岛素抵抗的影响。 方法　随机选取8 只雌性Wistar 大鼠普通喂养,剩余大鼠高脂喂养8 周,均合笼交配确认妊娠后,取普通喂养大鼠作为对照组,高脂喂养大鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)35 mg/kg 诱导构建GDM 模型,成模大鼠随机分为模型组、TRG 低剂量组(15 mg/ (kg·d))、TRG 高剂量组(45 mg/ (kg·d))及盐酸二甲双胍(MH)(200 mg/ (kg·d))组,每组各8 只,对照组及模型组大鼠仅灌胃给药等量生理盐水,连续14 d。称重并测量大鼠空腹血糖(fasting blood glucos,FBG)水平及24 h 尿白蛋白(albumin,Alb)含量;收集血液,检测血脂(高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG))、肝功能(天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT))及肾功能(血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(serum creatinine,SCr));检测各组大鼠空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)含量;计算胰岛素抵抗指数(HOMA-insulin resistance index,HOMA-IR)及胰岛素敏感指数(HOMA-insulin sensitivity index,HOMA-ISI);观察大鼠胰腺组织病理学变化;检测胰腺组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)水平。 结果　成功构建GDM 大鼠模型;与对照组比较,模型组、TRG 低、高剂量组及MH 组大鼠BM、24 h Alb、AST、ALT、BUN 及SCr、FBG 水平、血清LDL-C、TC 和TG 含量、FINS、HOMA-IRI 值、胰腺组织中MDA、TNF-α 和IL-6 水平升高,血清HDL-C 含量、HOMA-ISI 值及胰腺组织中SOD、CAT 活性水平降低(P<0. 05),胰腺组织见有不同程度的病理变化;与模型组比较,TRG 低、高剂量组及MH 组大鼠BM、24 h Alb、AST、ALT、BUN 及SCr、FBG 水平、血清LDL-C、TC 和TG 含量、FINS、HOMA-IRI 值、胰腺组织中MDA、TNF-α 和IL-6 水平降低,血清HDL-C 含量、HOMAISI值及胰腺组织中SOD、CAT 活性水平升高(P<0. 05),胰腺组织病理损伤逐渐减轻;TRG 低、高剂量组及MH 组作用效果逐渐增强(P<0. 05)。 结论　TRG 可降低GDM 大鼠血糖水平,改善肝肾功能及异常血脂代谢,减轻胰岛素抵抗并提高胰岛素敏感性,其作用效果可能与降低炎性及氧化水平有关。

摘要: 目的　建立一种改良的小鼠精原细胞染色体畸变试验方法,以获得大量结构清晰的中期分裂相精原细胞利于阅片,并将改进后的方法应用于玛咖的致突变实验。 方法　选取雄性ICR 小鼠30 只,随机分为6 组,每组5 只,将原染色体制备方法增加了剪碎曲细精管及精原细胞消化富集,采用1. 5 mg/ mL 的胶原酶,35℃消化15 min,每隔3 min 搅拌1 次,消化富集精原细胞,经低渗、固定、滴片,封片后镜检阅片,同时与国标方法所制备的滴片进行比较阅片。 结果　改良消化富集法所制备的滴片背景清晰,染色体分散良好,收缩适中,易于观察。分析每只动物100 个中期分裂相精原细胞所需观察的高倍视野数(25±3. 9)与国标方法组(75±5. 6)比较明显减少(P<0. 01),精原细胞有丝分裂指数(18. 04±2. 47)与国标方法组(8. 83±2. 04)比较明显增加(P<0. 01);环磷酰胺处理组染色体畸变率(15. 40±2. 30)与空白对照组(3. 60±1. 14)比较显著增加(P<0. 01);玛咖各剂量组染色体畸变率与空白对照组比较无统计学意义(P>0. 05)。 结论　改良消化富集法能明显提高精原细胞富集效率及实验成功率,可获得大量分散良好、背景清晰的中期分裂相精原细胞,明显优于国标方法;在本次实验条件下,玛咖对小鼠精原细胞染色体无致突变作用。

摘要: 目的　探讨田基黄对高尿酸血症大鼠模型的干预作用效果。 方法　选取72 只SD 大鼠,随机分为6组:对照组、模型组、田基黄低、中、高剂量组和非布司他组。除对照组外,其它各组大鼠均以氧嗪酸钾盐(250 mg/(kg·d))腹腔注射建立高尿酸血症模型,对照组则给予同剂量的生理盐水。连续造模4 周后,非布司他组每天以0. 01 g/ kg 剂量灌胃,田基黄低、中、高剂量组分别每天以0. 16 g/ kg、0. 22 g/ kg、0. 27 g/ kg 剂量灌胃治疗。观察大鼠一般生活状态和外观的变化,比较血清生化指标:尿酸(uric acid,UA)、尿素氮(urea nitrogen,BUN)、肌酐酸(creatinine,Cre)、谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase, AST)和血清炎症因子:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)、白细胞介素18(interleukin 18,IL-18)的变化情况,同时观察对比各组大鼠肾病理的变化情况。 结果　模型组大鼠出现了明显的精神状态差,行动缓慢等一系列症状,而田基黄各剂量组均能够明显改善这些状态。模型组的血尿酸、肌酐、尿素氮的水平均显著升高(P<0. 05,P<0. 01),田基黄能够显著降低模型组的血尿酸、肌酐与尿素氮水平(P<0. 05,P<0. 01),并且改善程度也与剂量的增高成正比。模型组大鼠的血清炎症因子IL-17、IL-18 和TGF-α 的水平均出现显著升高(P<0. 05,P<0. 01),非布司他组的炎症因子均显著降低至正常水平(P<0. 05,P<0. 01),而田基黄中剂量组与高剂量组的IL-17、IL-18 和TGF-α 的水平均显著降低且具有统计学差异(P<0. 05,P<0. 01)。病理结果显示:模型组大鼠的肾小球轻微萎缩,局部有少量炎性细胞浸润,肾小管的管腔明显增粗、上皮细胞变性坏死,肾间质纤维化;田基黄高剂量组肾间质纤维化明显改善,仅见少量炎性细胞浸润,肾小球和肾小管的结构基本恢复正常,接近非布司他组。 结论　田基黄具有降低血尿酸的作用,并且可能通过抑制炎症反应对高尿酸血症模型大鼠的肾起到保护和治疗作用。

摘要: 目的　探讨环状RNA 凌乱样激酶1(circTLK1)在心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用和潜在机制。 方法　48 只C57BL/6 小鼠分为假手术组(Sham 组)、MIRI 组、sh-NC 组、sh-circTLK1 组、sh-circTLK1+antagomir-NC 组、sh-circTLK1+antagomir-miR-26a-5p 组,每组8 只;采用结扎左冠状动脉前降支(LAD)建立MIRI 小鼠模型。超声心动图检测小鼠左心室射血分数(EF)、左心室缩短分数(FS)、左心室舒张末期内径(LVEDD)和收缩末期内径(LVESD)以评估心脏功能,ELISA 检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CKMB)水平,苏木精-伊红(HE)染色检测心肌组织病理学变化,TUNEL 染色检测心肌细胞凋亡,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测心肌组织中circTLK1、miR-26a-5p、YES1 mRNA 和蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验、RNA 结合蛋白免疫沉淀(RIP)验证circTLK1/ YES1 和miR-26a-5p 之间的相互作用。 结果　与Sham 组相比,MIRI 组小鼠EF、FS、心肌组织miR-26a-5p 水平显著降低,LVEDD、LVESD、血清LDH、CK-MB 活性和cTnI 水平、心肌细胞凋亡率、心肌组织circTLK1、YES1 mRNA 和蛋白水平显著升高(均P<0. 05),心肌细胞排列紊乱,细胞间质有炎性细胞浸润;circTLK1 敲低可显著上调miR-26a-5p,抑制YES1 表达,改善上述指标变化(均P<0. 05),减轻心肌损伤;抑制miR-26a-5p 可通过上调YES1,显著减弱circTLK1 敲低对MIRI 的保护作用。双荧光素酶报告基因实验和RIP 证实了circTLK1 和miR-26a-5p 之间的直接相互作用,YES1 是miR-26a-5p 的靶标。 结论　敲低circTLK1 可能通过调节miR-26a-5p / YES1 轴在MIRI 中发挥保护作用,circTLK1 可能是MIRI 的潜在治疗靶点。

摘要: 目的　二甲双胍(metformin,Met)是临床常用的降血糖药,对能量代谢的调控是其药理作用主要机制之一。本文基于线粒体氧化呼吸链相关调控基因对二甲双胍的抗抑郁作用进行探索,以从能量代谢角度探讨其抗抑郁作用相关机制。 方法　ICR 小鼠皮下注射皮质酮(corticosterone,CORT,20 mg/ kg)连续3 周复制小鼠抑郁模型,注射一周后,二甲双胍(200、100、50 mg/ kg)灌胃给药2 周,给药期间测量小鼠糖水偏好率;给药结束后进行旷场试验,记录小鼠进入旷场中央区的次数和停留时间,在周边区域的跨格数;qPCR 和Western blot 检测海马组织中线粒体呼吸链相关基因Nduf(NADH dehydrogenase ubiquinone)和Mrp(mitochondrial ribosomal protein)mRNA 表达,以及神经营养因子BDNF(brain-derived neurotrophic factor)、环磷酸腺苷反应元件蛋白CREB(cAMP response element-binding protein)和神经突触后受体AMPAR(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid receptor)、NMDAR(N-methyl-d-aspartic acid receptor)mRNA 或蛋白表达情况。此外,还观察了二甲双胍(连续灌胃给药1 周)对正常小鼠的作用。 结果　二甲双胍不影响正常和模型小鼠的体重;提高正常和模型小鼠的糖水偏好性;增加正常和模型小鼠进入旷场中央区域的次数,增加模型小鼠在外周区域的活动距离;二甲双胍上调正常和模型小鼠海马组织中Nduf、Mrp 的大部分亚型的mRNA 表达(除Ndufa8、Ndufa13);增强正常小鼠海马中Creb、Ampar、Nmdar mRNA 表达和BDNF、CREB、AMPAR、NMDAR 蛋白表达,拮抗模型小鼠中Bdnf、Creb mRNA 和BDNF、CREB 蛋白表达的下调。 结论　二甲双胍可以改善CORT 所致小鼠抑郁样行为,其机制与调节海马组织中线粒体氧化呼吸链、神经可塑性相关的基因或蛋白表达有关。

摘要: 目的　观察苗药地锦草对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)大鼠肾小球足细胞相关蛋白Nephrin、Desmin 和Angptl4 表达的影响,明确其在DKD 治疗中的作用机制。 方法　30 只8 周龄雄性SD 大鼠随机分为:正常对照组(Normal,N 组),DKD 组(D 组),DKD 地锦草治疗组(Euphorbia humifusa,E 组)。D 组与E 组大鼠单次尾静脉注射链脲佐菌素(Streptozobocin,STZ)(55 mg/ kg)复制DKD 模型,N 组注射溶媒柠檬酸缓冲液,连续3次24 h 尿白蛋白量>5 mg/ d 可确定为糖尿病肾病成模,5 周后D 组10 只大鼠及E 组9 只大鼠DKD 成模。DKD 模型复制成功后,E 组大鼠灌胃法服用地锦草300 mg/ (kg·d),D 组与N 组灌胃给予同体积普通双蒸水,各组大鼠灌胃共16 周。所有大鼠在处死前称重、每周收集大鼠留尿检测24 h 尿白蛋白、留血检测血清白蛋白、尿素氮、肌酐、胆固醇、白蛋白;苏木素-伊红(HE)染色、马松三色染色(Masson)观察肾病理学结构;透射电镜观察足细胞的形态;WT1 染色定位足细胞并采用disector/ fractionator方法行足细胞计数;免疫组化观察Nephrin、Desmin、Angptl4 的蛋白定位;Western blot 法检测Nephrin、Desmin、Angptl4、Collagen IV 的蛋白表达量;qPCR 法检测Nephrin、Desmin、Angptl4、Collagen IV 的mRNA 含量。 结果　D 组较N 组大鼠血糖、24 h 尿白蛋白、尿素、肌酐、胆固醇均明显升高, 白蛋白明显降低(P<0. 05)。E 组大鼠上述各指标均较D 组明显改善(P<0. 05)。HE 及Masson 染色可见,N 组大鼠肾小球结构完成,系膜细胞及基质正常。D 组大鼠肾小球系膜细胞增生,系膜区基质沉积较多。E 组大鼠经地锦草灌胃治疗后上述情况得以改善。透射电镜显示N 组大鼠肾小球足细胞足突正常,D 组大鼠足突融合或消失,E组大鼠足突较完整。WT1 染色显示D 组足细胞计数较N 组减少,E 组较D 组明显增加(P<0. 05)。免疫组化,Western blot 及qPCR结果显示,Desmin、Angptl4 及Collagen IV 蛋白及mRNA 在N 组表达较少,上述指标在D 组表达明显增多(P<0. 05),E 组大鼠经地锦草治疗后Desmin、Angptl4 及Collagen IV 蛋白及mRNA 的表达较D 组明显减少(P<0. 05)。D 组Nephrin 蛋白及mRNA 表达较N 组明显减少,E 组较D 组表达增多(P<0. 05)。 结论　地锦草治疗可以明显减少DKD 大鼠足细胞Desmin、Angptl4 及Collagen IV 的表达并增加Nephrin 的表达,有效保护足细胞的机械屏障及电荷屏障,抑制足细胞发生转分化,减轻DKD 大鼠的蛋白尿并改善其肾功能。

摘要: 目的　探讨penetratin 介导神经生长因子(NGF)对中度创伤性颅脑损伤(TBI)小鼠的治疗作用。 方法　首先在细胞水平利用细胞免疫荧光法评估不同细胞渗透肽(CPP)复合NGF 蛋白的穿膜效果,明确最佳的复合比例。随后在构建的中度TBI 小鼠模型上分析给药后各组小鼠的行为学变化:利用Morris 水迷宫实验检测小鼠的空间记忆功能,转棒实验评估小鼠的协调运动能力。采用免疫组化染色法观察脑组织GFAP、NeuN 蛋白的表达情况。 结果　体外细胞免疫荧光实验结果显示,NGF/ penetratin 组细胞内NGF 蛋白含量显著高于其他组,且在penetratin 与NGF 的摩尔比为20 ∶ 1 时荧光强度最高。动物实验结果显示,NGF/ penetratin 治疗组小鼠的协调运动功能、空间记忆能力以及脑组织内NeuN 蛋白表达水平均显著高于TBI 组与NGF 组小鼠,其脑组织内GFAP 蛋白表达水平显著低于TBI 组以及NGF 组小鼠(P<0. 05)。 结论　Penetratin 作为一种药物递送载体可促进NGF 通过血脑屏障(BBB)进入受损脑组织内,对中度TBI 小鼠具有较好的治疗作用。

摘要:利用小鼠生物净化技术将实验小鼠的微生物级别由低级别提升至高级别已成为实验动物研究机构必不可少的一项业务,同时也是保障实验小鼠质量的重要技术手段。目前国际通用的小鼠生物净化方案以体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transplantation,IVF-ET)技术为主。小鼠生物净化技术平台是一个综合性的实验室,涵盖了待净化小鼠饲养室、小鼠胚胎操作室、代孕小鼠饲养室、净化后小鼠饲养室等不同的功能区域。以浙江大学实验动物中心小鼠生物净化技术平台为例,分析小鼠生物净化技术平台的设计要点和运行模式,并从小鼠微生物质量控制、环境卫生控制和仪器设备维护方面讨论平台的维护,以期给同类型技术平台建设提供参考。

摘要:糖尿病是全球范围内的一种以糖代谢紊乱为主的慢性病。长期高血糖会导致肾、心脏、血管、神经等多种器官的慢性损害。钠-葡萄糖共转运蛋白2(sodium glucose transporter 2 inhibitors,SGLT2)抑制剂是一种新型的降糖药物,它是以一种不依赖于胰岛素分泌的新的机制来降低血糖水平。此类药物以抑制肾肾小管中负责在尿液重吸收葡萄糖的SGLT-2 来降低肾糖阈,排出多余的葡萄糖的方式,使血液循环中的葡萄糖水平下降。此外,SGLT2-抑制剂不仅可以治疗糖尿病,同时还可用于治疗由糖尿病引起的心血管、肾疾病和高血压等疾病。现就钠-葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂在糖尿病和并发症中的作用和机理进行综述。

摘要:代谢综合征(metabolic syndrome,MS)聚集了多种代谢紊乱状态,直接增加肥胖、2 型糖尿病和心血管疾病的风险。MS 的发病率在全球范围内不断上升,其死亡率和经济负担也逐年增加。miRNAs 通过转录调控基因表达水平在各种生物过程中发挥关键作用,其水平的改变与葡萄糖及脂质代谢紊乱密切相关。因此,本文选择一些MS 相关的miRNAs,对miRNAs 介导调控MS 各组分的作用方面及可能的机制进行综述,以期帮助理解MS 潜在发病机制,挖掘miRNAs 作为MS 生物标志物的潜力,并为治疗MS 提供新的思路。

摘要:围绝经期综合征(perimenopauseal syndrome,PMS)是由雌激素和孕酮等类固醇激素水平下降引起的一系列以自主神经系统功能紊乱,伴有神经心理症状的一组症候群,严重影响女性的身心健康和生活质量。体外构建细胞模型是研究PMS 的有效方法之一。通过分析研究该疾病的细胞模型,为疾病的治疗提供方向。本文通过检索PubMed、EMbase、Web of science 数据库中近年来涉及细胞模型应用于PMS 的相关文献,通过总结并系统分析PMS 细胞模型建立方法、评价指标及模型特点,对该细胞模型应用于PMS 的研究进展进行了综述,以期对PMS细胞模型合理构建及深入研究提供借鉴与思路。

摘要:肝硬化是由各种原因导致的肝细胞外基质过度增生与分解的失衡所致的疾病,是多种肝疾病向肝硬化发展的关键环节。肝纤维化的发生过程是可逆的,主要是肝损伤导致肝星状细胞活化后形成肌纤维细胞,过度沉积在肝内,进而发生肝纤维化,其后果常导致不可逆的肝硬化甚至肝癌的发生。目前对于肝纤维化的具体发病机理及相关分子信号转导机制尚不明确。因此,深入探索肝纤维化的发病机制对抗肝纤维化靶点药物研究具有重要意义,为此,本文主要基于国内外相关文献,结合近年来有关肝纤维化的发病机理及相关信号转导研究作一综述。