摘要: 目的 比较不同诱导刺激剂对 T 细胞活化标志物 CD69、CD38、HLA-DR 和核内增殖标记 Ki67 的表达量的影响,为研究 T 细胞激活功能和作用研究提供依据。 方法 采集健康恒河猴外周血,分离 PBMC,分别加入常规剂量的 PMA+ Ionomycin、α-CD2 / α-CD3 / α-CD28 和 PHA-P+IL-2,在不同的时间点检测 CD4⁺T 细胞和 CD8⁺T 细胞表面标志物 CD69、CD38、HLA-DR 和核内增殖标记 Ki67 表达情况。 结果 流式细胞术结果表明,在刺激剂作用 72 h 时,与其它两种刺激剂相比,α-CD2 / α-CD3 / α-CD28 刺激后的 CD4⁺T 细胞和 CD8+ T 细胞上的 CD69 和 Ki67 表达量更高,HLA-DR+CD4⁺T 细胞和 HLA-DR+CD8⁺T 细胞的比例与另外两组组间比对无差异,同时 CD38⁺ CD4⁺T 细胞和 CD38⁺CD8⁺T 细胞的比例在 α-CD2 / α-CD3 / α-CD28 与 PHA-P+IL-2 组间比较无统计学差异(P>0. 05);在 PMA +Ionomycin 刺激下,检测到上述四种分子的表达量都很低。 结论 CD2 / α-CD3 / α-CD28 活化 T 细胞效果最佳, PHA-P+IL-2 次之,PMA+Ionomycin 作用弱。 在选择 T 细胞活化作用程度方面,可进行针对性选择。

摘要: 目的 本文利用瘦素受体(LEPR)敲除大鼠,分析瘦素受体基因敲除后大鼠脑中小胶质细胞形态与功能的改变,探究瘦素受体在小胶质细胞中的功能作用。 方法 采用 RT-PCR,蛋白印迹法,免疫组化法和免疫荧光法,观察大鼠瘦素受体敲除后体内外小胶质细胞活化状态。 结果 瘦素受体在小胶质细胞表达,基因敲除可以完全剔除小胶质细胞中 LEPR 蛋白;LEPR 敲除增强大鼠 LPS 对刺激的炎症反应,存活率降低了 75%;LEPR 敲除大鼠脑中的活化的小胶质细胞比例明显增加;LEPR 敲除的原代小胶质细胞不仅分泌更多炎性因子也增强了吞噬能力;Western blot 发现 PI3K/ AKT 在瘦素受体敲除大鼠脑组织蛋白中磷酸化明显增强。 结论 瘦素受体敲除后,大鼠小胶质细胞向促炎促吞噬的方向发展,揭示了 LEPR/ Leptin 可能通过小胶质细胞调节神经炎症。

摘要: 目的 通过建立 SIVmac239 潜伏感染恒河猴模型,研究 CD32 在静息型、活化型和/ 或记忆性 CD4⁺T 细胞亚群的表达特征,并分析其作为艾滋病潜伏库标志物的可能。 方法 SIVmac239 慢性感染的恒河猴给予联合抗逆转录病毒疗法,建立 SIVmac239 潜伏感染恒河猴模型。利用该模型,检测各阶段样本中血浆病毒载量、CD4⁺T 细胞计数、CD4 / CD8 细胞比值,及 CD32 在不同 CD4⁺T 细胞亚群中的表达变化。 结果 同感染前相比,CD32 在 SIV 感染后处于活化状态的幼稚 T 细胞中表达增加,在 HLA-DR⁺ CD4⁺T 细胞中表达增加,但 CD32 在静息型 CD4⁺T 细胞和各静息型记忆性 T 细胞亚群的表达无显著差异。 结论 本研究为 CD32 不是艾滋病潜伏库标记物这一观点提供数据支持,并为后续艾滋病治愈研究提供信息。

摘要: 目的 研究 N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酰(N-acetyl-seranyl-aspartate-lysyl-proline, Ac- SDKP)通过调节含 YEATS 结构域蛋白 4(YEATS domain containing protein 4, YEATS4)从而抑制矽肺纤维化的作用及其机制。 方法 RAW264. 7 细胞分为 siRNA 阴性对照组( siRNA-Control, siC)、siRNA-YEATS4 组( siY)、SiO₂ + siRNA 阴性对照组( S+siC)和 SiO₂ +siRNA-YEATS4 组( S+siY);以及对照组(Control, C)、SiO₂ 诱导组( SiO₂ , S)、 SiO₂+Ac-SDKP 处理组(SiO₂+Ac-SDKP, S+Ac)和 Ac-SDKP 处理组(Ac)。 Wistar 大鼠分为对照 24 周组(Control 24 week, C24)、矽肺 24 周组(Silicosis 24 week, S24)和 Ac-SDKP 治疗组(Ac-SDKP treatment 24 week, Ac24)。 免疫印迹法(Western blot)检测 I 型胶原(Collagen type I, COL I)、巨噬细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)、精氨酸酶-1(Arginase-1)和 YEATS4 的表达。免疫组织化学染色法( Immunohistochemical staining, IHC)检测 YEATS4 在肺组织中的定位及表达。 结果 Western blot结果显示,在 RAW264. 7 细胞中,分别与 siC、S+siC 组比 较,siY 组、S+siY 组 COL I、MCP-1、Arginase-1 表达均明显降低(P<0. 05);与 C 组比较,S 组 COL I、MCP-1、Arginase- 1 和 YEATS4 高表达;与 S 组比较,S+Ac 组中 COL I、MCP-1、Arginase-1 和 YEATS4 表达降低(P< 0. 05)。 IHC 及 Western blot结果显示,与 C24 组大鼠比较,S24 组中 COL I、MCP-1、Arginase-1 和 YEATS4 表达上调;与 S24 组比较, Ac24 组中 COL I、MCP-1、Arginase-1 和 YEATS4 表达降低(P<0. 05)。 结论 Ac-SDKP 可能通过抑制 YEATS4 发挥抗矽肺纤维化的作用。

摘要: 目的 心脏成纤维细胞占心脏细胞数量的 50%以上,在心脏生理病理过程中发挥重要作用。 小鼠出生后 7 d 是心脏失去再生能力的时间转折点,本研究着眼于研究心脏成纤维细胞在小鼠出生后早期数量及性状的变化情况,为心肌再生机制研究提供基础性实验数据。 方法 出生 1 d 和 7 d 的 C57 小鼠进行心尖切除手术 (Apex resection,AR),体视镜拍照及 HE 染色观察心尖处切口,21 d 后观察再生情况;分离出生后 1 d 和 7 d 的 C57 小鼠心脏组织,称取心脏湿重比较重量差异,病理切片进行 HE 染色观察两个时间点的心脏病理结构,免疫荧光染色观察 1 d 和 7 d 心脏组织中成纤维细胞数量变化;为了更加准确定量心脏成纤维细胞的数量变化,我们利用成纤维细胞表面标志物胸腺细胞分化抗原 1(Thymocyte differentiation antigen 1, Thy1)通过流式分选技术对心脏组织细 胞悬液进行心肌成纤维细胞的分选,比较 1 d 和 7 d 小鼠心脏组织中心肌成纤维细胞比例;为了验证心脏成纤维细胞性状是否发生变化,我们分离 1 d 和 7 d 小鼠心脏成纤维细胞,分析成纤维细胞的特异性标志物 Thy1、成纤维细胞特异性蛋白( Fibroblast-specific protein 1, Fsp-1)、骨膜蛋白( Periostin)、血小板衍生生长因子受体 α( platelet- derived growth factor receptor α,Pdgfrα)、Ⅰ型胶原 α1(Collagen alpha-1,Col1a1)、转录因子 21(Transcription factor 21, Tcf21)在 mRNA 水平的表达变化情况。 结果 出生 1 d 的小鼠心尖切除手术后 21 d 可以完全再生(再生率为 86. 67%),而 7 d 小鼠手术后不能完全再生(再生率为 0);小鼠出生后 7 d 心脏组织平均比 1 d 心脏湿重重 13. 13 mg(3. 11 倍)(1 d: (6. 22±0. 19),7 d: (19. 35±0. 56),P<0. 0001;n= 6)。 心脏成纤维细胞免疫荧光染色证明,7 d 心脏成纤维细胞数量明显高于 1 d 心脏;流式细胞分选证明小鼠出生后 7 d 心脏组织中心肌成纤维细胞占总细胞比例比出生后 1 d 时高 2. 9%(1. 38 倍)(1 d: (7. 7±0. 74),7 d: (10. 6±0. 95),P= 0. 029;n= 3);在成纤维细胞转录水平,成纤维细胞标志蛋白 Thy1、Fsp-1、Periostin 在小鼠出生后 7 d 表达高于出生后 1 d 的成纤维细胞(Thy1: 1 d: (1. 01±0. 12),7 d: (2. 71±0. 27),P= 0. 0288;Fsp-1: 1 d: (1. 04±0. 27),7 d: (5. 28±0. 10),P= 0. 0046;Periostin: 1 d:(0. 91±0. 01),7 d:(1. 13±0. 05),P= 0. 0119;n= 3),而 Pdgfrα、Col1a1、Tcf21 三种成纤维细胞标志蛋白表达则低 于出生后 1 d 的小鼠心脏中的成纤维细胞(Pdgfrα: 1 dL: (1. 09±0. 04),7 d: (0. 62±0. 01),P= 0. 0068;Col1a1: 1 d: (1. 00±0. 09),7 d: (0. 57±0. 02),P= 0. 0433;Tcf21: 1 d: (1. 00±0. 03),7 d: (0. 54±0. 02),P= 0. 0054;n= 3), 证明出生后 1 d 到 7 d 的过程中心脏成纤维细胞性状发生了变化。 结论 小鼠出生后早期(1 d 和 7 d)心脏成纤维细胞的比例和性状均发生了明显变化,为研究哺乳动物心肌再生能力的丢失的机制研究提供一定的线索。

摘要: 目的 观察脑栓通胶囊对 ApoE^-/- 动脉粥样硬化小鼠模型炎症相关因子白介素 1β( iterleukin-1 beta, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin- 6, IL- 6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、细胞间粘附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1, ICAM-1)和金属基质蛋白酶-9(matrix metalloproteinase, MMP-9)的表达, 初步探讨其治疗动脉粥样硬化的机制。 方法 8 周龄雄性 ApoE^-/-小鼠,采用高脂饮食法建立动脉粥样硬化模型, 造模成功后随机分为模型对照组、脑栓通胶囊低剂量组、脑栓通胶囊高剂量组。 低剂量组给予脑栓通胶囊 0. 5 g / kg 体重,高剂量组给予脑栓通胶囊 1. 0 g / kg 体重,模型对照组给予等量的蒸馏水。 连续给药 12 周后,红油 O 染色检测整体主动脉内膜斑块,观察比较各组小鼠的炎症相关因子 IL-1β、IL-6、TNF-α、ICAM-1 和 MMP-9 的表达。 结果 药物给予干预后,脑栓通胶囊高剂量组的主动脉斑块面积显著低于模型对照组(P<0. 01)。 与模型对照组相比, 脑栓通胶囊低剂量组能够分别抑制炎症相关因子 IL-1β 和 IL-6 的蛋白表达水平(P<0. 05),脑栓通高剂量组中的 IL-1β、IL-6、TNF-α 和 ICAM-1 表达均有所降低(P<0. 05,P<0. 01)。 MMP-9 的表达与模型对照组比较有降低的趋势,但无统计学意义(P>0. 05)。 结论 脑栓通胶囊可以调节炎症相关因子的表达水平,其治疗动脉粥样硬化的作用机制很可能与该途径有关。

摘要: 目的 探讨蒙药香青兰总黄酮化合物( total flavones of Dracocephalummoldavica L.,TFDM)对 MPTP 诱导帕金森(Parkinson’s disease, PD)模型小鼠的神经保护作用。 方法 建立 MPTP 诱导帕金森病模型,通过转棒实验、爬杆实验评价 TFDM 对 PD 小鼠运动功能的影响;通过 ELISA 检测 TFDM 对氧化应激因子超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达的情况;通过免疫组织化学和 Western blot 检测 TFDM 对酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和凋亡相关蛋白 Caspase-3、Bcl-2、Bax 表达的影响。 结果 行为学评价结果显示,TFDM 治疗显著增加小鼠的下落潜伏期(P<0. 05),明显降低小鼠的爬杆时间(P<0. 05);ELISA 结果显示,TFDM 治疗显著降低 MDA 的含量(P<0. 01),同时 SOD 和 GSH-Px 的表达明显升高(P<0. 05);免疫组织化学和 Western bolt 结果均显示,TFDM 治疗组的 TH、Bcl-2、Bcl-2/ Bax 蛋白表达水平明显上调(P<0. 05),同时 Caspase-3、 Bax 表达水平明显下降(P<0. 05)。 结论 TFDM 对 PD 模型小鼠具有改善运动功能障碍、减轻氧化应激损伤和减少多巴胺能神经元丢失的作用,并可能通过抑制 Caspase-3 蛋白活性、上调 Bcl-2 和下调 Bax 蛋白的表达发挥神经保护作用。

摘要: 目的 研究针刺对失眠大鼠症状的改善及对自发活动的影响,并探讨其可能作用机制。 方法 腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)建立失眠大鼠模型,随机分为失眠组、针刺组和西药组,各 10 只,另设对照组 10 只。 针刺组和西药组分别采用针刺及灌胃地西泮片进行干预,失眠组和对照组固定后灌胃生理盐水,干预 7 d。 旷场实验检测自发活动;戊巴比妥钠协同睡眠实验检测睡眠潜伏期和睡眠时间;RT-qPCR 检测视交叉上核生物钟基因 clock 和 period2(per2)水平;高效液相检测下丘脑 γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)含量;Western blot 检测下丘脑 GAD、GS 蛋白表达水平。 结果 模型组大鼠出现失眠典型症状。 与模型组比较,针刺组和西药组水平运动和垂直 运动得分升高,睡眠潜伏期缩短、睡眠时间延长,视交叉上核 clock、per2 mRNA 相对表达量升高,下丘脑 Glu 水平降低、GABA 水平升高、Glu / GABA 降低,GAD 蛋白相对表达量升高、GS 蛋白相对表达量降低(P<0. 001,P<0. 01,P< 0. 05);针刺组与西药组上述指标比较,差异无统计学意义(P>0. 05)。 结论 针刺对失眠大鼠症状及自发活动具有一定改善作用,可能通过调节 GABA-Gln 发挥作用。

摘要: 目的 探讨基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路七氟醚分娩镇痛对新生鼠缺氧的改善作用。 方法 模型组、七氟醚组孕鼠建立分娩窒息模型,模型组给予 50%体积分数的氧气,七氟醚组给予体积分数 50%的氧气和 2. 5%七氟醚;自然分娩组自然分娩。 评估新生子鼠学习记忆能力,检测血清超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)水平、脑组织海马 CA1 区尼氏小体数目及脑组织 MAPK、B 细胞淋巴瘤-2 基因(Bcl-2)、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA 和蛋白表达量。 结果 与模型组比较,七氟醚组新生子鼠目标象限停留时间延长,穿越平台次数增多,血清 SOD 升高,MDA 降低,海马 CA1 区尼氏小体数目增多,脑组织 Bcl-2 mRNA 和蛋白表达量及 Bcl-2/ Bax 升高,MAPK、Bax、Caspase-3 mRNA 和蛋白表达量降低,差异均有统计学意义(P<0. 05)。 结论 七氟醚分娩镇痛可有效改善新生鼠缺氧缺血脑损伤状况,可能通过抑制 MAPK 信号通路,进而抑制海马神经元损伤,发挥脑保护作用。

摘要: 目的 研究成年树鼩睾丸中维生素 D 代谢酶和维生素 D 受体的转录水平,检测 CYP24A1 的蛋白表达,探索雄性实验树鼩生殖障碍的原因。 方法 选择 2~ 3 岁雄性树鼩,根据个体繁殖档案分为具有成功生育史的正常组,和无生育史的生殖障碍组,每组各 5 只。 手术摘取一侧睾丸,通过病理学观察其组织病理变化;采用实时荧光定量 PCR 检测睾丸组织中维生素 D 受体、维生素 D 代谢酶 mRNA 水平的变化,以蛋白印迹法检测 CYP24A1 的蛋白表达,同时用免疫荧光观察精子 CYP24A1 表达情况。 结果 正常组与生殖障碍组相比曲细精管排列更紧密,生精细胞更多。与正常组相比,生殖障碍组树鼩睾丸组织 VDR、CYP2R1、CYP27A1 mRNA 水平无明显差异(P> 0. 05),而 CYP24A1 在 mRNA 表达水平和蛋白水平都明显低于正常组(P<0. 05)。同时免疫荧光结果显示正常组睾丸来源的精子在其头部、颈部和中段的 CYP24A1 蛋白高表达,而生殖障碍组表现为低表达或不表达。 结论 CYP24A1 与雄性树鼩成功生育有直接联系,提示 CYP24A1 可以作为判断雄性树鼩生育力的重要指标。

摘要: 目的 探讨 α-倒捻子素对环磷酰胺致小鼠免疫抑制模型免疫功能的影响,为后续的机制研究及开发增加免疫功能的新药提供实验依据。 方法 将小鼠随机分成 5 组,每组 10 只:空白对照组、免疫抑制组、α-倒捻子素高剂量组、中剂量组和低剂量组。采用灌胃给药的方法,前 7 d,除空白对照组外,其他 4 组给予环磷酰胺 (CTX)创建免疫低下模型;后 14 d,空白对照组继续灌胃生理盐水,免疫抑制组灌胃玉米油,三个剂量组分别灌胃不同剂量的 α-倒捻子素。末次给药后 24 h 处死小鼠,进行迟发型变态反应(DTH)检测、血清溶血素测定(HC50 )、 巨噬细胞吞噬功能的测定(碳廓清实验)及免疫器官胸腺和脾指数测定、自然杀伤细胞(NK 细胞)活性测定(MTT 法)、外周血白细胞计数的测定,以及脾淋巴细胞增殖实验,研究 α-倒捻子素对小鼠免疫功能的影响。 结果 小鼠免疫抑制模型创建成功。灌胃 α-倒捻子素后,三个剂量组能不同程度提高免疫抑制小鼠胸腺和脾指数、半数溶血值、脾淋巴细胞增殖率、NK 细胞活性,其中高剂量组,总 α-倒捻子素灌胃剂量为 100 mg / ( kg·d),其效果最为突出, 在多个实验中,与免疫抑制组相比,差异极显著,具有统计学意义(P<0. 01);而在迟发型变态反应中,除高剂量组与空白对照组及免疫抑制组比较具有显著差异(P<0. 05),其他剂量组均无统计学意义(P>0. 05);在外周血白细胞计数测定实验中,高剂量组与免疫抑制组比较具有极显著的差异(P<0. 01),其他组均无统计学意义(P>0. 05);在碳廓清实验中,各剂量组与空白对照组、免疫抑制组比较均无统计学意义(P>0. 05)。 结论 倒捻子素对免疫抑制小鼠的免疫功能具有调节作用,其对免疫抑制小鼠免疫功能改善的最适宜剂量更偏向于高剂量组,在一定范围内具有剂量依赖性。

摘要: 目的 探讨脐血单个核细胞(HCMNCs)对急性心肌梗死(AMI)大鼠血管新生的促进作用及机制。 方法 分离 HCMNCs 并用 BrdU 标记,选取 25 只大鼠采用冠状动脉结扎法建立急性心肌梗死大鼠模型,造模成功 20 只随机分为心梗组、HCMNCs 组,各 10 只,另取 10 只为假手术组。建模成功后,HCMNCs 组大鼠心肌梗死周围注入 HCMNCs,假手术组和模型组同部位注入 L-DMEM 培养基。移植 4 周后,超声心动图检测心功能,HE 染色观察心肌病理学变化,BrdU 染色检测移植细胞存活情况,免疫组化染色检测心肌梗死边缘微血管密度( MVD)、 CD31、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,Western blot 法检测心肌组织中 CD31、VEGF 蛋白水平。 结果 与假手术组比较,心梗组和 HCMNCs 组左室收缩末期内径(LVEDs)、左室舒张末期内径(LVEDd)水平升高,左室射血分数 (LVEF)、左室短轴缩短率(FS)水平降低(P<0. 05);与心梗组比较,HCMNCs 组 LVEDs、LVEDd 水平降低,LVEF、FS 水平升高(P<0. 05)。 HE 染色显示,假手术组心肌细胞结构正常,心梗组心肌细胞排列紊乱,有大量炎性细胞浸润;HCMNCs 组心肌细胞结构基本正常。 BrdU 染色显示,假手术组和心梗组均未检测到 BrdU 标记的阳性细胞, HCMNCs 组梗死区可见散在分布的 BrdU 阳性细胞,参与血管壁的组成。与假手术组比较,心梗组和 HCMNCs 组 CD31、VEGF 蛋白光密值及蛋白相对表达量和 MVD 减少(P<0. 05);与心梗组比较,HCMNCs 组 CD31、VEGF 蛋白光密值及蛋白相对表达量和 MVD 增加(P<0. 05)。 结论 HCMNCs 能促进 AMI 大鼠侧支循环建立,诱导血管新生,对缺血性心功能有明显改善作用。

摘要: 目的 石膏制动建立膝骨关节炎模型的不同分期,以求为针灸和中医药的精准治疗提供适当的动物模型。 方法 选用 40 只大耳白兔,随机分为模型 1、2、3、4 组,每组样本量均为 10 只。 均采取左后肢伸直位制动,制动分别为 10 d、20 d、30 d、40 d,观察兔膝关节的行为、形态和病理表现。 结果 模型各组间的 Lequesne MG 行为学评分、JessicaBadendick 大体形态评分变化显著(P<0. 05),病理检测结果各组阶段性、差异性明显。 结论 在膝关节骨性关节炎的造模过程中,各组间差别显著,根据其各阶段的最显著表现,可大致把疾病分为初期、早期、 中期、晚期,在准确辨期的基础上加以针灸或中医药的干预可能有效治疗该病。

摘要: 目的 探讨微小 RNA( miR) -20a-5p 调节血管内皮生长因子(VEGF) 通路在氧诱导视网膜病变 (OIR)小鼠中的作用机制。 方法 实验分为正常组、模型组、高氧对照组、miR-20a-5p 高表达组,每组 24 只。 除正常组外,其余组小鼠在出生后第 7 天置于氧浓度(75. 00±2. 00)%氧箱中建立 OIR 小鼠模型,连续高氧环境 5 d 后置于常氧中饲养。 高氧环境结束前1 d,高氧对照组玻璃体腔内注射 1 μL 磷酸缓冲盐溶液( PBS) ,miR-20a-5p 高表达组玻璃体腔内注射 1 μL miR-20a-5p 激动剂( miR-20a-5p agomir) ( 1 μmol / L) ,模型组不进行任何处理。 正常组一直置于空气中正常饲养。 高氧结束后各组小鼠正常空气再饲养 5 d 进行实验。 实时荧光定量 PCR ( qRT-PCR)检测视网膜组织 miR-20a-5p、VEGF、血管内皮生长因子受体(VEGFR) -1、VEGFR-2 表达情况;视网膜铺片观察视网膜血管形态;苏木精-伊红(HE)染色计数视网膜新生血管内皮细胞核情况;免疫组化检测视网膜组织中 VEGF 阳性细胞情况。 结果 模型组和高氧对照组在出生第 17 天自视盘向周围发出的放射状大血管迂回、不规则扩张,出现大量新生血管,且新生血管结构及分布紊乱,周边毛细血管网闭塞;miR-20a-5p 高表达组 相较模型组和高氧对照组在出生第 17 天自视盘向周围发出的放射状大血管迂回不明显,血管不规则扩张现象减轻,新生血管明显减少。 与正常组相比,模型组、高氧对照组视网膜组织中 miR-20a-5p 水平降低(P<0. 05) ,视网膜血管内皮细胞核数量、VEGF 蛋白阳性面积百分比、视网膜组织中 VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2 mRNA 表达水平升高(P<0. 05) ;分别与模型组、高氧对照组相比,miR-20a-5p 高表达组视网膜组织中 miR-20a-5p 水平升高(P <0. 05) ,视网膜血管内皮细胞核数量、VEGF 蛋白阳性面积百分比、视网膜组织中 VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2 mRNA 表达水平降低(P<0. 05) 。 结论 升高 miR-20a-5p 可抑制 VEGF 通路从而减少 OIR 小鼠视网膜血管新生,实现对 OIR 小鼠视网膜的保护。

摘要: 目的 探索洛铂在结肠癌细胞中的抗肿瘤活性,阐明潜在分子机制,为临床应用提供理论证据。 方法 体外培养结肠癌细胞 SW480,用 MTT 比色法和克隆形成实验检测不同浓度的洛铂分别处理结肠癌 SW480 细胞株 24、48 h 和 72 h 后,对结肠癌细胞增殖活性的抑制作用;用流式细胞仪检测不同浓度梯度的洛铂对结肠癌 SW480 细胞株凋亡率的影响;采用 Western blot 检测洛铂对 SW480 细胞凋亡相关蛋白 CASPASE-3、BAD、BCL-2 的表达;添加 AKT 抑制剂及激动剂,采用 Western blot 检测 CASPASE3、AKT、pAKT、BAD、p-BAD 和 BCL-2 表达量,探讨洛铂促结肠癌细胞凋亡的作用机制。 结果 洛铂能显著抑制体外培养的 SW480 细胞的生长,呈现为时间剂量依赖型;洛铂可诱导结肠癌 SW480 细胞凋亡,且随着洛铂浓度的增加,结肠癌 SW480 细胞凋亡率显著提高,结果具有统计学意义。 洛铂可下调结肠癌细胞抑凋亡基因 BCL-2 蛋白表达,上调促凋亡基因 BAD 和 CASPASE-3 蛋白表达量;添加 AKT 抑制剂 MK-2206 后,pAKT、p-BAD 和 BCL-2 蛋白表达显著降低,CASPASE3 蛋白表达显著升高,促进了细胞凋亡,结果具有统计学差异。 添加 AKT 激动剂 SC97 处理后,pAKT、p-BAD 和 BCL-2 蛋白表达显著上调, CASPASE3 蛋白表达显著下调,抑制了细胞凋亡,结果具有统计学意义。 结论 洛铂能显著抑制人结肠癌 SW480 细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,洛铂可能通过 AKT/ BCL-2/ BAD 信号通路发挥促细胞凋亡作用,是一种有效的抗结肠癌药物。

摘要: 目的 探索短期低频电刺激对长距离陈旧性(8 周)周围神经缺损再生能力的影响。 方法 切除一段成年雌性 SD 大鼠左侧坐骨神经,饲养 8 周后,修剪近、远侧神经断端制成大鼠坐骨神经长距离陈旧性缺损模型。 实验组切取对侧正常坐骨神经桥接缺损并施以短期低频电刺激,对照组同样桥接但不予电刺激。 根据实验需要继续饲养不同时间后取材,利用神经三色染色、免疫组织化学染色、免疫荧光染色, 逆行示踪、电镜观察等组织学方法观察内源性神经因子表达及神经再生情况。 结果 免疫荧光染色显示实验组内源性神经因子的表达相对较早也较明显,但逆行示踪实验在两组动物中皆观察到类似数量和形态的神经元标记结果,再生神经组织的三色染色、免疫荧光染色及电镜观察等也在两组动物中观察到相似形态的再生神经纤维,未发现实验组相对对照组有更好的神经再生表现,靶肌肉的相对湿重比及运动终板的组织化学染色亦未观察到明显优势。 结论 术中短期低频电刺激能对缺损超过 8 周的长距离陈旧性周围神经缺损发挥有限的影响。

摘要: 目的 观察胰激肽原酶对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜病变的保护作用,并探究其作用机制。 方法 将 60 只 SPF 级大鼠随机分为空白组、模型组和治疗组,每组 20 只。模型组和治疗组通过单次腹腔注射 60 mg / kg 链脲佐菌素(streptozocin,STZ)建立 DM 模型,空白组腹腔注射等量 0. 1 moL/ L 枸橼酸钠。治疗组腹腔注射胰激肽原酶 0. 8 U 治疗,空白组和模型组腹腔注射 0. 2 mL 生理盐水,每天 1 次,连续 2 周。 HE 染色观察大鼠视网膜神经节细胞( retinal ganglion cells,RGCs)病理学变化并计数;TUNEL 法检测 RGCs 凋亡情况;ELISA 试剂盒检测视网膜组织 SOD 活力和 MDA 含量;qRT-PCR 法和 Western blot 法检测视网膜组织 Notch-1、Hes-1 mRNA 和蛋白表达。 结果 空白组大鼠视网膜组织各层结构清晰,RGCs 细胞核清晰有序,偶见凋亡细胞;与空白组比较,模型组 RGCs 排列紊乱,细胞核稀疏,RGCs 数量显著减少,凋亡率升高,视网膜组织 SOD 水平降低,MDA 含量升高(P<0. 05);与模型组比较,治疗组视网膜组织各层结构清晰,RGCs 细胞核清晰规整,RGCs 层细胞数量增加,凋亡率降低,视网膜组织 SOD 活力提高,MDA 含量降低(P<0. 05)。 qRT-PCR 和 Western blot 检测结果显示,与空白组比较, 模型组视网膜组织 Notch1、Hes1 mRNA 和蛋白表达水平降低(P<0. 05);与模型组比较,治疗组视网膜组织 Notch1、 Hes1 mRNA 和蛋白表达水平升高(P<0. 05)。 结论 胰激肽原酶对 DM 大鼠视网膜病变具有保护和改善作用,其作用机制可能与激活 Notch1 / Hes-1 信号通路的表达有关。

摘要: 目的 建立 Marcksl1 基因敲除小鼠,初步探究该基因缺失对造血系统发育的影响。 方法 利用 CRISPR/ Cas9 技术构建 Marcksl1 基因敲除小鼠,通过 PCR 技术以及 Sanger 测序方法鉴定小鼠基因型。 通过将敲除小鼠与野生型小鼠杂交,分析敲除小鼠的传代情况。 通过杂合子小鼠相互杂交,分析发育不同阶段纯合子、杂合子和野生型小鼠的占比。 分离小鼠胎肝,利用血常规以及流式细胞术分析该基因缺失对造血系统的影响。 结果 PCR 结合 Sanger 测序结果表明 Marcksl1 基因敲除小鼠构建成功。对不同阶段胚胎小鼠基因型鉴定和数量统计,发现小鼠 Marcksl1 基因敲除造成的胚胎死亡发生于胚胎发育后期。通过血常规与流式细胞分析,结果表明 Marcksl1 基因缺失在 E15. 5 d 时不影响白细胞,红细胞以及血小板数量,但胎肝中造血干细胞比例显著增多。 结论 本研究成功建立 Marcksl1 基因敲除小鼠,并发现该基因缺失影响造血干细胞占比。本研究为进一步了解该基因在胚胎发育和造血系统中的功能提供动物模型。

摘要: 目的 利用患者来源肺鳞癌( lung squamous cell carcinoma, LSCC)组织建立裸鼠皮下肿瘤模型,确定安罗替尼(Anlotinib)对射频消融(radiofrequency ablation, RFA)肺鳞癌皮下肿瘤组织的增敏作用。 方法 收集患者来源的 LSCC 组织,通过定量 PCR(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)方法检测 LSCC 中 Anlotinib 的作用靶标表达情况。 随后构建裸鼠皮下肿瘤模型,Anlotinib 口服灌胃给药,对裸鼠皮下肿瘤进行射频消融治疗 (Radiofrequency ablation, RFA) 处理, 再用 qPCR 方法检测 Anlotinib 对 LSCC 中上皮间质转化 ( Epithelial- mesenchymal transition, EMT)相关因子表达的影响。 结果 利用患者来源的 LSCC 组织获得了裸鼠皮下肿瘤组织, 其中 Anlotinib 的作用靶标有明确表达;RFA 能够有效杀伤 LSCC 在裸鼠皮下的肿瘤组织,Anlotinib 能够通过抑制肿瘤组织中的 EMT 作用发挥对 RFA 杀伤 LSCC 组织的增敏作用。 结论 安罗替尼能够在裸鼠模型中上调 RFA 对患者来源 LSCC 组织的杀伤作用,能够为 LSCC 诊疗提供新的启示。

摘要: 目的 基于 SDF-1/ CXCR4 信号通路探讨新安鼻渊方流浸膏对急性鼻窦炎大鼠嗅上皮神经元细胞凋亡的影响。 方法 40 只 SD 大鼠分为对照组,模型组,治疗组和抑制剂组,每组 10 只。 除对照组外,其余各组大鼠采用金黄色葡萄球菌悬液注射法构建急性鼻窦炎模型,对照组予以无菌生理盐水代替。 造模后第 7 天开始采用灌胃方式连续给药 1 周,每天 1 次,治疗组给药新安鼻渊方流浸膏按照大鼠体重计算(7 g / kg),抑制剂组给予 1 mg / kg CXCR4 特异性抑制剂 AMD3100,对照组以及模型组灌胃等量的生理盐水。观测大鼠鼻窦炎病理特征并进行评分以鉴定模型的建立,通过酶联免疫法检测各组大鼠嗅上皮组织的炎性因子 TNF-α 以及 IL-1β 的表达情况, 通过 TUNEL 法检测各组大鼠嗅上皮组织中细胞凋亡数量,免疫组化检测 SDF-1、CXCR4 的表达,采用 Western blot 检测各组大鼠嗅上皮神经元细胞中促凋亡蛋白 cleaved caspase 3、Bax 以及抗凋亡蛋白 Bcl-2 的表达。 结果 模型组大鼠鼻窦炎病理评分显著高于对照组 (P<0. 05),治疗组相比与模型组显著降低(P<0. 05)。与对照组相比,模型组的炎性因子表达明显升高 (P<0. 05),治疗组显著低于模型组 (P<0. 05)。 TUNEL 染色结果显示:与对照组相比,模型组大鼠嗅上皮神经元细胞凋亡显著增加 (P<0. 05), 治疗组以及抑制剂组大鼠嗅上皮神经元细胞的凋亡 显著低于模型组(P<0. 05)。 与对照组相比,模型组抗凋亡蛋白 Bcl-2、SDF-1 以及 CXCR4 的表达明显降低 (P< 0. 05),促凋亡蛋白 cleaved caspase 3、Bax 显著增加(P<0. 05),治疗组相比于模型组抗凋亡蛋白 Bcl-2、SDF-1 以及 CXCR4 的表达明显增加 (P<0. 05),促凋亡蛋白 cleaved caspase 3、Bax 显著降低(P<0. 05)。 结论 新安鼻渊方流浸膏可改善急性鼻窦炎大鼠嗅上神经元细胞的凋亡,该作用机制可能与抑制 SDF-1/ CXCR4 信号通路密切相关。

摘要: 目的 为大鼠温针灸治疗提供一种操作简便的固定装置和方法。 方法 用旧布料制作鼠衣,利用大鼠喜暗喜钻洞习性使其进入鼠衣并固定;用 S 形挂钩将固定好的大鼠悬挂于布带条上,使其处于荡秋千式悬挂状态,治疗部位穴位充分暴露;根据选穴,对大鼠进行温针灸治疗;从操作时间、动物反应等方面比较“鼠衣秋千式” 和束缚固定法。 结果 与束缚法相比,“鼠衣秋千式”固定法只需 1 人即可完成操作,固定单只大鼠所需时间显著缩短(P<0. 01);大鼠在固定、悬挂以及温针灸治疗过程应激反应较小,无烫伤、死亡等情况发生,治疗中掉针大鼠所占比例为 10. 00%,而束缚组为 60. 00%;取穴方便,温针灸治疗能够顺利进行。 结论 “鼠衣秋千式”大鼠温针灸固定方法与其他固定方法相比,具有能减少大鼠应激反应、节约人力、操作简便、固定装置大小易调节等优点,是一种较为适用于各种体型的大鼠四肢部位温针灸的固定方法。

摘要:与 microRNA(miRNA/ miR)在疾病诊断和治疗中应用有关的研究日益增多,但是在心血管领域,目前大多数的研究局限于 miRNA 在左心室的应用,很少涉及右心室。 因此,本综述回顾了最新的文献,总结 miRNA 在右心疾病中的应用。我们首先回顾 miRNA 腔室特异性的表达以及在右心相关疾病中的应用;其次,重点讨论了循环 miRNA 在肺动脉高压和右心室衰竭患者诊断和预后中的应用现状;最后,介绍使用 miRNA 调节剂治疗肺动脉高压的潜力及其对右心室产生的有益影响。 我们希望,随着对右心室 miRNA 研究的不断深入,最终将有助于改善肺动脉高压和右心室衰竭的治疗现状。

摘要:中空纤维肿瘤模型(hollow fiber tumor model)或中空纤维测定法(Hollow Fiber Assay,HFA)是由美国国家癌症研究所(Nationa Cancer Institute,NCI)设计的一种新型抗癌药物初步筛选模型,可以简单快速、准确可行地进行初步体内疗效的评估。 近年来已被广泛应用于抗肿瘤药物的研发过程中,并且有了新的改良优化和应用。 本文系统综述了中空纤维肿瘤模型在抗肿瘤药物筛选方面的优势特点以及近 10 年最新应用进展,研究认为,HFA 在抗肿瘤药物研究中占据了越来越重要的地位,HFA 的改良模型在个体化癌症治疗和机制研究上有着广阔的应用前景。

摘要:糖皮质激素是临床常用药物,在各种疾病治疗中扮演着重要角色。 自噬是细胞内环境稳态的维持者,近年来许多研究发现使用糖皮质激素可通过调节细胞自噬水平的变化达到治疗疾病的目的,但也会造成药物副作用产生。 本文就糖皮质激素对自噬水平影响及糖皮质激素如何通过调节自噬水平达到疾病治疗目的进行综述,为糖皮质激素在治疗疾病过程中减轻或减少副作用提供新思路。