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苗雨润 , 李明学 , 李娜 , 王文广 , 匡德宣 , 仝品芬 , 孙晓梅 , 罕园园 , 陆彩霞 , 代解杰
2019, 29(8):1-10. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 001
摘要:目的 获取树鼩β-淀粉样前体蛋白切割酶BACE1 (beta-site APP cleaving enzyme-1)的全长编码序列并进行分子特征分析,为开展AD 疾病的机制研究提供依据。方法 提取树鼩大脑及其他脏器组织总RNA,通过RACE (rapid-amplification of cDNA ends)实验得到的序列与中间序列进行拼接得到树鼩BACE1 全长编码序列,使用DNAMAN、MEGA 10. 0. 5、PyMOL 等生物信息学软件,对其序列和分子特征进行分析。结果 树鼩BACE1 除在脑组织表达外,在外周组织也有表达。树鼩BACE1 核酸序列和蛋白质分子整体结构与人类高度相似,树鼩与人类的BACE1 蛋白在膜内结构区均存在一个高度保守的DXXLL 的ACDL 分选内吞基序,两者具有相同的胞外域、跨膜域及胞内域,但树鼩BACE1 蛋白质相比人少一个潜在的乙酰基化位点,并且在折叠结构上存在差异。结论 本研究获得树鼩BACE1 基因完整编码序列,其蛋白基本结构与人的基本相似,提示树鼩可能是作为研究AD 病理改变或药物研究潜在的理想模型。
黄鑫 , 古文鹏 , 黎晓慧 , 李娜 , 贾杰 , 李明学 , 代解杰
2019, 29(8):11-16. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 002
摘要:目的 检测高级别肉瘤的树鼩肠道微生物菌群结构,为探讨肠道微生物菌群结构的改变与肿瘤发生的相关性提供科学依据。方法 选取3 例患有恶性高级别肉瘤树鼩粪便为CA 组,6 例健康树鼩粪便为对照NO组。通过16SV3+4 区引物进行细菌多样性的鉴定,通过对Reads 剪切过滤,OTUs 聚类,并进行物种注释及丰度分析,得出两组树鼩肠道微生物结构、丰度以及多样性。结果 比较CA 组和NO 组树鼩肠道微生物结构,多样性指数Chao1 指数值、ACE 指数值、Shannon 指数值差异无统计学意义( P >0. 05)。NO 组的树鼩肠道菌群OTUs 为640种,而CA 组为494 种,健康树鼩肠道菌群结构呈多样性。在门水平上比较,其中CA 组中螺旋体门(Spirochaetes)丰度为0. 03%,低于NO 组(丰度为0. 12%),且差异有统计学意义( P <0. 05);CA 组厚壁菌门(Firmicutes)丰度为77. 79%高于NO 组(47. 65%),但差异无统计学意义;CA 组的拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度为0. 75%低于NO 组(8. 31%),但差异无统计学意义。CA 组中的乳杆菌属(lactobacillus)是具有统计学意义的生物标识。结论 患有高级别肉瘤树鼩的肠道菌群结构丰度和多样性低于健康树鼩,肠道菌群的结构改变及厚壁菌门含量增加可能增加恶性肿瘤的发生。
王艺宁 , 刘新梦 , 章秀林 , 何洋 , 张玮 , 杜小燕 , 李长龙 , 陈振文
2019, 29(8):17-22. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 003
摘要:目的 建立封闭群实验用鸽微卫星DNA 遗传检测方法?方法 通过文献检索和SSR Hunter 软件筛选,选取和设计了鸽微卫星位点共61 个?利用鸽基因组样本进行PCR 扩增及条件优化?利用琼脂糖凝胶电泳结果进行初筛,获得等位基因丰富?扩增条带清晰的20 个微卫星位点?通过STR 扫描比较分析,选取适用于实验用鸽遗传质量检测的位点共16 个并应用于两个封闭群鸽群体?结果 利用筛选出的16 个微卫星DNA 位点,初步建立封闭群实验用鸽的遗传检测方法?结论 初步建立了基于微卫星DNA 的封闭群实验用鸽遗传检测方法,为封闭群实验用鸽种群遗传质量控制奠定基础?
崔爱缺 , 宫昳頔 , 章秀林 , 何洋 , 张玮 , 韩凌霞 , 陈继兰 , 李长龙 , 陈洪岩 , 陈振文
2019, 29(8):23-30. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 004
摘要:目的 建立实验用鸡微卫星DNA 遗传检测方法?方法 通过文献检索分析初步筛选出72 个微卫星位点,利用PCR 和STR 扫描确定扩增效果好?稳定性强的位点?初步确定适合封闭群和单倍型实验用鸡遗传检测的位点组合,并在3 个封闭群实验用鸡和3 个单倍型实验用鸡的群体进行应用?结果 初步确定适用于封闭群实验用鸡遗传检测的28 个微卫星位点组合和适用于单倍型实验用鸡遗传检测的14 个微卫星位点组合?结论 初步建立了实验用鸡的遗传检测方法?
2019, 29(8):31-36. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 005
摘要:目的 人的ABO 血型常规免疫学检测方法不适用于实验猴猕猴血型检测,而实验猴血型鉴定在器官移植等研究中必不可少?本研究目的是建立一个快速?可靠的恒河猴与食蟹猴ABO 血型核酸鉴定方法?方法本室建立了一种新的ABO 血型的分子学检测方法,利用竞争性等位基因PCR(KASP)技术,通过识别与血型密切相关功能基因的2 个SNP 位点上的碱基,对恒河猴与食蟹猴血型进行分型,并通过设计2 个SNP 位点外围的普通PCR 引物,对KASP 方法鉴定出的血型样本进行Sanger 测序鉴定?结果 比对了15 份用Taqman PCR 方法已确定血型的食蟹猴全血核酸样本,新建立的KASP 分型结果与原血型结果完全一致,为了保证KASP 方法鉴定结果的准确性,实验人员用新建立的普通PCR 方法通过Sanger 测序验证了KASP 方法与测序结果完全一致?为了对新建的KASP 方法重复性进行验证,选取了已知血型的6 份实验猴全血,每份血样做5 个重复,结果显示该方法有极好的重复性?进一步用新建的KASP 方法检测了51 份临床样本,其中食蟹猴样本38 份,恒河猴样本13 份,同一样本的2 个位点的血型结果完全一致,其中A 型血9 份(17. 6%),B 型血19 份(37. 3%),AB 型血23 份(45. 1%),未检出O 型血?同时从A 型?B 型?AB 型的临床样本中,各型分别选了5 个样本,进行普通PCR 扩增及测序分析,证明2个SNP 位点上的序列与KASP 分型结果一致?结论 新建的KASP 血型鉴定方法准确性高,可用于实验恒河猴与食蟹猴的ABO 血型的快速检测?该方法相较于传统的血清学或测序方法,简单快捷,经济可靠,结果易于判读,同时对样本的要求比传统的血清学方法低,新鲜或存放较久的全血?唾液或核酸等都可以用于检测?
王思齐 , 包凯帆 , 王晓钰 , 王霄彤 , 袁为远 , 姚露 , 许一凡 , 洪敏
2019, 29(8):37-43. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 006
摘要:目的 中医药通过调节菌群治疗疾病的机制逐渐被发现,探索建立抗生素造成呼吸道菌群紊乱的哮喘模型,以期为研究中医药对呼吸道菌群及哮喘的作用提供合适的模型?方法 40 只SPF 级雄性BALB/ c 小鼠随机分为以下4 组:正常对照组?哮喘模型组?滴鼻抗生素哮喘模型组?腹腔注射给予抗生素哮喘模型组?采用屋尘螨(house dust mite, HDM)建立哮喘模型,分别通过滴鼻或腹腔注射给予抗生素头孢哌酮舒巴坦钠(cefoperazonesulbactam sodium, CFP),观察抗生素对HDM 诱导的小鼠哮喘的影响?24 d 后小鼠眼眦取血,对各组小鼠的哮喘指标:血中嗜酸性粒细胞(eosinophils, EOS)进行计数,检测血清中IgE 水平,小鼠肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavagefluid, BALF)及肺组织匀浆中TH2 型细胞因子IL-5 和IL-13 水平,小鼠肺组织进行HE?Masson?PAS 染色,观察病理组织学变化?结果 在哮喘模型组小鼠血中EOS?血清中IgE?BALF 及肺组织匀浆中IL-5 和IL-13 水平较空白组显著升高( P <0. 05),滴鼻给予抗生素组较哮喘模型组有更明显的上升( P <0. 05),病理组织学观察也发现滴鼻给予抗生素造模组的炎症浸润?细胞外基质沉积及粘液分泌都更为严重,而腹腔注射抗生素组的相关哮喘指标较模型组无显著变化?结论 利用抗生素头孢哌酮舒巴坦钠滴鼻给予小鼠能加重HDM 诱导的小鼠哮喘,提示呼吸道给予抗生素可能会导致呼吸道菌群紊乱进而加重哮喘的发生,此模型可以作为不具备饲养GF 小鼠的条件下研究中医药调节呼吸道菌群与哮喘的工具?
姜文清 , 戚艳 , 沙若荷 , 章欣 , 陈静越 , 潘伟 , 孙芬芬
2019, 29(8):44-49. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 007
摘要:目的 研究临床护肝药—多烯磷脂酰胆碱(polyene phosphatidyl choline,PPC)对LPS 诱导巨噬细胞(macrophages, M?)炎症的调控作用以及第10 号染色体上缺失的磷酸酶-张力蛋白同系物(phosphate and tensionhomology deleted on chromosome ten,PTEN)在上述过程中的作用,初步明确PPC 的抗炎效果及机制?方法 将Raw264. 7 细胞铺于细胞培养板, 分别加入PPC(20 μg/ mL)?LPS(100 ng/ mL)?PPC(20 μg/ mL) + LPS(100 ng/mL)?PPC(20 μg/ mL)+ SF1670(PTEN 抑制剂,150 ng/ mL)?PPC(20 μg/ mL)+ LPS(100 ng/ mL)+ SF1670(150 ng/mL)以及等体积PBS,培养24 h 后,收集细胞沉淀及培养上清,ELISA 法检测上清中IL-6?IL-10?TNF-α 含量;RTPCR检测细胞中IL-6 的mRNA 相对表达量;Western blot 检测细胞中PTEN 的蛋白表达情况?结果 相比PBS 组,PPC 组TNF-α?IL-6?IL-10 分泌量无明显差异;相比LPS 组,PPC+LPS 组培养上清中TNF-α?IL-6 水平明显降低( P <0. 001),而IL-10 水平明显升高( P <0. 001)?相比LPS 组,PPC+LPS 组PTEN 蛋白表达量明显上高?相比PPC 组,PPC+SF1670 组TNF-α?IL-6 分泌或表达量明显升高( P <0. 05);相比PPC+LPS 组,PPC+LPS+SF1670 组TNF-α?IL-6分泌或表达水平明显升高( P <0. 05),而IL-10 分泌量明显降低( P <0. 05)?结论 PPC 可通过上调PTEN 表达以抑制LPS 诱导M? 炎症反应?
丛日旭 , 佟巍 , 向志光 , 张丽芳 , 刘先菊 , 阮研硕 , 郭智 , 刘云波
2019, 29(8):50-54. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 008
摘要:目的 建立成年狨猴肾脏细胞体外培养的培养体系,并将Cas9 编辑系统初步应用于所培养的狨猴肾脏细胞,建立检测sgRNA 切割活性的体系?方法 取成年的狨猴肾脏,采用贴壁法?消化法得到狨猴肾脏细胞?对细胞进行生长曲线测定?转染试剂(Viafect 和Lipo2000)及抗性(嘌呤霉素和杀稻瘟菌素)浓度筛选,将SIRT1 的sgRNA 质粒和Cas9 质粒共转染狨猴细胞,提取基因组并对基因修饰目的片段扩增,并将扩增产物进行测序?结果建立狨猴肾脏细胞体外培养体系;ViaFect 转染试剂转染率大于60%;细胞抗性筛选适宜浓度嘌呤霉素4 μg/ mL,杀稻瘟菌素8 μg/ mL;测序结果表明,从sgRNA 的PAM 序列附近开始出现突变峰,证明sgRNA 成功引入突变?结论 成功建立了狨猴肾脏细胞的体外培养?细胞转染和抗性筛选体系;CRISPR/ Cas9 可以用于狨猴肾脏细胞编辑,为基因修饰狨猴靶点选择提供依据?
解一舟 , 李玉珍 , 朱慧 , 史英翔 , 金剑 , 李宏强
2019, 29(8):55-60. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 009
摘要:目的 复方中药金龙胶囊(JLC)提取物及其制备的粗多糖?粗蛋白的抗脑肿瘤效果及安全性评价?方法 运用外科原位接种(surgical orthotopic implantation)技术,将肿瘤块种植到裸小鼠颅内,建立小鼠原位模型?用FluorVivo Model 100 荧光成像仪对所有小鼠的脑肿瘤进行非侵袭性的实时成像观察?通过对空白对照组(无肿瘤且溶剂为溶媒)?阴性对照组(溶媒)?阳性对照组(替莫唑胺32 mg/ kg)?JLC 提取物低(750 mg/ kg)?中(1200 mg/kg)?高剂量组(1500 mg/ kg)及粗多糖(100 mg/ kg)?粗蛋白组(100 mg/ kg)的肿瘤抑制率进行比较,评价经灌胃给予金龙胶囊提取物对小鼠原位模型肿瘤生长的影响?结果 给药25 d 后,JLC 低?中剂量组肿瘤抑制率均为34. 63%,与阴性对照组相比差异无显著性;粗多糖组和粗蛋白组肿瘤抑制率分别为22. 26%?29. 01%,肿瘤重量分别为(0. 178±0. 048)g?(0. 144±0. 047)g,与阴性对照组相比差异无显著性;阳性对照组和高剂量组,抑制率分别为99. 57%?61. 90%,肿瘤重量分别为(0. 001±0. 001)g?(0. 088±0. 045)g,差异有显著性( P < 0. 01, P < 0. 05)?结论 本文研究结果表明,JLC 粗多糖及粗蛋白有一定的脑胶质瘤抑制作用?肿瘤负荷和药物治疗可能为影响小鼠体重正常增长的因素;在现有剂量下,未发现明显的急性毒性反应( P > 0. 05)?
2019, 29(8):61-67. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 010
摘要:目的 观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC6)在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达的临床意义及其靶向HDAC6 信号对A549 细胞发生上皮间质转化(EMT)的作用机制?方法 采用免疫组织化学染色法检测HDAC6 和E-钙粘蛋白(E-ca)在NSCLC 中的表达并分析其临床病理意义;采用转化生长因子(TGF)-β1 诱导A549 细胞,并予以HDAC6?Rho 相关卷曲螺旋激酶(ROCK)和细胞外信号调节激酶(ERK)信号抑制剂预处理?CCK-8 法检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移能力,transwell 实验检测细胞侵袭能力,免疫印迹法检测E-cadherin?波形蛋白(vimentin)?α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和HDAC6 的表达?结果 HDAC6 在NSCLC 组织中高表达,与分化程度和淋巴结转移关系密切,且与E-ca 表达呈负相关?TGF-β1 能够诱导A549 细胞发生EMT,即vimentin?α-SMA 表达上调,而E-ca 表达下调;予以HDAC6?ROCK 和ERK 信号抑制剂能够显著抑制该变化?结论 HDAC6 在NSCLC 发生?发展中可能起到重要的调控作用,与肿瘤的EMT 关系密切,其作用与ROCK 和ERK 信号的调控有关?
2019, 29(8):68-74. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 011
摘要:目的 探讨葛根素(puerarin, Pue)对D-氨基半乳糖所致小鼠急性肝衰竭(ALF)的保护作用及初步观察其作用机制?方法 将50 只昆明小鼠随机分为5 组,造模前两周Pue 组?LY294002 组(LY 组)?Pue + LY 组尾部静脉注射300 mg/ kg Pue?10 mg/ kg LY 和300 mg/ kg Pue + 10 mg/ kg LY,每天1 次,正常对照组和模型组给予等量无菌生理盐水,末次给药后禁食24 h,除正常组外,其他组腹腔注射半乳糖构建ALF 模型,正常对照组注射等量无菌生理盐水?生化反应仪检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)?天门冬氨酸基转移酶(AST)?总胆红素(TBil)水平,试剂盒法检测肝组织中丙二醛(MDA)?超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 含量;HE染色?TUNEL 染色和蛋白免疫印迹法分别检测小鼠肝脏组织的病理学变化?肝细胞凋亡数量和P-Akt?P-GSK-3β?cleaved caspase-3 蛋白表达水平?结果 与正常对照组相比,模型组小鼠肝细胞凋亡数量,血清ALT?AST?Tbil 水平,肝组织MDA 含量及cleaved caspase-3 蛋白表达水平明显升高( P < 0. 05),SOD?GSH-Px 含量及P-Akt?P-GSK-3β蛋白表达水平明显下降( P <0. 05);Pue 组治疗后,与模型组相比,Pue 组中各指标的变化均明显改善( P <0. 05),LY组?Pue+LY 组与模型组相比组间差异无统计学意义( P >0. 05)?结论 Pue 可能通过激活PI3K/ Akt 信号通路,从而减轻肝功能的损伤程度,发挥对D-氨基半乳糖诱导的ALF 小鼠肝脏的保护作用?
2019, 29(8):75-78. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 012
摘要:目的 研究金钗石斛总生物碱(Dendrobium nobile Lindl. alkaloids,DNLA)对糖尿病合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠胰岛素抵抗的影响?方法 高脂高糖饲料喂养SD 大鼠4 周后给予腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ) 40 mg/ kg 制备糖尿病合并NAFLD 大鼠模型?成模大鼠随机分为模型组?DNLA 20 mg/ kg 组?DNLA 40 mg/ kg 组?DNLA 80 mg/ kg 组及二甲双胍100 mg/ kg 组,每组10 只?同步设立10 只SD 大鼠作为空白对照?灌胃给药4 周后腹主动脉取血检测大鼠空腹血糖(FPG)?空腹胰岛素(FINS) 水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),H.E.染色观察肝脏及胰腺组织形态学变化,免疫组化检测胰岛中胰岛素达?结果 模型大鼠FPG?FINS?HOMA-IR 明显升高( P < 0. 05);与模型组比较,DNLA 40 mg/ kg 组?DNLA 80 mg/ kg 组FPG?FINS?HOMA-IR明显下降( P < 0. 05)?糖尿病大鼠肝脏组织发生脂肪变性,胰腺组织H.E.染色镜下见胰岛萎缩,岛内细胞数减少;DNLA 40 mg/ kg 组?DNLA 80 mg/ kg 组与模型组比较,肝脏脂肪变性程度减轻,胰岛内细胞数较多,免疫组化检测糖尿病合并NAFLD 大鼠胰岛内胰岛素表达明显减少,与模型组比较,DNLA 40 mg/ kg 组?DNLA 80 mg/ kg 组胰岛内胰岛素表达有不同程度增加?结论 DNLA 可降低糖尿病合并NAFLD 大鼠血糖及减轻肝脏脂肪变性,机制与改善胰岛素抵抗有关?
2019, 29(8):79-87. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 013
摘要:目的 探究大鼠经截肢创伤后心脏电生理?心功能变化情况及其与内皮型一氧化氮合酶/ 一氧化氮(eNOS/ NO)通路的关系?方法 建立左后肢创伤模型,将大鼠分为正常组(仅麻醉)?截肢对照组?截肢0. 25 h?截肢0. 5 h?截肢0. 75 h?截肢1. 5 h,每组12 只?采用心电图(ECG)检测大鼠心率?QT 间期?PR 间期变化;超声检测左室射血分数(LVEF)?左室短轴缩短率(LVFS);右侧颈动脉插管检测左心室收缩压(LVSP)?左心室内压升高最高速率(+dp/ dt max)?左心室内压降低最高速率(-dp/ dtmax);试剂盒检测血清和心肌组织丙二醛(MDA)?超氧化物歧化酶(SOD)?一氧化氮(NO)?髓过氧化物酶(MPO)?肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)和白介素-6(IL-6)水平;苏木精—伊红染色法(HE)染色观察心肌组织形态学变化;末端标记法(TUNEL)染色法观察心肌组织细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测心肌组织中eNOS?B 淋巴细胞瘤-2 蛋白(Bcl-2)?Bcl-2 相关X 蛋白(Bax)蛋白表达?结果 与正常组相比,截肢0. 5 h,截肢0. 75 h 心率升高?QT 间期降低,LVSP?+dp/ dmax?-dp/ dmax?LVEF?LVFS 降低,MPO?MDA?TNF-ɑ?IL-6 升高,SOD 降低,细胞排列疏松呈坏死状,伴有大量炎性细胞浸润;心肌细胞凋亡指数升高,心肌组织Bcl-2 蛋白表达降低?Bax 蛋白表达升高,NO 水平?eNOS 蛋白表达降低,呈时间依赖性,差异具有显著性( P <0. 05);与截肢0. 75 h 相比,截肢1. 5 h 心率降低,QT 间期?PR 间期升高,LVSP?+dp/ dmax?-dp/ dmax?LVEF?LVFS升高,MPO?MDA?SOD?TNF-ɑ?IL-6 降低,心肌病理损伤程度有所减轻;心肌细胞凋亡指数降低,Bcl-2 蛋白表达升高,Bax 蛋白表达降低,NO 水平?eNOS 蛋白表达升高,差异具有显著性( P <0. 05)?结论 截肢手术创伤可使大鼠发生缺血性心电图改变,心功能受损及过度氧化应激?炎症损伤,其机制可能与eNOS/ NO 通路受到抑制有关?
孙建海 , 马燕凌 , 魏武杰 , 晏菲 , 方红艳 , 瞿姣
2019, 29(8):88-92. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 014
摘要:目的 探讨Fc 受体样蛋白3 (Fc receptor-like protein 3,FCRL3)在原发性肝癌中的表达及其对肝癌细胞HepG2 增殖和迁移的影响?方法 检测肝癌组织?正常肝组织?肝癌细胞HepG2 FCRL3 mRNA 及蛋白的表达,用MTT 法?细胞划痕实验检测FCRL3 特异性siRNA 及FCRL3 过表达对肝癌细胞HepG2 增殖率和迁移能力的影响?结果 肝癌组织内FCRL3 mRNA 表达量和蛋白量均较正常肝组织增加,差异具有统计学意义( P <0. 05);与FCRL3 干扰表达组比较,FCRL3 阴性对照组和FCRL3 过表达组肝癌细胞HepG2 内FCRL3 mRNA 表达量和蛋白量均增加,增殖率和迁移能力增加,差异具有统计学意义( P <0. 05);与FCRL3 阴性对照组比较,FCRL3 过表达组肝癌细胞HepG2 内FCRL3 mRNA 表达量和蛋白量均增加,增殖率和迁移能力增加,差异具有统计学意义( P <0. 05)?结论 肝癌组织中FCRL3 的表达增加,抑制FCRL3 的表达可抑制肝癌细胞的增殖和迁移,提示FCRL3 可能在肝癌发生过程中发挥重要的作用?
2019, 29(8):93-98. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 015
摘要:目的 探讨分析妊娠糖尿病母鼠胎儿心脏组织CD4+ T 细胞水平表达及其相关机制?方法 将怀孕的84 只雌性SD 大鼠随机分为正常对照组(NC 组)和STZ 诱导的妊娠糖尿病模型组(gestational diabetes mellitus,GDM 组),免疫组化检测不同组别胎鼠心脏组织中CD4+ T 细胞水平, Western blotting 检测IL-17?IL-4?Tim-3?PD-1表达,RT-PCR 检测miR-223-3p 表达?结果 GDM 组CD4+ CD25+ Treg 阳性细胞表达数量[(46. 41±10. 94)%]低于NC 组[(21. 63±10. 94)%],差异有统计学意义( P <0. 01)?GDM 组IL-17?Tim-3 及PD-1 表达量均高于NC 组,而IL-4 低于NC 组,差异有统计学意义( P <0. 05 或 P <0. 01)?GDM 组miR-233-3p 相对表达量(0. 682±0. 104)低于NC 组(0. 466±0. 117),差异有统计学意义( P <0. 05)?结论 GDM 子鼠心脏组织异常可能与CD4+ T 细胞表达下降有关,而这一作用机制可能与胎鼠心脏组织中miR-233-3p 表达下调及其介导的炎症反应有关?
2019, 29(8):99-105. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 016
摘要:目的 本研究探讨苦参碱联合蛋白激酶B(Akt)信号通路抑制剂对肾癌细胞增殖活力及凋亡的影响及机制?方法 以肾癌细胞为研究对象,用不同浓度的苦参碱作用后,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活力,计算半数抑制浓度?用半数抑制浓度的苦参碱和Akt 信号通路抑制剂分别处理细胞记为苦参碱组和抑制剂组,同时以半数抑制浓度的苦参碱和Akt 信号通路抑制剂共同处理后的细胞为联合组,以正常培养的细胞为对照组,MTT 检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,蛋白质印迹法检测细胞中p38?磷酸化的p38(p-p38)?活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3, cleaved caspase-3)表达?结果 苦参碱能够呈浓度依赖的抑制肾癌细胞增殖活力?与对照组比较,苦参碱组?抑制剂组?联合组细胞存活率降低,凋亡率升高,ROS 水平升高,p-p38 水平?cleaved caspase-3 蛋白水平升高?与苦参碱组?抑制剂组比较,联合组胞存活率降低,凋亡率升高,ROS 水平升高,p-p38 水平?cleaved caspase-3 蛋白水平升高?结论 苦参碱联合Akt 信号通路抑制剂能够抑制肾癌细胞增殖活力,促进肾癌细胞凋亡,ROS 和p38 信号通路可能是其作用机制之一?
2019, 29(8):106-110. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 017
摘要:目的 评估高脂饮食诱导肥胖对雌性大鼠卵巢功能的影响,并探讨其作用机制?方法 80 只雌性Wistar 大鼠随机分为高脂饮食(HFD)组(n =40)和正常饮食(对照)组(n = 40)?饲养60 d 后评估各组大鼠发情周期及大鼠卵泡发育各个阶段细胞数量及凋亡情况,并检测各组大鼠血清孕酮和雌二醇浓度?然后按1 ∶2比例雄雌大鼠合笼3 周?结果 HDF 诱导大鼠产生肥胖和高血糖,但是不影响大鼠血清甘油三酯?胆固醇和C-反应蛋白浓度?肥胖也改变卵巢功能,HFD 大鼠发情间期延长,血清雌二醇浓度降低及窦闭锁卵泡数量增加?此外,HFD 组大鼠也出现卵泡囊肿?而且HFD 组大鼠怀孕晚于对照组大鼠?结论 肥胖诱导大鼠出现卵泡囊肿,并干扰排卵,导致妊娠延迟?
2019, 29(8):111-116. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 018
摘要:目的 观察氧化苦参碱(oxymatrine, OMT)联合全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)抑制二乙基亚硝胺(DEN)诱导的大鼠肝癌形成效果,并探讨其作用机制?方法 采用DEN 诱导建立肝癌大鼠模型,造模18 周,将Wistar 大鼠随机分为空白组?模型组?干预组,分别在诱癌后6?12?18 周处死大鼠,通过HE 染色观察大鼠肝组织病理变化,检测大鼠肝功能相关指标,ELISA 检测大鼠IL-6 含量;采用RT-qPCR 法检测大鼠let-7a?NF-κBp65?IL-6,STAT3 mRNA 表达变化;采用Western blot 检测大鼠STAT3?p-STAT3 的蛋白变化?结果 HE 染色病理学观察显示,干预组大鼠肝癌结节数明显少于模型组,肝细胞病变坏死减轻;与模型组比较,干预组大鼠血清IL-6 及肝功能指标ALT?GGT?AST?ALP 水平均明显降低( P <0. 05);RT-qPCR 检测结果:与模型组比较,干预组大鼠肝组织中let-7a mRNA 表达水平明显上升,而NF-κB-p65?IL-6 和STAT3 mRNA 表达量均明显降低( P <0. 05)?实验第18 周,Western blot 检测结果干预组STAT3?p-STAT3 蛋白表达均明显低于模型组( P <0. 05)?结论 氧化苦参碱联合全反式维甲酸能够明显抑制DEN 诱发的大鼠肝癌形成,在一定程度上延缓肿瘤生长?
2019, 29(8):117-121. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 019
摘要:细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1, CYP2E1)是一种能够代谢内源性或外源性物质的细胞色素P450 酶,主要位于内质网上,参与类固醇?脂肪酸?前列腺素和药物?致癌物质和环境污染物等外源性化学物质的氧化代谢?在酒精性肝病?非酒精性肝病?心血管疾病?艾滋病?糖尿病?帕金森综合征等疾病的病理进程中,CYP2E1 的表达水平升高,产生活性氧(reactive oxygen species, ROS),引起氧化应激?DNA?蛋白质和脂质的失活,进而造成体内重要器官损伤,因此可以通过靶向抑制CYP2E1 进而治疗多种疾病的?二烯丙基硫醚(diallyl sulfide,DAS)是大蒜中的一种有效成分,后发现可作为CYP2E1 的选择性抑制剂,可以通过抑制CYP2E1,降低ROS?氧化应激的产生,细胞的凋亡?本文主要综述DAS 靶向抑制CYP2E1 对相关疾病治疗的潜在作用?
2019, 29(8):122-128. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 020
摘要:小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)是经脱细胞技术处理的一种天然细胞外基质材料,免疫原性低,生物相容性好,因此广泛用于组织再生修复?然而,只有准确的理解SIS 各种生物学特性,才能更好的实现SIS 在再生医学领域的转化应用?SIS 作为组织修复材料的功能,很大程度上依赖于SIS 的组成结构?力学特性以及植入体内后降解产生的小分子及其产生的各种特性功能?因此本文就SIS 的理化组成?特性?加工方式及应用相关进展进行综述,以助理解SIS 的结构与功能,促进SIS 的转化应用?
2019, 29(8):129-134. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 021
摘要:3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)是经典的自噬抑制剂,主要在自噬小体的形成和发展过程中起到抑制作用?在神经系统中,从中枢神经系统疾病到周围神经系统疾病,从神经创伤到神经退行性疾病,3-MA都发挥着重要作用?但目前3-MA 在神经系统疾病中的确切作用一直颇具争议,且其使用缺乏系统性论述?本文就3-MA 在神经系统疾病中的作用及其研究概况进行综述,以期为进一步研究提供新思路?
2019, 29(8):135-141. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 022
摘要:中风具有高致死率?致残率及复发率的特点,一直是人类未能攻克的疾病?中风主要分为出血性中风和缺血性中风,后者占所有中风事件的百分之八十?科学家们一直致力于开发有效的预防治疗中风的药物,方便实用的模型是病理机制研究和药物的筛选过程中非常重要的支撑和保障?在众多缺血性中风模型中,光照血栓模型以操作简便且创伤性小?不需要开颅手术?死亡率低?等独特的优势得到了越来越多的认可?该模型可通过调整激光照射大脑区域内的位置来控制血栓形成的部位,通过调整造模染料的剂量及激光照射的强度和时间来控制缺血灶形成的大小,适合于缺血性中风过程中神经退行性病变,神经保护和神经再生的细胞和分子机制研究及抗中风药物的开发?本文对光照血栓性中风模型的原理?优缺点以及在药物开发中的应用进行了叙述?
2019, 29(8):142-148. DOI: 10.3969/j. issn. 1671 -7856. 2019. 08. 023
摘要:帕金森病是一种中脑黑质多巴胺能神经元渐进性变性死亡从而导致黑质-纹状体通路受损的中枢神经系统退行性疾病,临床主要的治疗方式为药物和手术,但均只能短期缓解症状且后期副作用大,无法达到治愈的效果?干细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,干细胞移植可在损伤组织内进行神经再生与修复,为帕金森病的治疗带来了曙光?本文从干细胞取材?不同类型干细胞治疗帕金森病的方法?疗效和优缺点等方面进行比较分析,总结了干细胞治疗帕金森病的几种可能的作用机制,希望对干细胞治疗帕金森病的机制研究?细胞类型和移植方式的选择及临床试验等提供一定的帮助?