摘要:目的 利用基因组数据筛选更多有效的长爪沙鼠微卫星位点用于近交系和封闭群遗传质量分析,丰富长爪沙鼠遗传数据?方法 通过对长爪沙鼠全基因组测序结果分析,选出符合微卫星标准的重复序列357 个,根据每个位点的侧翼序列设计并合成相应引物?提取长爪沙鼠基因组DNA 进行PCR 扩增,经引物序列和PCR 条件优化以及凝胶电泳实验分析,对成功扩增的位点通过不同近交系和封闭群长爪沙鼠进行验证和优化,筛选出适于遗传质量分析的位点?结果 在357 个微卫星位点引物中,135 个位点引物成功扩增PCR 产物?分析结果显示,其中10 个位点可以将长爪沙鼠脑缺血和糖尿病模型近交系区分开?在12 只封闭群长爪沙鼠中,23 个位点呈现出多态性?结论 成功筛选出了135 个长爪沙鼠微卫星位点,部分位点可用于近交系和封闭群长爪沙鼠遗传质量分析?

摘要:目的 筛选和验证与人体衰老进程相关的甲基化基因,建立方便?灵敏?准确的检测方法,筛选能够逆向调控与衰老过程相关的甲基化基因的物质?方法 通过GEO(Gene Expression Omnibus)公共数据库筛选并验证与人体衰老进程相关的甲基化基因,建立甲基化qPCR 检测体系,验证目标基因与人体衰老的相关性?使用一组具有抗衰老功效的天然提取物/ 物质处理体外培养的细胞系,检测细胞系表型变化及目标基因甲基化水平变化?结果 建立了促泌素(secretagogin,SCGN)和整合素亚基α2b(integrin subunit alpha 2b,ITGA2B)基因的甲基化检测体系,在53 例独立样本中验证了SCGN 和ITGA2B 基因的甲基化调控与人体衰老进程相关?表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)和没食子酸(gallic acid,GA)抑制体外培养的细胞系的存活能力,且能逆转SCGN 和ITGA2B 基因在衰老进程中发生的甲基化调控?结论 SCGN 和ITGA2B 基因甲基化水平的变化有可能用于评估人体衰老状态和监测人体衰老进程,同时也为开发基于DNA 甲基化调控机制的抗衰老药物或产品提供了功效监测和评估工具?

摘要:目的 对大鼠急性心肌缺血损伤后心脏结构和功能改变进行超声心动图评价?方法 30 只雄性大鼠随机分为假手术组,模型组,地尔硫卓组,每组10 只?采用冠状动脉左前降支结扎的方法建立大鼠急性心肌缺血损伤模型?模型建立后连续给药15 d 后,采用心脏超声检测左心室结构的功能的改变,包括左心室射血分数(EF),左心室短轴缩短率(FS),每搏输出量(SV),心输出量(CO),左心室舒张末期和收缩末期内径(LVIDd 和LVIDs),舒张末期和收缩末期左心室后壁厚度(LVPWd 和LVPWs),舒张末期和收缩末期左室前壁厚度(LVAWd和LVAWs)等指标;采用伊文思蓝和TTC 染色法测定左心室扩张程度;采用ELISA 方法检测血清氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平;并在光镜下观察各组心肌组织HE 染色的病理改变?结果 心脏超声显示,与假手术组比较,模型组大鼠LVIDd 和LVIDs 明显增加,而LVAWd?LVAWs?LVPWd 和LVPWs 明显降低(P<0. 05 或P<0. 01);同时血清NT-proBNP 水平升高,左心室腔明显扩张?与模型组比较,地尔硫卓能够明显降低大鼠心肌缺血后LVIDd 和LVIDs,增加LVAWd,LVAWs,LVPWd 和LVPWs;同时血清NT-proBNP 水平下降,抑制左心室腔扩大( P <0. 05 或 P <0. 01)?结论 心脏超声多种指标结合能够很好地评价大鼠急性心肌缺血损伤后心脏结构和功能改变,将成为小动物心血管疾病研究的主要手段?

摘要:目的 比较观察老年C57BL/6J 小鼠与年轻C57BL/6J 小鼠外周血及免疫系统相关指标的差异?方法 19 月龄和2 月龄的C57BL/6J 小鼠分别取材检测外周血细胞计数?免疫脏器指数和外周血免疫细胞分型?结果 与年轻小鼠比较,老年小鼠外周血中红细胞和血小板计数升高,中性粒细胞比例升高,淋巴细胞比例下降( P <0. 001),CD4+细胞比例明显降低( P <0. 001),胸腺指数明显降低( P <0. 001)?结论 老年小鼠血细胞发生分化偏移,辅助性T 细胞数量下降,与年轻小鼠有明显差异,与人造血免疫老龄化改变类似?本项研究为免疫衰老相关问题研究提供基础数据?

摘要:目的 探索CCR5 在小鼠肝癌微环境中MDSCs 迁移的作用?方法 建立原位肝癌小鼠模型,流式检测其骨髓来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells, MDSCs)水平?分选MDSCs,用CCR5 抑制剂100nmol/ L 预处理后观察小鼠肝癌细胞H22 条件培养基(tumor conditional medium, TCM)及CCR5 抑制剂对MDSCs 迁移的影响?最后在小鼠肝癌原位模型尾静脉注射DiR 标记的CCR5 抑制剂处理MDSCs,观察体内肝癌微环境下CCR5 抑制剂对MDSCs 的迁移影响?结果 在原位肝癌小鼠模型中,MDSCs 在骨髓?脾?肝中的水平与正常小鼠相比显著性升高;分选得到MDSCs 纯度可达94. 5%,且MDSCs 高表达CCR5?细胞迁移结果显示,CCR5 抑制剂能够抑制TCM 对MDSCs 的募集作用?小动物活体成像结果显示,MDSCs 经CCR5 抑制剂处理后其在体内向脾和肝迁移的作用也减弱?结论 在小鼠肝癌微环境中CCR5 介导MDSCs 在肿瘤微环境中迁移,抑制MDSCs 的CCR5 可能为肝癌的临床治疗提供新思路?

摘要:目的 SOHLH1 (Spermatogenesis- and oogenesis-specific bHLH transcription factor-1)和SOX30(SRYbox)是与精子发生相关的转录因子,Sohlh1 与Sox30 的基因敲除雄鼠均丧失生育能力?出生后7 天Sohlh1 基因敲除雄鼠DNA 芯片显示Sox30 表达显著下调,本文探究了早期发育相关转录因子SOHLH1 对精子发生后期的关键基因Sox30 基因的转录调控作用?方法 构建Sox30 启动子荧光素酶表达质粒,瞬时共同转染Sox30 荧光素酶表达质粒和Sohlh1 真核表达质粒并利用荧光素酶活性测定实验检测荧光值?通过染色质免疫共沉淀实验检测SOHLH1 与Sox30 启动子DNA 序列特异序列的结合情况筛选主要激活位点?结果 共转染Sohlh1 真核表达质粒和Sox30 启动子区域荧光素酶质粒的实验组荧光素酶活性高于对照组?SOHLH1 与Sox30 启动子上的特异性位点结合,在-489 bp 位点的结合作用最强?结论 精子发生早期重要转录因子SOHLH1 可以直接激活顶体形成相关基因Sox30 转录,-489 bp (CAGGTG)为主要特异性结合位点,丰富了精子发生中延时翻译表达调控的现象并进行了调控机制的初步探索?

摘要:目的 探讨BALB/ c 突变卷毛小鼠在皮肤损伤自然愈合过程中与对照BALB/ c 小鼠存在的差异?方法 选择6 周龄BALB/ c 突变卷毛小鼠和对照BALB/ c 小鼠各10 只,于小鼠背部做2 个直径为0. 5 cm 的圆形皮肤全层创口,备皮肤损伤模型,于损伤后第3,7,10,14 天观察皮肤外形愈合情况,测量皮肤损伤面积的变化及计算伤口愈合率;同时于损伤后第3,7,10,14 天取损伤部位皮肤连带周围正常皮肤,进行HE 染色和天狼猩红染色,以观察皮肤在愈合过程中的形态学变化?结果 外观结果显示:突变卷毛小鼠在创后3 d 和7d 的愈合伤口明显愈合较快?愈合率结果显示:卷毛小鼠的皮肤在创后3 d?7d 的愈合率显著高于对照小鼠的愈合率,具有统计学意义( P <0. 05),而在创后10 d 和14 d 两组小鼠的愈合率不具有显著差异?病理结果显示:突变卷毛小鼠在创后3 d 创面胶原纤维明显增多,可见少量炎症细胞浸润,毛细血管扩张充血,创后7 d 胶原增长迅速,肉芽组织显著增多,可见部分表皮再生生长?天狼猩红染色结果显示:卷毛小鼠在创后3 d 至14 d 可以清晰的看到胶原纤维和肉芽组织从底层逐渐顶替修复破损部位,直至表皮和毛囊生长出来?结论 BALB/ c 突变卷毛小鼠皮肤创伤后前期的愈合能力强于对照小鼠,为今后该突变小鼠应用于皮肤创伤愈合模型研究提供了理论参考?

摘要:目的 研究葫芦巴碱对热应激致小鼠睾丸损伤的保护作用?方法 雄性ICR 小鼠120 只,随机分为正常对照组?模型组?葫芦巴碱药物干预组(25 mg/ kg,50 mg/ kg,100 mg/ kg),每组24 只?各组小鼠给予相应药物灌胃一周后,除正常对照组外,将其余各组小鼠下腹部置于43℃恒温水浴锅中热应激处理15 min,随后药物干预组给予相应剂量葫芦巴碱灌胃给药14 d,正常对照组和模型组给予生理盐水灌胃14 d,并分别于热刺激处理后1,7,10,14 d 取材?计算生殖器官指数,精子数,HE 染色观察睾丸组织结构变化,并进行比较分析?结果 与正常对照组相比,模型组小鼠生殖器官脏器系数?附睾精子数均显著降低( P <0. 05),病理组织学显示小鼠睾丸损伤明显?与模型组比较,各剂量药物干预组均能升高小鼠生殖器官脏器系数及附睾精子数量( P <0. 05);病理组织学显示各剂量药物干预组均能明显改善热应激诱导的小鼠睾丸损伤?结论 葫芦巴碱能够明显改善热应激对小鼠睾丸的损伤程度,具有一定的保护作用?

摘要:目的 骨关节炎(osteoarthritis,OA)是最常见的退行性慢性关节疾病,然而其具体的基因机制至今尚不完全清楚,通过基因芯片检测OA 细胞模型的基因表达谱变化,为深入研究OA 发病机制提供更多生物学依据?方法 胰酶结合胶原酶分离获得小鼠原代软骨细胞,以50 ng/ mL 的肿瘤坏死因子α(TNF-α)孵育原代软骨细胞24 h 制备OA 细胞模型?收获细胞提取总RNA 用于基因芯片检测,以表达差异倍数(fold change,FC)>2 且P<0. 01 为条件筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),利用生物信息学软件对差异表达结果进行基因功能分类体系(gene ontology,GO)?KEGG 通路注释分析?结果 原代软骨细胞经TNF-α 处理后,共筛选获得8096 个表达上调DEG 和6413 个表达下调DEG,其中有诸如基质金属蛋白酶?炎性因子?基因凋亡及成骨相关基因等已知的OA 相关的差异表达基因?此外,还有Olfml1 等olfactomedin 超家族成员?Nf1 等未见报道的与OA 相关的基因,尤其发现大量细胞色素超家族成员基因的异常表达,提示线粒体相关功能基因及信号途径可能与OA 进程有重要关联?结论 项目从转录组水平整体分析了TNF-α 诱导的OA 软骨细胞模型基因表达谱变化,为进一步深入探究OA 发病机制提供了新思路?

摘要:目的 建立与人类疾病特征相似的高血脂食蟹猴模型,为降脂药(特别是生物类降脂药)的研发提供理想的动物模型?方法 将优化?定型的半流质高糖高脂膳食乳剂,每周6 d 经鼻饲灌喂给药处理组雄性食蟹猴,定期监测猴体重(BW)?体重质量指数(BMI)?血清总胆固醇(TC)?甘油三酯(TG)?高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)?低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等指标,对其血脂指标的变化趋势进行分析?结果 与相应的对照组相比,至造模第3 个月,处理组6 只中老年雄性食蟹猴和5 只成年雄性食蟹猴全部造模成功,至造模第21 个月所有处理组雄性食蟹猴依然维持在较高血脂水平?结论 连续3 个月定量灌喂半流质高糖高脂膳食乳剂可成功制备高脂血症食蟹猴模型,该模型具有高胆固醇血症和高低密度脂蛋白胆固醇血症的特征,可用于高脂血症发病机理研究及药物临床前药效评价研究?

摘要:目的 通过小鼠感染MNV 后外周血免疫指标的改变来评估MNV 感染对小鼠免疫功能的影响?方法 选取KM,BALB/ c,BALB/ c-nu,C57BL/6 及NIH 等五个品系小鼠,每个品系分成MNV 感染组和对照组,于感染前(第0 天)和感染后的第7?14?21?28 天从眼周静脉采集抗凝血,流式细胞术测定总T 细胞?CD4⁺ T 细胞?CD8⁺ T 细胞?总B 细胞?NK 细胞及NK-T 细胞占总淋巴细胞的百分比及干扰素?白介素?趋化因子等13 种细胞因子的含量,比较感染后各指标总体均值的差异,分析各时间点变化情况?结果 与对照组相比,KM 小鼠感染组总T 细胞?CD4⁺ T 细胞含量显著增高( P <0. 01),CD4/ CD8 显著增高( P <0. 05),总B 细胞及CXCL10 含量显著降低( P <0. 01);BALB/ c 小鼠CD8⁺ T 细胞显著降低(P<0. 05),IFN-γ 含量显著增高( P <0. 01);BALB/ c-nu 小鼠各免疫细胞均无统计学差异,TNF-α?CXCL1 及CXCL10 显著增高( P <0. 01),CCL2 显著增高( P <0. 05),IFN-β 显著降低( P <0. 05);C57BL/6 小鼠CD4⁺( P <0. 05)CD8⁺ T 细胞( P <0. 01)均显著降低,总B 细胞及IL-10 显著增高( P <0. 05),CCL5 及GM-CSF 显著降低( P <0. 05);NIH 小鼠总T 细胞和CD8⁺ T 细胞显著增高( P <0. 01),CD4/CD8 显著降低( P <0. 05),总B 细胞显著降低( P <0. 01),细胞因子均无统计学差异?对于有统计学差异的免疫指标,有半数感染第7 天即出现显著差异,大多数第28 天仍存在显著差异?结论 MNV 的感染会影响正常小鼠的细胞免疫和体液免疫应答,而且不同品系的动物影响不同,建议在进行免疫相关的动物实验时选择MNV 阴性小鼠,以避免实验结果出现偏差?

摘要:目的 研究急性运动对大鼠心肌miRNA-30a 及其对自噬相关基因表达的影响,探讨miRNA-30a 对运动后不同恢复时期心肌自噬活性的调控机制?方法 SD 大鼠随机分为安静对照组(Con),运动后0 h 组(E0),运动后3 h 组(E3)和运动后12 h 组(E12)?急性运动后按不同时间点取材?使用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测左心室肌中ACE mRNA?miRNA-30a?Beclin-1 mRNA 和LC3 mRNA 表达量?结果 与安静对照组相比,运动后0 h 组左心室肌中ACE mRNA 和miRNA-30a 表达显著性升高( P <0. 05),Beclin-1 mRNA 和LC3 mRNA 表达也显著提高( P <0. 05),在运动后3 h 均恢复到安静水平?结论 急性运动可以显著提高心肌ACE mRNA?miRNA-30a?Beclin-1 mRNA 和LC3 mRNA 表达,这种一过性升高可能是由运动应激导致的?

摘要:生物安全二级动物实验设施(ABSL-2)是可以开展感染性动物实验的生物安全实验室,也是目前科研院所使用频率较高的动物实验设施,设施的有效管理是开展动物实验的前提和保证?笔者以所在单位的ABSL-2 设施运行管理为参考,总结归纳该类设施在日常运行管理中的几个重点环节,以期为同行提供有价值的参考?

摘要:目的 通过对左心辅助羊术后抗凝的药物管理,摸索行之有效的抗凝治疗方案?方法 6 例雄性成年绵羊,(80. 0±5. 0) kg,分别植入同一型号的左心室辅助装置(left ventricular assist device,LVAD)?术后前2 周,每日清晨采血1 次;之后,每周采晨血1 次?术后每日口服华法林,检测凝血全项,持续观察10 周,对抗凝效果做出评价?结果 6 例实验动物的生理状态下的国际标准化比率(international normalized ratio,INR)为1. 265±0. 146,活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT) 为(41. 017 ± 12. 530) s,乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)为(411±119)U/ L?术后1~3 d,应用肝素和口服华法林,控制INR 和APTT 分别为基值的1. 4和1. 7 倍?待实验动物可以平稳进食后,停止使用肝素?持续监测INR,调整华法林用量?术后2 周内,使用华法林(7. 96±5. 45)mg/ d,测得INR 为1. 89±0. 53?术后10 周内,使用华法林(11. 44±7. 80)mg/ d,测得INR 为2. 01±0. 91;LDH 为(509±92)U/ L?在研究过程中,6 例HeartCon 均未出现泵内血栓,实验动物未见消化道出血等迹象?结论 术后早期应用肝素抗凝是必要的?在不改变饮食结构的前提下,两周内基本可以制定每例个体的抗凝治疗标准?单一使用华法林,可以达到预期的抗凝效果?

摘要:肝纤维化是指肝在修复各种致病因子所致肝损伤时出现的肝内弥漫性细胞外基质过度沉积?近年来,越来越多证据表明第10 号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)参与肝纤维化进程?本文就PTEN 调控肝纤维化的机制研究进行综述?

摘要:肿瘤微环境曾被认为对肿瘤的生长和侵袭作用是微小的,现今人们已认识到其在肿瘤发展中扮演的角色是不可或缺的?肿瘤的一个共性是缺氧,低氧亦是肿瘤微环境的代表性特征之一,这些特性致使肿瘤细胞外氢离子浓度上升,pH 下降(酸中毒),形成特异的酸性微环境?该酸性微环境不仅对肿瘤细胞的增殖?迁移?侵袭?转移和治疗有重要影响;同时对免疫细胞,血管细胞和其他基质细胞的功能也具有一定作用?然而,肿瘤细胞感知和响应微环境中酸性pH 的分子机制尚不清楚?有研究表明,有些受体和离子通道家族可以帮助细胞感知酸中毒,作为G 蛋白偶联受体家族(G-protein coupled receptors,GPCRs)成员的卵巢癌G 蛋白偶联受体1(OGR1)主要作用是由酸中毒激活并介导多个下游G 蛋白信号传导途径,不仅可以调节肿瘤细胞转移和增殖,对免疫细胞的功能,炎症和血管形成也具有重要影响?本文论述了OGR1 与肿瘤发生及其与肿瘤微环境,免疫反应和血管生成之间的关系?近些年来,GPCRs 作为主要的药物靶标,对其pH 敏感的GPCR 小分子调节剂的开发已经成为研究热点?而对OGR1 与肿瘤微环境相互作用之间的研究将为肿瘤的治疗和化学预防提供新策略?

摘要:神经管缺陷(neural tube defects,NTDs)是一种常见的神经发育疾病,发病率约为千分之一?该疾病的发病机制较为复杂,是由遗传因素和环境因素共同决定的?研究发现适量补充叶酸能够降低新生儿NTDs 的发病率,但尚没有有效的治疗方法?平面细胞极性(planar cell polarity,PCP) 信号通路和汇聚延伸(convergentextension,CE)在神经管闭合过程中具有重要作用,一系列遗传因素调控神经管发育,其中SHROOM3?VANGL2 和WNT5A 这3 个基因在PCP 信号通路中不可或缺?本文通过综述SHROOM3?VANGL2 和WNT5A 的研究现状,阐述PCP 信号通路在神经管闭合过程中发挥的作用,也对遗传性NTDs 动物模型的研究进行了回顾?

摘要:基于动物疾病模型,进一步探究人类疾病模型,是深入研究疾病发生机制以及药物临床作用的重要手段?肾衰动物模型研究已开展,但对于模型之间的比较研究却较少?本文以大鼠肾衰竭模型为切入点,分别从制作方法,模型评价和科研应用的角度,对大鼠慢性肾衰竭(CRF)病理模型和急性肾衰竭(ARF)病理模型进行了分析和对比,期望能为临床上肾衰发病机制的研究?肾衰治疗药物的研发?动物实验模型的准确选取和构建提供一定的参考?

摘要:扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)是引起心力衰竭的常见疾病之一,其病因复杂多样,机制尚未完全阐明?本病严重危害人类的健康,是当前临床和实验室研究的热点问题?而制备恰当的动物模型是开展研究工作的先决条件?本文通过检索近年来国内外相关文献,对DCM 动物模型造模方法归纳总结分析,以期为进一步研究提供参考依据?

摘要:低能量激光在医疗领域的应用越来越广泛?低能量激光疗法相较于传统的手术?药物以及放射治疗而言,具有无创和无毒副作用的优势?其在减轻炎症反应?促进伤口愈合?营养神经?保护肌肉以及改善体型等方面显示出良好的疗效?深入了解低能量激光疗法的这些作用机制有助于提高该疗法的疗效和拓宽其应用范围?本文对低能量激光疗法的应用和机制研究进展作一综述?

摘要:抑郁呈现持续性精神低落和情绪障碍,是全世界最常见和最突出的精神障碍之一?合适的抑郁动物模型可以作为有效的手段进行抑郁及相关问题的研究?本文综述了经典的和正在探索的抑郁动物模型造模的实验动物种类?抑郁评价监测指标以及抑郁动物模型?啮齿动物抑郁模型较为成熟,相关研究也较为广泛?非人灵长类动物应用抑郁模型尚在探索,其优势在于与人类亲缘关系近,模拟效果更好?诸多实验作为监测指标各有其适用范畴,应结合研究本身进行选择?成熟的实验动物模型针对不同的研究目的,在行为学水平?内分泌代谢水平?遗传学水平?社会心理水平各有特色,需进行恰当选择?实验动物种类?监测评价指标?抑郁模型造模方法三者密不可分,三者的合理匹配是形成科学有效的抑郁相关动物水平研究的关键?

摘要:本文对全国实验动物许可证查询管理系统的数据进行了统计?整理,分析了当前我国实验动物许可证管理的现状?成效和问题?文章建议加强实验动物行政许可的事后监管,加强实验动物许可证制度的宣贯,加快新型实验动物资源的开发与利用?从而为政府决策?实验动物管理以及实验动物资源的优化配置提供参考,推动我国实验动物行业的健康发展?