摘要:目的 观察在高脂环境下五指山小型猪?西藏小型猪血脂和炎症细胞的变化,分析冠心病相关血脂和炎症易感基因的表达?方法 取雄性五指山小型猪?西藏小型猪各5 只,高脂饲喂连续6 个月,每月检测血脂和血常规,并检测饲喂前和饲喂6 个月时外周白细胞中LDLR?LPL?PCSK9?ApoAV?5-LO?FLAP?MMP-9?ICAM-1?VCAM-1 基因和蛋白的表达,及血清中CRP?TNF-α 水平;并在饲喂6 个月时取腹主动脉组织进行HE 染色病理学检查?结果 高脂饲喂后,两种小型猪TC?HDL-C?LDL-C 水平均显著升高( P <0. 01),西藏小型猪WBC?NEUT%?MONO%和五指山小型猪MONO%亦呈升高趋势( P >0. 05);五指山小型猪TC?LDL-C 水平高于西藏小型猪,而西藏小型猪的WBC?NEUT%和MONO%显著高于五指山小型猪( P <0. 05, P <0. 01),且西藏小型猪血清CRP 和TNF-α水平显著升高( P <0. 05),而五指山小型猪未见显著差异( P >0. 05)?高脂饲喂6 个月后,两种小型猪均出现明显的AS 斑块,五指山小型猪LDLR?ApoAV mRNA 和蛋白表达均显著降低( P <0. 05, P <0. 01),PCSK9?LPL mRNA 表达显著升高( P <0. 05, P <0. 01);西藏小型猪LPL mRNA 和蛋白表达均显著升高( P <0. 01);五指山小型猪5-LO?FLAP?ICAM-1?VCAM-1 mRNA 表达和5-LO 蛋白表达均显著升高( P <0. 05, P <0. 01),西藏小型猪FLAP?MMP-9?ICAM-1?VCAM-1 mRNA 和蛋白表达均显著升高( P <0. 05, P <0. 01),且西藏小型猪MMP-9?ICAM-1?VCAM-1 mRNA 和蛋白表达均高于五指山小型猪,而5-LO mRNA 和蛋白表达则五指山小型猪高于西藏小型猪?结论 高脂环境下五指山小型猪?西藏小型猪均出现不同程度的血脂异常和炎症反应,两种小型猪的冠心病相关血脂和炎症易感基因存在明显异质性,其中,高脂诱导下五指山小型猪外周血白细胞对LDLR?PCSK9?5-LO 表达较敏感,而西藏小型猪外周血白细胞中对LPL?ICAM-1?VCAM-1 和MMP-9 表达较敏感?

摘要:目的 利用CRISPR/ Cas9 技术敲除巴马小型猪4-羟基苯丙酮酸氧化酶(4-OH phenylpyruvatedioxygenase,4HPPD/ HPD)制备高酪氨酸血症III 型巴马小型猪模型?方法 分别从质粒pGL3-U6-gRNA-PGKpuromycin和pST1374-NLS-flag-linker-Cas9 中通过PCR 扩增sgRNA-Hpd 和Cas9 体外转录用模板,接着体外转录出Cas9 mRNA 和sgRNA-Hpd,最后将Cas9 mRNA 和sgRNA-Hpd 共注射入巴马小型猪受精卵的胞质内,以制备Hpd 基因敲除巴马小型猪?结果 胞质内共注射后,共移植20 枚受精卵至2 只代孕母猪?获得子代Hpd 基因敲除巴马小型猪共4 只?结论 本研究成功制备了高酪氨酸血症III 型巴马小型猪模型,将为研究酪氨酸代谢通路提供更好的模型?

摘要:目的 对西藏小型猪全基因组范围内的组蛋白修饰位点进行注释,并比较不同组织间组蛋白修饰的差异?方法 取三月龄的雄性非同胎西藏小型猪两只,分别取其血液?肝?小肠(回肠段)和背最长肌的组织样本,进行染色质免疫共沉淀实验,捕获DNA 片段进行高通量测序?下机数据经过滤后比对到参考基因组上,并使用MACS 软件统计reads 在基因组上的富集情况?结果 不同组蛋白在基因启动子区域分布的偏好位置不同,分布规律大致分为两类,一类如H3K4me3 组蛋白修饰主要分布在转录起始位点附近的两侧,并在距离TSS 较近的下游位置出现一个宽度较窄的明显的峰值,另一类如H3K9me3 组蛋白修饰在整个启动子区域内分布较为平均,整体呈现出中间低两边高的宽峰形状;组织特异性组蛋白修饰影响的基因存在差异,对应的功能通路比较广泛,但都参与了RNA 聚合酶II 启动子的转录调控?结论 本研究提供了西藏小型猪四种组织的组蛋白修饰注释数据,为今后以西藏小型猪为生物医学模型的转录调控研究提供了基础数据?

摘要:目的 应用Tet-On 基因表达调控系统构建Alb 启动子调控小型猪uPA (pig urokinase-typeplasminogen activator,puPA)基因表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-puPA-T2A-CopGFP(pLATTPUTG)?方法 首先将pAlb-Cre-GH/ BS 作为模板,PCR 扩增目的基因Alb-enhancer/ promoter,In-Fusion 克隆至Xho I/ Xba I 双酶切的pLVX-TetOne 中,获得Alb 启动子替换pLVX-TetOne 原有的PGK 启动子的质粒pLVX-Alb-TetOne;接着以pCD823 A-1 为模板,PCR 扩增T2A-CopGFP,In-Fusion 克隆至BamH I/ Age I 酶切的pLVX-Alb-TetOne 中,获得pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP(pLATTTG);最后以H8803 为模板,PCR 扩增puPA(3′端含Flag 标签),In-Fusion 克隆至pLATTTG 中,最终获得慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-puPA-T2A-CopGFP (pLATTPUTG);所构建的质粒均经酶切和测序鉴定?pLATTPUTG 瞬转293T 细胞,转染24 h 后倒置荧光显微镜检测绿色荧光;随后六孔板内加入强力霉素(Dox),48 h 后倒置荧光显微镜下检测CopGFP 表达(包括未加Dox 的孔),接着收集细胞以抽提总RNA 和总蛋白,以用于qRT-PCR 检测puPA 和CopGFP 表达及Western blot 检测Flag 表达?结果 酶切鉴定和测序证实成功构建了慢病毒载体pLATTPUTG?pLATTPUTG 转染293T 细胞,24 h 后倒置荧光显微镜下未见绿色荧光,而加入Dox 48 h 后几乎所有细胞均发强的绿色荧光,而不加Dox 的孔内仍然未见绿色荧光;加Dox 的孔内细胞上puPA?CopGFP 和Flag 表达水平均显著升高,而不加Dox 的孔内细胞上检测到上述基因极低表达;以上数据提示,应用该Tet-On 基因表达调控系统实现了puPA 基因在293T 细胞上可诱导性表达?结论 成功基于Tet-On 基因表达调控系统构建Alb 启动子调控puPA 转基因表达的慢病毒载体pLATTPUTG,这为相关后续研究奠定了坚实基础?

摘要:目的 供体的短缺是器官移植所面临的主要问题,制备人源化器官是解决此问题的有效途径之一?缺乏延胡索酸乙酰乙酸水解酶(fumarylacetoacetate hydrolase, FAH) 会引起遗传性酪氨酸血症Ⅰ型(hereditarytyrosinemia typeⅠ, HTⅠ),致使患者肝细胞凋亡,呈现出肝损伤?对猪(Sus scrofa)进行基因编辑,建立 FAH 基因敲除巴马小型猪,结合人干细胞将有利于人源化干细胞肝的制备?本研究在α-1,3-半乳糖基转移酶基因(α-1, 3-galactosyltransferase, GGTA1) 敲除巴马小型猪的基础上,通过CRISPR/ Cas9 技术制备 FAH 基因敲除( FAH^{+/ -} ? FAH^{-/ -} )小型猪,并分析其健康与繁育状况?方法 针对猪 FAH 基因设计单链导向RNA (single guide RNA,sgRNA)构建pX330 表达载体转染巴马小型猪耳成纤维细胞(ear fibroblasts of Bama minipigs, BMEF)并进行敲除效率验证,鉴定后选择阳性细胞作为核供体,通过体细胞核移植技术制备 FAH 基因敲除巴马小型猪?提取仔猪的基因组DNA,经PCR 测序后得到突变类型;采集5 月龄 FAH^{+/ -}巴马小型猪血液,检测其血生化与血常规指标并观察肝组织学染色切片;当 FAH^{+/ -}巴马小型猪公猪性成熟后,与野生型(wild type, WT)母猪配种,以其产仔数评价繁育能力状况?结果 得到了 FAH^{+/ -}巴马小型猪,Western blot 显示 FAH^{+/ -}巴马小型猪的肝和肾中 FAH 的表达量均有所下降; FAH^{+/ -}猪与野生型相比, FAH^{+/ -}猪血液理化指标无显著差异;组织学切片染色发现 FAH^{+/ -} 猪肝组织形态出现空泡样变化;与 FAH^{+/ -}公猪配种的野生母猪产仔数正常; FAH^{+/ -} 猪具有正常的健康状况和繁育能力?结论 本研究制备出了 FAH 单基因敲除小型猪,健康状况及繁育能力正常,该单基因敲除猪为将来制备出双等位基因敲除猪与人源化肝的研究提供了良好基础?

摘要:目的 建立前列腺癌人源性异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模型,评价不同治疗方案的抗肿瘤效果?方法 将人新鲜的前列腺癌手术标本与基质胶混合后移植入补充有外源性雄激素的裸鼠皮下,连续监测肿瘤生长,评估其保真度并连续传代;将荷瘤鼠分为四组:多西他赛组?去势组?多西他赛联合去势组以及对照组,治疗期间测量肿瘤体积及小鼠体重变化,治疗结束后,检测血清中总前列腺特异性抗原(total prostate specificantigen,tPSA)浓度及组织病理学变化,评估治疗效果?结果 成功建立了前列腺癌PDX 模型,包括激素敏感型(D17225)和去势抵抗型(C40019)肿瘤,病理学分析发现移植瘤较好的保持了患者原发瘤的主要特征;病理组织学及血清tPSA 检测发现多西他赛组及多西他赛联合去势组在D17225 模型中显示出良好的治疗效果,且后者抑瘤效果更为明显?结论 成功建立了前列腺癌PDX 模型并稳定传代,多西他赛单药或联合去势处理对激素敏感型(D17225)前列腺癌PDX 模型具有显著治疗效果?

摘要:目的 利用CRISPR/ Cas9 技术构建牛磺酸转运体基因(solute carrier family 6 member 6,Slc6a6)敲除大鼠,繁殖并鉴定,为研究牛磺酸缺失对神经系统疾病的影响提供稳定的大鼠模型?方法 针对Slc6a6 基因第5外显子,设计向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)介导Cas9 核酸酶与靶点DNA 特异性结合,并切割基因组DNA,被切割后的DNA 进行重组修复,从而实现基因的敲除?通过基因型鉴定和测序分析检测新生大鼠基因型?利用Real-time PCR?Western blot 技术和免疫组化等方法,分析大鼠脑组织的牛磺酸转运体(taurine transporter,TauT)的mRNA 表达和蛋白表达,建立Slc6a6 基因敲除大鼠模型?结果 F3 代出现21 只Slc6a6 基因敲除纯合子(TauT-/ - ),54 只杂合子(TauT^{+/ -} ),27 只阴性(TauT^{+/ +} ),F3 代纯合率约为20. 59%,基本符合孟德尔遗传定律?Slc6a6 基因敲除纯合子大鼠脑组织mRNA 水平基本不表达,TauT 蛋白表达水平显著低于同窝阴性大鼠?结论 本研究利用CRISPR/ Cas9 系统定向敲除Slc6a6 基因,成功构建Slc6a6 基因敲除大鼠模型?

摘要:目的 利用腰穿针气管插管?留置针气管插管和气管切开三种不同方法对C57BL/6J 小鼠进行气管注射博来霉素诱导肺纤维化,探索腰穿针气管插管造模法?留置针气管插管造模法及气管切开造模法这三种方法对小鼠的影响?方法 将120 只C57BL/6J 小鼠随机分为空白组?腰穿针气管插管模型组?留置针气管插管模型组和气管切开模型组,分别利用不同方法气管注射博来霉素,观察小鼠的一般情况(体重变化和存活率)?组织病理学改变(HE 和Masson 染色)和羟脯氨酸水平?结果 腰穿针气管插管模型组?留置针气管插管模型组造模后28 d 小鼠体重均高于气管切开模型组,有统计学差异( P <0. 01? P <0. 001);各组小鼠存活率存在差异,除空白组外,气管切开模型组最低,留置针气管插管模型组最高,空白组和气管切开模型间有统计学差异( P <0. 05),其余各组间没有统计学意义;肺组织肺泡炎及肺纤维化程度由高到低依次为气管切开模型组?腰穿针气管插管模型组和留置针气管插管模型组,且造模后21 d 最重;气管切开模型组病灶分布均匀,腰穿针气管插管模型组和留置针气管插管模型组分布不均匀,以气管周围肺组织较重;腰穿针气管插管模型组和气管切开模型组造模后28 d 羟脯氨酸水平显著高于空白组( P <0. 01? P <0. 001)?结论 综合多种因素,腰穿针气管插管造模法是三种造模方法中的最佳方法?

摘要:目的 检测并分析食蟹猴血糖值一年内季节性变化,考察食蟹猴血糖值在不同季节间是否存在显著差异?同时比较便携式血糖仪与全自动生化分析仪测定值之间差异?方法 采集食蟹猴静脉血,利用全自动生化仪及便携式血糖仪检测不同季节食蟹猴血糖值,进行比较分析?结果 显示食蟹猴血糖值呈现夏季最低,冬季最高,春秋位于两者间的周期性波动?且夏→秋和冬→春时间段血糖变化幅度(每℃约0. 20 mmol/ L)大于秋→冬和春→夏的变化幅度(每℃约0. 06 mmol/ L)?便携式血糖仪与自动生化分析仪之间血糖值差异符合国家标准,通过比较分析便携式血糖仪可以应用于食蟹猴血糖值检测?结论 本研究填补食蟹猴血糖相关研究中,季节性温度变化对其影响分析,有利于在以后动物实验中,充分考虑两者的相关性来对数据进行合理分析?

摘要:目的 构建一种转移率高?操作简便?结果可靠的结肠癌肝转移模型,用于结肠癌转移防治的实验研究?方法 15 只Balb/ c 裸鼠平均分为3 组(A 组?B 组?C 组),5 只Balb/ c 小鼠单独为D 组,以细胞浓度2. 5×10⁷/ mL 的HCT116?CT26 细胞悬液0. 2 mL 分别行脾种植保脾法及切脾法构建结肠癌肝转移模型,对比四组动物模型造模成功率及肝转移灶大小?数目及腹腔内转移情况?结果 A 组裸鼠造模成功率100%(5/5),肝及脾均成瘤,肝转移瘤数目较少,较分散,多分布于肝右叶,生存时间平均为(26. 6±3. 4) d;B 组裸鼠造模成功率40%(2/5),转移瘤分散于肝表面,体积较A 组大,生存时间平均为(36. 8±4. 2) d;C 组裸鼠造模成功率100%(5/5),肝及脾均成瘤,肝转移瘤数目较多,多个转移瘤融合成团,占据整个肝右叶,生存时间平均为(20. 2±2. 6) d;D 组肝未发现转移灶?三组裸鼠部分出现腹腔转移(A 组2 只,C 组3 只),均未出现心?肺?脑?肾转移灶?3 组裸鼠肝转移瘤组织细胞学形态符合腺癌的特征?结论 保脾法能获得较高的造模成功率,能有效模拟人类结肠癌细胞经血行转移至肝的途径和过程?

摘要:目的 繁殖和鉴定Mfge8 基因敲除C57BL/6 小鼠,获取纯合子(Mfge8^{-/ -} )小鼠,并比较Mfge8^{-/ -} 小鼠血清学及组织学改变?方法 对幼鼠剪尾抽提基因组DNA,用PCR 法和琼脂糖凝胶电泳法鉴定幼鼠基因型;利用TUNEL 法分别检测12 周龄野生型(WT)和Mfge8^{-/ -}小鼠肺组织中凋亡细胞;并且利用免疫荧光法分别检测36周龄WT 和Mfge8^{-/ -}小鼠血清中ANA 和AECA 含量?结果 构建的基因敲除小鼠已成功繁育保种,并得到纯合基因缺失型小鼠?同时,12 周龄Mfge8^{-/ -}小鼠肺组织中凋亡细胞数量明显多于WT 小鼠;36 周龄Mfge8^{-/ -}小鼠血清中ANA 抗体及AECA 抗体阳性,而WT 小鼠血清中呈现阴性?结论 C57BL/6 背景小鼠敲除Mfge8 基因后,更易发生自身免疫疾病?

摘要:目的 测定犬体不同组织器官内流感病毒受体的类型和分布差异,验证犬对H3N2 亚型犬流感病毒的易感性?方法 采集健康英国史宾格犬的不同组织器官,利用凝集素免疫荧光组织染色方法,检测组织内人型流感病毒唾液酸受体唾液酸α2,6-半乳糖(SAα2,6Gal)和禽型流感病毒唾液酸受体唾液酸α2,3-半乳糖(SAα2,3Gal)类型与分布;用H3N2 亚型犬流感病毒人工感染英国史宾格犬,采集不同组织器官,用免疫组织化学染色法进行病毒的组织分布差异性分析?结果 多种组织器官中同时存在着SAα2,6Gal 和SAα2,3Gal 两种类型的受体,少数组织器官中存在单一受体;SAα-2,6Gal 受体在分布的广泛性?在同一器官中的表达量上高于SAα-2,3Gal 型受体?人工感染后,病毒分布量与受体量整体趋势基本一致,仅在个别器官中存在差别?结论 禽型和人型流感病毒受体广泛分布于犬的各个组织器官,犬具备同时感染禽型和人型流感病毒的分子基础?

摘要:目的 评估红系祖细胞在先天原始造血缺陷cloche^{-/ -} 突变体斑马鱼体内的移植效果?方法 收集绿色荧光标记红系祖细胞的转基因系zTg(gata1:EGFP)斑马鱼胚胎,制备成单细胞悬液,经流式细胞仪分选出携带绿色荧光的gata1⁺细胞,利用显微注射技术将gata1⁺细胞移植到42hpf 的cloche^{-/ -} 突变体斑马鱼心脏中,采用体视荧光显微镜追踪观察移植后的红系祖细胞在cloche^{-/ -}突变体斑马鱼中的表达情况?结果 成功分选出携带绿色荧光的gata1⁺细胞,并在移植后2 h 可观察到携带绿色荧光的gata1⁺细胞逐渐增殖扩散且16 h 持续有绿色荧光表达?结论 红系祖细胞有重建造血的潜力,为进一步研究红系祖细胞移植后的功能鉴定提供实验依据?

摘要:目的 探究姜黄素对2 型糖尿病(T2DM)大鼠脂肪细胞葡萄糖转运以及磷脂酰肌醇激酶-3(PI3K) /蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响?方法 将90 只SD 大鼠随机分为正常组?模型组(高脂肪喂养)?姜黄素低剂量组(50 mg/ kg)?姜黄素中剂量组(150 mg/ kg)?姜黄素高剂量组(250 mg/ kg)?罗格列酮组(1. 35 mg/ kg),每组15只?给药后即刻?给药2 周末?给药8 周末测量大鼠体重,给药8 周末禁食12 h 采集血液,分别检测空腹血糖(FBG)?空腹胰岛素(FINS)表达?计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),甘油三酯(TG)?低/ 高密度脂蛋白胆固醇(LDC-C/ HDL-C)?总胆固醇(TC)表达?正糖钳实验测定葡萄糖灌注速率,荧光免疫实验检测脂肪细胞膜葡萄糖转运蛋白4(GluT4)移位情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测脂肪细胞中GluT4,蛋白质免疫印迹检测脂肪细胞内?外膜中GluT4?p-PI3K?胰岛素受体底物2(Irs2)?p-Akt 表达情况?结果 与正常组相比,模型组给药即刻?给药2 周体重升高,给药8 周体重下降;与模型组相比,给药即刻?给药2 周?给药8 周姜黄素治疗组?罗格列酮组体重均降低( P <0. 05)?与正常组相比,模型组FBG?FINS?HOMA-IR?HDC-L?LDC-L?TC?TG 均升高,葡糖糖注射速率呈剂量依赖性降低;模型组GluT4 mRNA 升高,GluT4?Irs2?p-PI3K/ PI3K?pAkt/ Akt 蛋白表达明显降低;上述差异均有统计学意义( P <0. 05)?与模型组相比,姜黄素治疗组?罗格列酮组FBG?FINS?HOMA-IR?HDC-L?LDC-L?TC?TG 水平均明显降低;葡糖糖注射速率明显升高;GluT4 mRNA 降低,GluT4?Irs2?p-PI3K/ PI3K?pAkt/ Akt 蛋白表达明显升高;上述差异均有统计学意义( P <0. 05),且三组姜黄素剂量组间比较差异也具有统计学意义( P <0. 05)?结论 姜黄素可提高T2DM 型大鼠胰岛素敏感性,可能是激活PI3K/ Akt 信号通路从而促进脂肪细胞GluT4 膜转运,提高脂肪细胞对葡萄糖摄取,进而缓解血糖代谢平衡来实现的?

摘要:目的 探讨microRNA-1247 通过趋化因子CC 配体16(CCR16)抑制脂多糖诱导的急性肺炎的作用机制?方法 选取8 周龄雌性BABL/ c 小鼠30 只,随机分为3 组,即急性肺炎模型组(6 h)?急性肺炎模型组(12h)和正常组,每组10 只小鼠?模型组小鼠采取气管滴加LPS(8 mg/ kg),正常组给予与LPS 含量相同的生理盐水?分别在LPS 造模6 h 和12 h 后对小鼠进行麻醉解剖,取腹腔动脉中的血液检测各组的血气值;检测肺组织干湿重含量;应用qRT-PCR 以及ELISA 检测TNF-α,IL-1β 及microRNA-1247 表达量;应用蛋白质免疫印迹实验检测CCR16?TLR4?IRAK6?TAK?IKK 与NF-κB p52 含量?结果 模型组小鼠与正常组相比较, 模型组小鼠的PaO₂,氧和指数(PaO₂ / FiO₂)降低,肺叶组织干湿重比增加,差异有统计学意义( P <0. 05)?而PaCO₂ 值,炎症因子TNF-α?IL-1β 的mRNA 表达水平差异无统计学意义( P >0. 05)?模型组在造模后6 h 和12 h 肺叶组织中的microRNA-1247含量与CCR16 蛋白表达量增高均有统计学意义( P <0. 05)?细胞表面受体蛋白TLR4 表达量与正常组相比较,TLR4 表达量降低,差异有统计学意义( P <0. 05)?IRAK6,TAK,IKK 以及转位入核蛋白NF-κB 与正常组相比较,在造模后6 h 和12 h 组织中NF-κB 蛋白表达量降低,差异有统计学意义( P <0. 05)?结论 在急性肺炎模型中,microRNA-1247 是通过趋化因子配体CCR16 抑制因LPS 诱导的急性肺炎而导致的各种细胞因子及蛋白表达升高?

摘要:目的 采用两种结核分枝杆菌培养法(BACTEC MGIT 960 培养法与罗氏(L?wenstein-Jensen,L-J)培养法)同时验证利福平(rifampin,RIF)在结核感染小鼠模型中的治疗效果,探讨采用BACTEC MGIT 960 培养系统在结核感染的小鼠模型中的应用价值?方法 实验分为BACTEC MGIT 960 培养组与L-J 培养组,经尾静脉注射1. 0×106 CFU/ mL H37Rv 菌液感染36 只C57BL/6 雌性小鼠,感染一周后18 只小鼠采用利福平治疗四周,18 只小鼠注射等量磷酸缓冲液(PBS)作为对照,用BACTEC MGIT 960 快速培养与罗氏培养法对36 只小鼠肺?脾及肝组织匀浆液进行培养?结果 采用BACTEC MGIT 960 培养法,RIF 治疗组中肝?肺及脾组织培养物的报阳时间分别为(187. 11±10. 20) h?(347. 22±12. 70) h?(276. 39±13. 09) h,对照组为(142. 50±11. 70) h?(251. 67±16. 63) h?(230. 28±7. 22) h,组间对比差异有显著性( P < 0. 001);罗氏培养法,RIF 治疗组中肝?肺及脾组织荷菌量分别为(5. 15±0. 15) log₁₀ CFU?(3. 30±0. 23) log₁₀ CFU?(3. 40±0. 25) log₁₀ CFU,对照组荷菌量分别为(5. 90±0. 25) log₁₀CFU?(3. 88±0. 31) log₁₀ CFU?(4. 15±0. 30) log₁₀ CFU,组间对比差异有显著性( P < 0. 001)?结论 采用BACTECMGIT 960 培养法和罗氏培养法进行荷菌量检测,其培养结果相符,但是前者检测出阳性结果时间平均缩短一半,并且区分度也较高,说明BACTEC MGIT 960 培养法在动物模型的荷菌量检测中更有优势,可运用于结核感染动物模型中荷菌量的检测?

摘要:目的 探索一种简单?易行的体外快速?分离培养树鼩角膜基质细胞(corneal stromal cells, CSCs)的方法?方法 实验分为实验组A 和实验组B,取树鼩角膜基质层,实验组A 剪碎,用1% 的Ⅱ型胶原酶消化60 min,离心后重悬接种;实验组B 用Ⅱ型胶原酶联合中性蛋白酶消化?比较记录原代及传代细胞生长情况?传代时间,细胞行波形蛋白免疫组化及免疫荧光鉴定?结果 胶原酶消化法可成功的获取原代细胞, 9 d 后即可进行传代,细胞形态好;传代细胞生长较快,2~3 d 即可传一代;双酶消化法获得的CSCs 较少, 10 d 才可见少量散落细胞,15~20 d 可传代;波形蛋白免疫组化及免疫荧光表达阳性?结论 两种方法均可成功培养出CSCs,但胶原酶消化法能更容易高效分离培养出大量树鼩CSCs?

摘要:目的 通过换热器降低高压蒸汽灭菌器排放废汽废水的温度,使之能在PVC 管道中排放,回收排放的废汽废水中的热能加以利用,降低排放废汽造成的环境污染?方法 通过采用热交换器元件,对排放的高温气体和液体进行高效热交换?并通过在关键控制节点布置温度传感器的方法,对交换过程中的温度进行精密控制?结果 灭菌器停止工作后,蒸汽排出温度降低到15℃,换热后水温也随之降低?在有效热回收过程中,热回收效率达到72%?结论 解决高温高压灭菌器高温气体排放及所造成的空气污染问题,实现节能减排?

摘要:在过去的几十年间,随着社会发展和气候变暖等原因,登革热在全球的流行范围不断扩大?发病率急剧上升,已成为一个全球性公共卫生问题?建立理想的登革热动物模型对研究登革病毒感染及发病机制至关重要?鉴于登革病毒的种属特异性及特殊的致病机制,登革病毒感染动物模型的建立面临诸多挑战?登革病毒感染免疫缺陷小鼠,可产生高水平的病毒复制和严重的临床表现,如血管通透性增加及血小板下降等;但部分症状与人类不同,如出现神经症状?登革病毒感染人源化小鼠模型,可研究人体对登革病毒的部分免疫反应,但并不全面和准确?登革病毒可感染非人灵长类动物,但通常不产生明显的临床症状?因此,仍需进一步研究各种登革病毒感染模型,建立更理想的动物模型,支撑登革病毒发病机制研究及抗病毒药物?疫苗的临床前评价?本文汇集了近年来建立登革病毒感染动物模型的研究进展以及动物模型在病毒发病机制?疫苗评估?药物测试等方面的应用情况,为登革病毒感染模型的研究和应用提供参考信息?

摘要:膝骨性关节炎(KOA)是退行性?多发性?难以治愈的疾病?KOA 动物疾病模型是研究KOA 发病机制?治疗方法及起效机制的有效载体?目前,诱导KOA 动物模型的方法多种多样,各有其特点和适用性,本文通过对KOA 动物模型选择与制备方法的文献进行综述比较,结合笔者对KOA 动物模型的研究实践,探讨实验性KOA动物模型的选择与制备,以期对研究KOA 动物模型提供有效参考?

摘要:强直性脊柱炎是一种主要影响中轴骨骼的慢性炎症性风湿病,与人类白细胞抗原B27 密切关联?由于大多数患者发病年龄较年轻,强直性脊柱炎导致的脊柱强直和关节畸形对社会经济学有重要影响?实验动物模型是强直性脊柱炎发病原因?病理机制和干预措施研究的重要载体?本文对自发性?诱导性和基因工程动物模型的研究进展进行了综述,以期为强直性脊柱炎的基础研究?新药开发及临床治疗提供参考和借鉴?

摘要:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种神经退行性疾病,在中老年群体中较为常见,危害性大,但是早期临床诊断与鉴别帕金森病?帕金森叠加综合征以及其他运动障碍性疾病有一定的困难性,因此临床前的研究显得尤为重要,利用动物分子影像技术对帕金森病模型进行活体脑部显像,能够动态观察帕金森病的形成和脑深部电刺激(DBS)治疗前后多巴胺受体的代谢及动力学变化,对帕金森病早期诊断及发病机制研究有一定的作用,当前帕金森病实验动物的脑部显像可以采用小动物PET/ CT?小动物MRI 和小动物SPECT 进行精确诊断,通过诸多研究结果,可以明显提升诊断效率,与临床诊断结果达到高度一致性,为临床鉴别和诊断帕金森病和帕金森综合征提供数据支持?综述了近年来国内外研究者利用分子影像技术对帕金森病临床前研究的结果,展现了分子影像医学的发展趋势,对未来诊断和治疗帕金森疾病具有一定的参考价值?