• 2017年第27卷第5期文章目次
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    • >专题研究
    • SPF巴马小型猪的培育及应用

      2017, 27(5):1-3. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.001

      摘要 (2440) HTML (0) PDF 673.56 K (2402) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用我国自有资源巴马小型猪群,完成了疫病净化,建立了无特定病原体巴马小型猪实验猪群。制定了饲育标准、实验猪遗传学检测标准和微生物质量控制技术标准,制订了黑龙江省地方标准《无特定病原体猪微生物学监测技术规范》,对建立的猪群进行了遗传学和微生物质量控制。建立了猪瘟病毒(CSFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染巴马小型猪感染模型。扩增了巴马小型猪重要细胞因子及固有免疫相关的重要分子,从分子水平进一步证明巴马小型猪可以代替家猪进行猪病感染实验。目前建立的猪群已广泛应用在猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒等猪重要疫病防控及致病机理的研究,实现了共享利用。本项目的完成解决了实验用猪瓶颈问题,提升了动物疫病研究水平,提供了新型实验动物,实现了优质种质资源共享利用,加速了生命科学研究和生物制品产业发展,推动了农业实验动物的行业进步。

    • 中国地鼠线粒体基因组与微卫星遗传标记的研究

      2017, 27(5):4-5,15. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.002

      摘要 (2613) HTML (0) PDF 740.12 K (2092) 评论 (0) 收藏

      摘要:中国地鼠在生物医学研究中占有重要的地位,但中国地鼠的分子遗传标记研究尚少。本研究运用生物信息学和比较基因组学等方法分析了中国地鼠的线粒体基因组的碱基组成、基因组结构、基因进化等特征,为中国地鼠应用于人类疾病动物模型提供基因组数据。建立了中国地鼠近交系遗传质量控制体系,为中国地鼠种质资源科学评估、合理开发利用奠定了基础。

    • 化学物(药物)毒性测试替代体系的建立及应用

      2017, 27(5):6-8. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.003

      摘要 (3423) HTML (0) PDF 675.42 K (1896) 评论 (0) 收藏

      摘要:当前对化学物进行毒性评价的整体动物试验由于试验周期长、成本高,存在种属差异和剂量差异,导致其实验结果在预测人体毒性风险时受到一定的限制。本研究针对化学物安全性评价及风险评估所依赖的毒作用终点(遗传毒性、致癌性、生殖毒性、急性毒性、一般毒性),按照动物试验替代、减少、优化的“3R”原则,建立相应的毒性测试替代筛选体系。该体系涵盖毒性评价的绝大多数终点,并结合分子生物学技术对毒性试验进行整合,优化了多种动物试验操作方法,以期缩短实验周期、降低实验成本、提高动物福利。同时该体系是基于毒作用机制进行的毒性评价,因此试验结果具有较高的人体相关性。

    • 长爪沙鼠NAFLD模型的建立及其遗传学的研究

      2017, 27(5):9-11. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.004

      摘要 (2646) HTML (0) PDF 673.11 K (1620) 评论 (0) 收藏

      摘要:非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)已成为目前主要代谢性疾病之一,针对传统的动物模型的缺陷,本研究首次建立了与人类NAFLD(从单纯脂肪肝到脂肪性肝炎,再进展到肝纤维化、肝硬化)极为相似、饲料配方简便的长爪沙鼠NAFLD模型,阐明了长爪沙鼠肝脏脂肪快速沉积的特征,揭示长爪沙鼠脂肪肝易感的分子机制、主要的调控靶点和网络作用特征,为临床治疗及新药研发提供一种背景相对清晰,耗时短的新型脂肪肝动物模型,同时也为NAFLD发病机制及药效新靶点的研究提供实验动物支撑,为选育近交系NAFLD长爪沙鼠奠定了理论与实践基础。

    • 现代化中药安全性评价和关键技术研究体系的建立与应用

      2017, 27(5):12-15. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.005

      摘要 (2386) HTML (0) PDF 728.44 K (2042) 评论 (0) 收藏

      摘要:中药引起的不良反应事件时有发生,但是目前缺乏科学、客观、规范的中药安全性评价方法。在中药临床前评价的过程中,形成一套科学的、规范的、可行的现代中药评价体系标准势在必行。本项目建立了包括临床前安全性评价用供试品质量控制体系、现代化中药及其制剂毒性评价体系、评价管理体系在内的现代化中药临床前安全性评价体系,规范了中药临床前安全性评价的每个研究环节。无论从保障患者身体健康、增加临床用药的安全性,还是从丰富完善中医药学术、发展中医药学、促进中医药与国际药学相互接轨方面,都具有重要的指导意义和应用价值。

    • 小型猪慢性心肌缺血模型的建立与无创遥测技术的应用

      2017, 27(5):16-18. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.006

      摘要 (2557) HTML (0) PDF 679.26 K (1610) 评论 (0) 收藏

      摘要:为建立小型猪慢性心肌缺血模型和应用无创遥测技术的评价方法,本研究采用维生素D3和异丙肾上腺素复合高脂饮食的方法建立了小型猪慢性心肌缺血模型;并利用无创遥测技术对小型猪慢性心肌缺血模型的症状进行检测与评价,同时对五指山小型猪、巴马小型猪和西藏小型猪的运输应激和高脂诱导发生动脉粥样硬化(AS)的危险因素进行评估。建立了巴马小型猪慢性心肌缺血模型与评价技术规范,明确了无创遥测技术可用于心肌缺血模型的症状检测和评价,界定了小型猪运输应激后需4周以上的适应恢复期。并发现了高脂环境下五指山小型猪、巴马小型猪和西藏小型猪发生高血脂、高血压、高胰岛素血症等AS危险因素的不同特征,这为小型猪在心血管疾病研究中的选择和应用提供参考。

    • >研究报告
    • 中国实验动物行业发展现状调查研究

      2017, 27(5):19-22. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.007

      摘要 (7905) HTML (0) PDF 669.20 K (14448) 评论 (0) 收藏

      摘要:本文全面客观地阐述中国实验动物行业发展现状、发展趋势,提炼了行业面临的主要问题,并提出了发展对策。通过对比分析,相对欧美国家百年积累的巨大资源优势和强大经费支持,中国整体落后较多,需利用举国体制,付出巨大努力和实现跳跃性发展才能迎头赶上。实验动物资源仍然是实验动物行业发展的基础和薄弱环节,需要国家重视并给予重点支持。本项研究可为各级主管部门制定实验动物行业发展策略提供科学依据,也可为实验动物行业本身发展提供数据参考。

    • 血小板通过炎症反应在盐敏感性高血压中的作用机制研究

      2017, 27(5):23-30. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.008

      摘要 (2619) HTML (0) PDF 1.84 M (1743) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 探讨血小板在高盐诱导的盐敏感性高血压中的作用及分子机制。方法 在体实验选用2月龄盐敏感性高血压大鼠(dahl salt-sensitive, Dahl SS)25只随机分为三组:给予低盐(0.12% NaCl,LS)、高盐(8%NaCl,HS)和血小板抑制剂(8%NaCl+血小板抑制剂,HS+bus)处理6周。尾袖法检测大鼠动脉血压,流式细胞术分析外周血血小板活化率、血小板内Ca2+浓度、血小板-白细胞聚集(platelet-leukocyte aggregation,PLA)和主动脉血管中免疫细胞的比例,ELISA方法检测血清炎症因子IL-6的表达。体外实验分离SD大鼠血小板,分为正常盐组(0.9%NaCl)和高盐组(1.3%NaCl),检测血小板内Ca2+浓度和p-selectin表达的差异。结果 与低盐组相比,高盐喂养的Dahl SS大鼠动脉血压明显升高,外周血血小板活化率、血小板-白细胞聚集的比例及主动脉血管免疫细胞的比例显著增多,血清炎症因子IL-6的水平明显增高;血小板抑制剂能够显著降低高盐引起的血压升高,抑制血小板活化,降低外周血PLA和主动脉血管免疫细胞的比例,并且减少外周血炎症因子IL-6的释放;体外分离纯化的大鼠血小板经高盐处理后,血小板内Ca2+浓度增加,血小板表面p-selectin表达增多(P < 0.05)。结论 高盐通过活化血小板激活血管炎症参与了盐敏感性高血压的病理过程,其机制可能与高盐诱导血小板内Ca2+浓度增加有关。但是,高盐如何导致血小板活化,以及血小板活化后如何通过炎症反应导致高血压的发生发展的具体机制还需要进一步研究。

    • Fkbp51基因敲除对小鼠肝脏转录组基因可变剪接的影响

      2017, 27(5):31-36. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.009

      摘要 (3380) HTML (0) PDF 746.63 K (2186) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 通过分析Fkbp51基因敲除(knock out,KO)与野生型(wild type,WT)小鼠肝脏表达谱,研究Fkbp51基因敲除对肝脏组织基因可变剪接的影响。方法 利用二代测序对Fkbp51KO与WT小鼠肝脏进行表达谱测序,用TopHat对RNA测序结果进行可变剪接分析,筛选出KO与WT小鼠肝组织中差异的内含子保留(intron retetion,RI)和外显子跳跃(exon skipping,SE)。通过在线工具DAVID对这些差异可变剪接体进行基因功能(gene ontology, GO)和代谢通路(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析,同时用NCBI基因数据库对这些基因进行注释。结果 (1)Fkbp51缺失可导致小鼠肝脏mRNA可变剪接发生变化;(2)Fkbp51基因敲除造成小鼠肝脏mRNA可变剪接表达量的变化;(3)通过GO与KEGG分析,我们发现这些发生差异可变剪切的基因主要与脂肪相关衍生物的代谢、免疫、胆汁酸分泌等通路相关。(4)与差异内含子保留相关的基因主要与肌动蛋白细胞骨架调控,氨基酸及其衍生物代谢相关。结论 Fkbp51基因敲除能够改变基因组中mRNA的可变剪切,进而影响小鼠肝脏的代谢功能。

    • 狨猴B2m基因沉默位点在细胞水平的验证

      2017, 27(5):37-41. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.010

      摘要 (2727) HTML (0) PDF 6.45 M (2439) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 在细胞水平筛选狨猴B2m基因的有效沉默靶点,并进行验证。方法 查询人源B2m验证过的有效siRNA靶位点序列,与狨猴B2m基因序列进行同源性比较,选择匹配靶点合成shRNA序列。将体外合成的2条干扰序列分别与慢病毒载体FUGW-TDT连接,构建FUGW-TDT-shb2m干扰表达质粒,在聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导下转染293T细胞,转染后48h,用实时荧光定量法检测转染细胞中B2m基因mRNA的水平。结果 筛选出2个与狨猴完全同源的B2m沉默靶位点,分别位于B2m mRNA的290~310 bp,665~685 bp;B2m两个靶点在转录水平的沉默效率分别为(46.54±7.91)%(P < 0.05)和(83.22±4.37)%(P< 0.0001),差异有显著性。结论 成功构建成FUGW-TDT-shb2m重组质粒;在细胞水平筛选得到2个有效的B2m基因沉默靶点;为后续有关介导狨猴B2m基因沉默的研究奠定了基础。

    • Kruppel样因子6对肝癌HepG2细胞的作用及其缺失对斑马鱼肝脏发育的影响

      2017, 27(5):42-50. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.011

      摘要 (3005) HTML (0) PDF 5.05 M (2529) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 探讨Kruppel样因子6(KLF6)低表达对肝癌细胞凋亡及迁移能力的影响,并以斑马鱼作为动物模型,研究klf6基因沉默对肝脏发育的作用。方法 构建敲除KLF6基因质粒,转染肝癌细胞(HepG2)及正常人肝细胞(L-02),通过免疫印迹(WB)、凋亡及细胞周期测定、划痕实验检测KLF6基因敲除后对HepG2细胞的影响;设计合成沉默KLF6基因的吗啉代寡核苷酸(Morpholino),显微注射入转基因斑马鱼Tg(lfabp:eGFP)胚胎中,通过免疫荧光法观察KLF6蛋白表达的变化以及对转基因斑马鱼胚胎肝脏发育表型的影响。结果 体外实验表明,L-02细胞中的KLF6蛋白的表达量明显高于HepG2细胞;敲除KLF6基因后,HepG2细胞KLF6蛋白表达明显减少、凋亡减弱、细胞周期主要集中于S期、迁移能力增强;体内实验表明,klf6基因沉默后,斑马鱼胚胎肝脏中的KLF6蛋白表达量减少,肝脏发育明显迟缓。结论 KLF6基因低表达促进肝癌细胞的增殖和迁移能力,减少凋亡;且影响斑马鱼肝脏的正常发育。探讨KLF6基因低表达及其功能,可为以后斑马鱼肝癌模型建立及药物筛选提供理论基础。

    • 宫腔注射无水乙醇对小鼠动情周期的影响

      2017, 27(5):51-54. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.012

      摘要 (2198) HTML (0) PDF 4.26 M (3934) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 探讨宫腔内注射无水乙醇对小鼠动情周期的影响。方法 利用阴道脱落细胞染色法选择动情期规律的小鼠20只,宫腔注射无水乙醇,术后第一个动情周期内每日测定其动情周期,随机择10只在第二个动情周期每2 h测一次,观察动情周期的改变程度。结果 实验小鼠宫腔注射无水乙醇后动情周期整体发生大幅度延长,且动情期、动情前期等各期时间均发生了不同程度的紊乱。结论 本实验通过观测无水乙醇损伤子宫后小鼠动情周期发生紊乱的现象,为临床无水乙醇的使用提供一定的实验基础。

    • 布地奈德对哮喘小鼠模型IL-22的调控作用

      2017, 27(5):55-59. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.013

      摘要 (2532) HTML (0) PDF 7.87 M (3408) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 观察白介素22(IL-22)在哮喘模型中的作用,研究布地奈德对哮喘小鼠模型气道炎症及IL-22的调控作用。方法 24只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘模型组和布地奈德组3组,用卵清蛋白(OVA)致敏、激发小鼠以制备哮喘模型。小鼠肺组织进行HE及AB-PAS染色,进行气道炎症评分,ELISA法检测3组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中IL-22的水平,实时荧光定量PCR检测小鼠肺组织中IL-22mRNA的表达水平。结果 与对照组相比较,哮喘小鼠肺组织炎症评分增加,BALF中IL-22水平增高,肺组织中IL-22mRNA表达水平升高,差异均具有统计学意义。给予布地奈德治疗后,小鼠气道炎症评分及肺组织IL-22mRNA的表达水平均较哮喘组降低,差异具有统计学意义。结论 布地奈德对哮喘气道炎症的治疗作用与其抑制肺内IL-22的表达和分泌有关。

    • 松花粉对环磷酰胺增效减毒作用研究

      2017, 27(5):60-63. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.014

      摘要 (2486) HTML (0) PDF 688.90 K (1448) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 研究松花粉对环磷酰胺化疗有无增效和减毒作用。方法 采用腹水型S180小鼠为实验系统,通过检测抑瘤率、血液学和肝功能指标,评价松花粉对环磷酰胺化疗的增效和减毒作用;采用免疫低下小鼠模型为实验系统,通过检测巨细胞吞噬功能、溶血素水平和胸腺、脾脏指数,评价松花粉的免疫调节作用。结果 松花粉(150、300、600 mg/kg)与环磷酰胺合用后抑瘤率明显提高,可明显抑制环磷酰胺引起的白细胞下降和肝功能的损伤,可提高免疫低下小鼠单核吞噬细胞的吞噬功能、溶血素水平和免疫器官系数。结论 松花粉可通过调节免疫对环磷酰胺化疗起到明显的增效减毒作用。

    • EGFR,PDCD4,TGF-β1,Smad3,Smad7在中国地鼠口腔颊囊黏膜癌变过程中的表达研究

      2017, 27(5):64-70. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.015

      摘要 (1903) HTML (0) PDF 4.21 M (1690) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 探讨EGFR,PDCD4,TGF-β1,Smad3,Smad7在口腔正常黏膜、上皮单纯增生、上皮异常增生和鳞状细胞癌组织中的表达及意义。方法 采用ELISA对中国地鼠口腔黏膜癌变过程中血清EGFR,PDCD4水平进行检测;采用免疫组织化学法检测正常口腔黏膜上皮,单纯增生上皮、异常增生上皮和鳞癌组织中TGF-β1,Smad3,Smad7的表达。结果 在口腔黏膜癌变过程中血清EGFR蛋白呈升高趋势,血清PDCD4的表达呈降低趋势,呈负相关。鳞癌组织中TGF-β1、Smad7表达明显高于口腔正常黏膜、上皮单纯增生、上皮异常增生(P < 0.05),而Smad3作用减弱。相关性分析显示,口腔异常增生上皮、口腔鳞癌组织中TGF-β1表达与Smad7呈正相关(P < 0.05)。结论 EGFR,PDCD4,TGF-β1,Smad3,Smad7表达与口腔鳞癌的生物学行为关系密切,本实验为研究口腔鳞癌机理研究提供了理论依据,对口腔鳞癌的发展与预后有重要意义。

    • 紫杉醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠CD28、CTLA-4表达及BAFF的影响

      2017, 27(5):71-75. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.016

      摘要 (2590) HTML (0) PDF 720.91 K (1473) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 探讨紫杉醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmunencephalomyelitis,EAE)大鼠脑组织中CD28、CTLA-4表达及脾组织上清液中B细胞刺激因子(BAFF)含量及其意义。方法 按随机数字法将50只Wistar大鼠分为5组:紫杉醇(PTX)小、中、大3个剂量组(PTX剂量分别为1 mg/kg,2 mg/kg,4 mg/kg)、正常对照组,EAE对照组,每组10只。用豚鼠脊髓制成GPSCH并与CFA等体积混合制成免疫抗原,注入大鼠双足侧足垫(2 mL/kg)进行EAE造模,自造模后,PTX各剂量组腹腔注射紫杉醇,连续10 d。正常对照组及EAE对照组均给予腹腔注射0.9%NaCl 2 mL。采用脑组织学评分评估实验大鼠脑组织炎症浸润情况,取大鼠脑组织采用流式细胞仪测定脑组织CD28、CTLA-4含量,取脾组织并制成上清液,采用ELISA测定脾组织中BAFF含量。结果 PTX各剂量组脑组织评分均低于EAE对照组,各组间差异有显著性(P< 0.01);PTX各剂量组大鼠脑组织中CD28表达均低于EAE对照组,各组间差异有显著性(P< 0.01);CTLA-4表达均高于EAE对照组,各组间差异有显著性(P< 0.01);脾组织上清液中BAFF含量均低于EAE对照组,各组间差异有显著性(P< 0.01)。结论 PTX可降低EAE大鼠神经功能障碍评分,其机制可能涉及调节大鼠脑组织中CD28、CTLA-4的表达及脾组织上清液中BAFF含量,从而发挥对EAE的防治作用。

    • 冠心宁片对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究

      2017, 27(5):76-82. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.017

      摘要 (2498) HTML (0) PDF 7.17 M (1432) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 观察冠心宁片(GXNT)对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠心肌梗死和心脏自主神经功能的影响。方法 SD大鼠70只,随机分为7组,即伪手术组、MI/RI组、GXNT 75 mg/kg,150 mg/kg,300 mg/kg,600 mg/kg剂量组和300 mg/kg复方丹参片(DST)组,每组10只。所有大鼠均预防性经口灌胃给药7 d后,采用结扎大鼠左冠状动脉前降支法,建立MI/RI大鼠模型。期间记录大鼠心电图并分析心电图J点和心率变异性(HRV)指标,并用伊文思蓝(EB)和2,3,5-氯化三苯基四氮唑蓝(TTC)双重染色心肌并分析心肌梗死面积以及行HE染色观察心肌病理学改变,测定血浆乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平。结果 与MI/RI组比,冠心宁片组和复方丹参片组能明显减轻心肌梗死面积和抑制LDH和CK活性的升高(P< 0.05, P< 0.01),并能降低再灌注期大鼠∑-J值和J点平均值(P< 0.05,P< 0.01),显著提高HRV和血浆NO水平以及降低血浆MDA含量(P< 0.05,P< 0.01),并能改善心肌组织病理。结论 冠心宁片能减轻MI/RI大鼠心肌梗死,并能改善心脏自主神经功能。

    • miR-221在H2O2诱导的大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制研究

      2017, 27(5):83-88. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.018

      摘要 (2174) HTML (0) PDF 2.44 M (2164) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 探讨miR-221在过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)损伤中的作用及机制研究。方法 MTT法检测不同浓度H2O2对H9c2细胞的损伤作用,RT-PCR法检测miR-221表达量。通过Lipofectamine 2000将miR-221 inhibitor及阴性对照转入H9c2心肌细胞,并将实验分为4组,正常对照组,模型对照组(H2O2组),阴性对照组(H2O2+阴性对照组),抑制组(H2O2+miR-221 inhibitor组)。MTT法检测细胞活力,吖啶橙染色检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax,Bcl-2,10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因蛋白(PTEN)及p-蛋白激酶(AKT)表达。结果 0、25、50、100、200、400μmol/L H2O2对H9c2细胞活力的抑制作用逐渐加强,其中200μmol/L H2O2对细胞活力抑制程度适中,因此作为后续诱导剂量。与正常对照组比较,模型对照组及阴性对照组中miR-221表达量显著上调(P< 0.01),H9c2细胞活力降低(P< 0.01),细胞凋亡率显著提高(P< 0.01),Bax及PTEN表达量上调(P< 0.01),Bcl-2及p-AKT表达量下调(P< 0.01)。与模型对照组及阴性对照组比较,抑制组中miR-221表达量显著下调(P< 0.01),H9c2细胞活力提高(P< 0.01),细胞凋亡率显著降低(P< 0.01),Bax及PTEN表达量下调(P< 0.01),Bcl-2及p-AKT表达量上调(P< 0.01)。结论 miR-221低表达能显著抑制H2O2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤,与调控PTEN/AKT信号通路有关。

    • 脱氧紫色杆菌素抑制结肠癌TH29细胞增殖及诱导凋亡作用与机制

      2017, 27(5):89-93. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.019

      摘要 (2183) HTML (0) PDF 1.60 M (1201) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 探讨脱氧紫色杆菌素(Deoxyviolacein)对人结肠癌HT29细胞增殖抑制和诱导凋亡及其可能机制。方法 用不同浓度的脱氧紫色杆菌素处理HT29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,检测脱氧紫色杆菌素对HT29细胞的抑制率;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase9表达的变化。结果 脱氧紫色杆菌素对HT29细胞有明显的增殖抑制作用;可提高G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例;细胞凋亡率升高,Bax和Caspase9蛋白表达升高,Bcl-2蛋白的表达降低。结论 脱氧紫色杆菌素抑制结肠癌HT29细胞增殖并诱导凋亡,其凋亡机制可能作用于线粒体介导的内源性通路。

    • >技术方法
    • 金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌多重PCR方法的建立与初步应用

      2017, 27(5):94-98. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.020

      摘要 (3002) HTML (0) PDF 4.30 M (2491) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 建立金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌多重PCR检测方法,为实验动物细菌检测提供快速、灵敏、简便的方法。方法 根据金黄色葡萄球菌nuc基因、绿脓杆菌LasI基因、肺炎克雷伯杆菌PhoE基因和细菌通用16S rRNA基因设计出特异性引物;经过多重PCR引物浓度和退火温度的优化,特异性和敏感性的检测,建立多重PCR体系。应用该PCR体系对人工感染标本、实验动物粪便样本进行验证检测,与传统检测方法对比。结果 多重PCR分别扩增出金黄色葡萄球菌(153 bp)、绿脓杆菌(600 bp)、肺炎克雷伯杆菌(368 bp)和通用(520 bp)的目的条带。多重敏感性为10 pg,特异性检测未从其他细菌中检测出目的条带。应用建立的多重PCR体系检测出不同组合的人工感染标本,从76只粪便检测出绿脓杆菌阳性1例,与传统检测方法结果一致。结论 本文建立的多重PCR方法具有特异、灵敏、简便、快速等优点,为实验动物微生物的快速检测提供了可靠的方法。

    • 一种新型大鼠动脉移植模型的建立

      2017, 27(5):99-102. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.021

      摘要 (2139) HTML (0) PDF 5.37 M (3129) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 移植物血管病(allograft vasculopathy, AV)限制着移植器官功能及远期存活,是器官移植领域最迫切需要解决的世界性难题。传统的血管缝合方式需要优秀的显微外科技术,开展困难。探索出更为简便、可行的动脉移植方法,可为临床研究AV提供思路。方法 采用静脉留置针管自制血管套管,取供体大鼠胸主动脉牵拉入套管并两端翻转、结扎固定为移植体,将该移植体植入受体大鼠腹主动脉并于造模后1周、4周、8周取移植段动脉行HE染色,观测移植血管形态、测量内膜厚度。结果 40只受体大鼠中有38只健康存活达所需检测时间点,下肢及尾巴活动自如、大小便正常,且HE染色可见移植段血管内膜表现为与AV一致的同心圆样增厚。结论 此种大鼠动脉移植方法简便可行,较传统血管缝合方法可明显缩短腹主动脉阻断时间、减轻受体大鼠的手术创伤、造模成功率高,可复制性强。

    • >海外漫步
    • 美国国家灵长类研究中心的运营管理及启示

      2017, 27(5):103-110. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.022

      摘要 (2664) HTML (0) PDF 14.76 M (3144) 评论 (0) 收藏

      摘要:主要介绍美国国家灵长类研究中心的建立、发展、战略布局和运行管理机制。从而探索美国在实验灵长类动物的资源开发、生物学特性研究和服务于生命科学研究等方面所做的工作和取得的成绩,以期为我国实验灵长类动物资源挖掘、遗传多样性研究、表型分析、模型制备和药物评价等方面的工作提供参考与借鉴,取长补短,促进我国十三五期间实验灵长类动物学科发展和服务能力的提升。

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