摘要:目的 建立一种稳定、可实时监测的胶质瘤原位移植瘤裸鼠模型。方法 用带有荧光素酶（luciferase-Luc）和绿色荧光蛋白（green fluorescent protein-GFP）基因的慢病毒感染U251神经胶质瘤细胞，流式细胞仪筛选稳定表达GFP-Luc荧光的细胞系，并通过CCK-8实验、细胞周期实验、Transwell肿瘤迁移及侵袭实验等评价荧光细胞的增殖、迁移和侵袭能力是否改变；将细胞接种至裸鼠大脑尾状核，建立胶质瘤原位移植瘤模型，利用小鼠活体成像系统监测脑内肿瘤的生长情况，并通过石蜡切片，HE染色评价细胞在裸鼠脑内的病理特征及成瘤能力。结果 成功构建稳定表达GFP荧光和luciferase荧光的U251胶质瘤细胞系及动物模型，慢病毒整合并未改变细胞的增殖、迁移及侵袭能力；模型生长周期适中，成瘤率高，瘤体在颅内生长稳定，HE切片符合人胶质瘤特征。结论 双荧光标记的胶质瘤细胞相比于传统细胞更有利于胶质瘤动物模型的实验研究；U251-GFP-Luc胶质瘤细胞裸鼠模型，其肿瘤生长和病理特性与人胶质瘤相似，且可实时观察肿瘤生长，可作为胶质瘤实验研究的理想动物模型。

摘要:目的 研究蕨麻猪与巴马小型猪脏器指数及低氧相关基因表达量的差异。方法 采用TaqMan探针实时定量PCR（real-time quantitative PCR）技术，检测蕨麻猪与巴马小型猪心、肝、脾、肺、肾低氧反应基因表达量的变化。结果 蕨麻猪的肾脏、脾脏指数低于巴马小型猪，蕨麻猪的心脏、肺脏指数高于巴马小型猪。蕨麻猪血管内皮细胞生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）与低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor 1，HIF-1α）在肺、肾中的表达量明显比普通猪高（P<0.05或P<0.01）；促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）只在肺中比巴马小型猪高（P<0.05）。结论 不同物种脏器指数可能是物种对物质环境、能量环境、外界病原体、能量代谢需求等综合因素进化适应的结果。蕨麻猪低氧相关基因明显比巴马小型猪高，揭示在基因方面蕨麻猪具有较强的高原适应性。

摘要:目的 探讨尼莫地平对过氧化氢（H₂O₂）诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法 PC12细胞随机分为正常组，模型组（200 μmol/L H₂O₂），尼莫地平低、中、高浓度组（1、10、100 μmol/L尼莫地平+200 μmol/L H₂O₂）。MTT法检测各组细胞活力，Hoechst染色各组细胞凋亡情况，比色法检测天冬氨酸蛋白水解酶（caspase 3），caspase 9及超氧化物歧化酶（SOD）活性与丙二醛（MDA）含量，western blot分析B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）及p53蛋白。结果 与正常组比较，模型组中细胞活力下降，细胞凋亡率提高，caspase 3及caspase 9提高，SOD活性降低，MDA含量降低，Bcl-2表达量下降，Bax及p53表达量上升，差异均具有统计学意义（P<0.01）；与模型组比较，尼莫地平低、中、高浓度组细胞活力提高，细胞凋亡率降低，caspase 3及caspase 9活性降低，SOD活性提高，MDA含量提高，Bcl-2蛋白表达量提高，Bax及p53表达量降低，差异均具有统计学意义（P<0.01）。结论 尼莫地平可通过调控细胞凋亡相关蛋白表达，从而抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡。

摘要:目的 观察尾悬吊大鼠再负重骨量的变化及辛伐他汀干预对该过程的影响及机制。方法 5月龄大鼠24只分为4组，每组6只：正常对照组（CL组）、尾悬吊6周组（UL组）、尾悬吊3周再负重3周组（UL+RL组）、尾悬吊3周再负重加辛伐他汀干预3周组（10 mg/kg/d，UL+RL+SIM组）；实验持续6周，处死大鼠取左侧股骨进行骨密度分析，取左侧胫骨行骨组织形态计量学分析；取右侧股骨经生物力学试验分析最大载荷和弹性模量；取右侧胫骨制备组织匀浆，提取RNA和蛋白，分别采用real-time PCR和western blot检测I型胶原（Col I）的表达。结果（1）骨密度：CL组显著高于其余3组（P<0.05），UL+RL组和UL+RL+SIM组均显著高于UL组（P<0.05）；（2）骨组织形态计量学：BV/TV：CL组显著高于其余3组（P<0.05），UL+RL组和UL+RL+SIM组均显著高于UL组（P<0.05）；Tb.N：CL组显著高于其余三组（P<0.05）；Tb.Th：CL组显著高于UL组（P<0.05）；Tb.Sp：CL组显著低于其余三组（P<0.05），UL+RL组和UL+RL+SIM组均显著低于UL组（P<0.05）。（3）生物力学检测结果：CL组最大载荷、弹性模量显著高于其他3组（P<0.05）。（4）Realtime PCR检测结果：各组间ColⅠ的mRNA表达水平无显著差别。（5）Western blot： UL组ColⅠIOD值显著低于CL组（P<0.05），其余组间差异无显著性。结论 大鼠尾悬吊诱发下肢骨量丢失、微结构退变、力学性能下降、I型胶原含量减少，而再负重后上述指标可得到部分恢复，辛伐他汀干预不能促进这一过程。

摘要:目的 海马内微量注射K252a，研究其对大鼠行为学及抑郁样经典指标的影响，拟建立一种新型抑郁症动物模型。方法 SD大鼠随机分为5组，即空白对照组、假手术组、慢性应激抑郁模型组、海马内微量注射K252a组、海马内微量注射K252a联合慢性应激组。采用Open field实验、糖水消耗实验、Morris水迷宫测定大鼠行为学的影响，ELISA法检测大鼠血清单胺递质含量的变化，放射免疫法观察大鼠血浆CRH、ACTH、CORT含量的变化，Western blotting观察大鼠海马BDNF、CREB、ERK1/2、BCL-2蛋白表达的变化。结果 与空白对照组比较，CUMS组大鼠的活动量、糖水消耗量、学习记忆能力显著降低（P<0.05或P<0.01），HPA轴功能亢进（P<0.01），血清单胺递质水平降低（P<0.01），BDNF、CREB、ERK1/2、BCL-2的表达下调（P<0.01或P<0.05），而DMSO组上述指标差异无统计学意义；与DMSO比较，K252a组、K252a+CUMS组活动量、糖水消耗量、学习记忆能力显著下降（P<0.01或P<0.05），血清单胺递质水平下降（P<0.01或P<0.05），HPA轴功能显著上升（P<0.01或P<0.05），海马BDNF、CREB、ERK1/2、BCL-2的表达显著下降（P<0.01或P<0.05）；与CUMS组比较，K252a组、K252a+CUMS组大鼠上述指标差异无显著性；与K252a组比较，K252a+CUMS组大鼠上述指标差异无显著性。结论 从行为学、血液学、分子生物学的不同角度分析表明，此模型与经典的慢性应激抑郁模型在表面效度、结构效度、功能效度上具有极大的相似性，可为病因研究和抗抑郁药物筛选提供一个可供选择的研究技术平台。

摘要:目的 探究二脒那秦（DIZE）对肺动脉高压（PAH）模型大鼠的预防及治疗作用。方法 采用左肺叶切除联合野百合碱（MCT）腹壁皮下注射建立PAH大鼠模型，100只成年雄性Wistar大鼠随机分成空白对照组（A组）、DIZE对照组（B组）、PAH模型组（C组）、DIZE处理PAH模型组（D组）和（DIZE+C-16）处理PAH模型组（E组），利用活性荧光共振能量转移（FRET）和酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血管紧张素转化酶2（ACE2）、血清IL-6及IL-8水平，并测定平均肺动脉压（mPAP）、右心室肥厚指数（RVHI），计算中膜厚度与肺动脉外径的比例（WT）、内膜增生评分，并通过弹力纤维染色分析肺血管病变。结果 RVHI、ACE2酶活性、WT及内膜增生评分比较：与A组比较，C组、D组和E组差异有统计学意义（P<0.05）；D组和E组差异有统计学意义（P<0.05）。五个组在各个指标整体分析中差异有统计学意义（P<0.05）。结论 二脒那秦可以提高ACE2酶活性，并有效降低mPAP、RVHI和WT，同时减轻肺动脉中膜肥厚，并抑制肺小动脉内膜增生。该研究结论为二脒那秦治疗人类PAH提供实验基础。

摘要:目的 比较3种麻醉方法在幼龄小型猪构建颅骨缺损模型及修复实验中的麻醉效果，从而探索简便、安全、有效的最佳麻醉方案。方法 幼龄贵州小型猪30头，雌雄各半，随机分为3组，每组10头，A组采用咪达唑仑与氯胺酮组混合液肌内注射；B组采用肌内注射陆眠宁II注射液麻醉；C组咪达唑仑联合氯胺酮与陆眠宁II复合肌内注射麻醉。比较3组的麻醉显效时间、首次麻醉维持时间、第1次追加药物麻醉维持时间、第2次追加药物麻醉维持时间、苏醒时间、术中麻药追加次数、麻药累积量、术后动物不良反应及死亡率。结果 B组显效时间长于A、C两组（P<0.05）；C组首次麻醉维持时间、第1次追加药物麻醉维持时间、第2次追加药物麻醉维持时间的时长明显大于A、B两组（P<0.05）；A、C组苏醒期明显短于B组（P<0.05）；C组的追加麻药的次数、用药总剂量、术后不良反应率及死亡率明显低于A、B组（P<0.05）。结论 咪达唑仑联合氯胺酮与陆眠宁II复合麻醉是一种操作简单、麻醉深度可控、安全性高的适于手术时间较长的幼龄小型猪外科实验的的麻醉方法。

摘要:目的 构建慢病毒介导稳定敲低Smurf1的HeLa和A549细胞株并检测敲低Smurf1细胞迁移的影响。方法 将包装好的Smurf1敲低慢病毒感染HeLa和A549细胞，7 d后进行嘌呤霉素抗性筛选阳性细胞，Western blot和qPCR检测敲低效果，并进行Transwell检测Smurf1敲低对细胞迁移的影响。结果 利用干扰慢病毒系统成功构建稳定敲低Smurf1的HeLa和A549细胞株，稳定敲低Smurf1抑制细胞的迁移速率。结论 敲低Smurf1抑制细胞迁移。

摘要:目的 利用CRISPR/Cas9系统，敲除小鼠黑色素瘤细胞系的MATP基因，为MATP基因的功能研究奠定基础。方法 利用http：//crispr.mit.edu/网站，设计针对MATP的特异性引物，并将引物链接到pCAS9/gRNA1载体。将阳性载体转染小鼠黑色素瘤细胞系B16F10，利用无限稀释的方法获得转染后的单克隆细胞株。提取不同细胞株的基因组，通过测序的方法进一步筛选出发生MATP基因切割的细胞株，并利用Western-blot的方法验证MATP的表达情况。结果 成功获得了3株MATP基因敲除的细胞株，Western-blot结果表明，该细胞株不表达MATP蛋白。结论 利用pCAS9/gRNA1载体，可以实现B16F10细胞系MATP基因的敲除。

摘要:目的 探讨Shkbp1缺失小鼠（Shkbp-1^-/-）的血液、骨髓、脾脏中血液细胞分类和T细胞亚群的变化。方法 采用Shkbp-1^-/-转基因小鼠，经PCR鉴定基因型；利用全自动血液检测仪测定血液细胞分类；采用流式细胞仪检测Shkbp-1^-/-和对照组小鼠血液、骨髓、和脾脏中T淋巴细胞亚群。结果 血常规结果：中性粒细胞和嗜酸性粒细胞有增高趋势，且有显著差异。淋巴细胞未见显著差异。流式结果显示：对照组血液中CD4⁺CD8⁺双阳性细胞降低，骨髓中CD3⁺、CD4⁺升高。但脾脏组织中，其CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺CD8⁺双阳性细胞均呈下降趋势。结论 Shkbp1参与血液细胞的成熟分化，影响了免疫细胞数量，本研究为探索Shkbp1如何参与血液细胞的分化奠定了研究基础。

摘要:目的 了解ICR小鼠下颌第一磨牙牙胚的发育时序特点，为使用小鼠研究牙齿发育机制和相关影响因素提供实验基础。方法 分别取E（胚胎）11.5、E12.5、E13.5、E14.5、E15.5、E16.5、E17.5和E18.5 d的胎鼠和PN（出生后）2 d的新生小鼠的头部或下颌骨，固定脱钙包埋后行连续切片，进行HE染色，在显微照相系统下进行观察记录，分析ICR小鼠磨牙牙胚发育的动态变化规律。结果 E11.5 d为牙胚发育始动，E12.5 d牙胚向蕾状期过渡，E13.5 d进入蕾状期，帽状期为E14.5～E15.5 d，钟状期开始于E16.5 d，出生后2 d牙体硬组织开始逐渐形成。结论 ICR小鼠胚胎11 d至出生后第2天是研究下颌第一磨牙牙胚发育机制的最佳时机。

摘要:目的 探讨C57BL/6J（B6）小鼠冷冻复苏胚胎移植后所得小鼠及其子代的平均体增长和血液生化等部分生物学特性数据的变化。方法 实验分为3组。实验组I：冻融胚移植组，B6小鼠体外受精后的2-cell胚胎采用EFS法冷冻，复苏后移植到受体（ICR小鼠）输卵管内所产的小鼠（雄鼠30只，雌鼠20只）；实验组II：冻融胚胎移植所产的小鼠成熟后经自然交配得到的子一代（雄鼠26只，雌鼠17只）；对照组：正常饲养和自然交配所得的子代（雌雄小鼠各20只）。3组小鼠饲养至16周龄，每周定时测定体质量，至16周龄时采血，测定各组小鼠血清生化值，并进行分析比较。结果 实验组I雌雄小鼠初生重和1～16周的平均体重均显著高于对照组（P<0.01），实验组II雌鼠体重从12周开始均显著高于对照组（P<0.01），而雄鼠只有部分周龄与对照组有差异，其余周龄则差异无显著性；实验组I和实验组II小鼠的血清生化值与对照组相比除AST、TP和Ca等项目无变化外，其余项目均发生了显著或极显著的上调或下调。结论 冷冻对胚胎移植所得小鼠及其自然繁殖子一代的平均体增长和血清生化值有一定影响。

摘要:目的 了解小鼠脑脊髓炎病毒（TMEV）自然感染情况，探究人工感染TMEV小鼠体内各脏器组织中病毒分布及血清抗体变化。方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光定量RT-PCR（qRT-PCR）检测方法对2010年～2015年广东地区采集的SPF级小鼠、开放环境饲养的小鼠以及野生褐家鼠临床样本进行TMEV检测。36只ICR小鼠经脑内接种TMEV BeAn病毒，每天观察动物的临床症状，在接种第0、3、7、10、17、21、31、39、46天每个时间点分别对3只动物安乐死，剖检并取血清和组织脏器样本进行TMEV检测。结果 SPF级小鼠TMEV抗体阳性率为5.29%（n=2834），核酸阳性率为27.27%（n=457）；开放环境饲养的小鼠的抗体和核酸阳性率分别为71.95%（n=82）和53.66%（n=82）；野生褐家鼠中核酸阳性率为25.93%（n=27）。TMEV阳性小鼠中仅有两只小鼠表现有明显的临床症状。盲肠内容物、粪便和脑是qRT-PCR检测的最佳选择样本。ICR小鼠脑内接种TMEV BeAn病毒后第3 d可在脑、心脏、肝脏、肺脏和胃中检测到病毒核酸，脾脏、肾脏和盲肠中未检测到病毒核酸。肝脏、心脏、肺脏和胃中的病毒在接种后第10天已完全清除，脑中的病毒一直持续存在到第46天试验结束。小鼠感染后第7天可以检测到抗体，随后抗体水平逐渐升高，接种后17 d抗体阳性率达100%，并一直到46 d都可以维持较高的抗体水平。人工感染小鼠呈隐性感染，临床上并未表现明显症状和眼观病理变化。结论 广东地区实验小鼠和野生褐家鼠均存在TMEV感染，且感染率较高。小鼠接种TMEV BeAn毒株后呈隐性感染，感染小鼠第7天可以产生抗体且持续存在。病毒在感染小鼠肝脏、心脏、肺脏和胃中短时间存在，而在脑中长期存在。qRT-PCR与ELISA两种检测方法具有较好的一致性，qRT-PCR检测方法可作为实验动物国家标准的有力补充。

摘要:目的 比较单一情绪刺激与复合情绪刺激对肝郁证动物模型的影响，以期筛选出一种更加贴近临床肝郁证候表现的造模方法。方法 通过前期筛选，分别建立夹尾法，四肢捆绑法和颈部带枷法的单一造模模型和三种方法复合造模的模型。建立肝郁证人与大鼠证候对照表以及肝郁证大鼠证候赋分表，结合中医证候指标、一般观察、体重指标、阳性药物反证以及体内激素指标的测定，以验证造模结果。结果 正常组大鼠生长状况良好；模型组大鼠主要表现为急性应激躁狂和慢性应激抑郁，粪便干、少、小，多数出现眼睛暗红、脱毛、呼吸急促的症状，大鼠体重增长率降低，下丘脑CRH水平、血浆CORT、ACTH水平与正常对照组相比显著升高，且复合造模组成模效果效果明显优于单一造模组；阳性药物组经药物治疗后其症状明显好转，各指标也趋近正常组。结论 使用夹尾、四肢捆绑和颈部带枷复合情志造模法构建肝郁证大鼠模型周期短、稳定性好、成功率高，模型动物表现与临床肝郁证证候有较高的一致性。

摘要:目的 rd小鼠是一种出生1周左右自发致盲的遗传性视网膜变性小鼠。通过母婴分离应激实验，检测其对rd新生小鼠的焦虑样和抑郁样行为的影响，初步评价rd小鼠能否成为眼部疾病与焦虑抑郁研究新的模型。方法 将出生第1天的rd小鼠分为母婴分离组（n=9）和对照组（n=9）。母婴分离组每天与母鼠分离4 h，共分离28 d。从第29天开始行为测试实验，通过Smart3动物行为跟踪软件检测母婴分离组和对照组在旷场实验和十字高架实验中的焦虑样行为，在强迫游泳实验和悬尾实验中的抑郁样行为。结果 在旷场实验中，母婴分离组在旷场中心的时间比例（0.88%）和运动距离（28.17±5.65）cm均明显少于对照组（2.61%，109.9±9.79 cm；P=0.04，P=0.001）；在十字高架实验中，母婴分离组在开放臂的时间（40.64±4.13）s明显少于对照组（91.73±11.26 s，P<0.01）；在强迫游泳实验中，母婴分离组的不动时间（126.5±10.22）s明显多于对照组（77.75±16.83 s，P=0.02）；在悬尾实验中，母婴分离组的不动时间（21.56±6.83）s多于对照组（7.37±3.22 s，P=0.03）。结论 rd小鼠母婴分离28 d应激，能够明显增加rd小鼠的焦虑样行为和抑郁样行为。

摘要:目的 建立基于人细胞系的替代皮肤致敏动物实验的体外检测方法（h-CLAT），并对化学品、日用化学产品和化妆品植物原料进行皮肤致敏性检测。方法 体外培养人急性单核细胞白血病细胞（THP-1），不同浓度受试物与细胞共孵育24 h，通过流式细胞仪检测细胞表面标志物CD86和CD54活化的差异，并对11种已知皮肤致敏化学物质和9种未知样品进行皮肤致敏性预测。同时对未知样品进行豚鼠局部封闭涂皮法验证。结果 使用h-CLAT方法准确区分了11种参考物质的皮肤致敏性，9种受试样品中，7种样品被判断为阴性皮肤致敏物质，2种植物提取物被确认为皮肤致敏疑似物质。9种样品的预测结果与动物实验一致。结论 h-CLAT体外检测方法可以代替部分动物测试，用于可溶性皮肤致敏物质的预测。