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钟华 , 潘汉世 , 马玲 , 龙寒 , 陈凤莲 , 廖艳娟 , 唐海波 , 吴健敏
2017, 27(2):1-6. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.001
摘要:目的 克隆广西巴马小型猪PERV-env部分基因,并研究其在不同组织中的表达差异。方法 利用RT-PCR方法从巴马小型猪外周血白细胞中扩增PERV-env基因,并与部分国内外已发表的PERV-env基因序列进行同源性及遗传进化分析。以扩增获得的广西巴马小型猪PERV-env基因为模板设计引物,利用半定量RT-PCR的方法对广西巴马小型猪不同组织中PERV mRNA表达情况进行分析。结果 在所检测的9个组织样品中PERV mRNA相对表达水平存在差异,肾及外周血淋巴细胞中PERV mRNA丰度最高,肺、心、肝、脾、胸腺、卵巢次之,且表达丰度差异不显著(P>0.05),胰腺PERV mRNA表达丰度最低。结论 以巴马小型猪胰岛细胞进行异种移植发生PERV感染的潜在危险性可能要低于其它器官,但仍需进一步研究证实。
姜慧玲 , 关桥伟 , 龚林 , 肖业伟 , 余广 , 冯志强 , 盘强文
2017, 27(2):7-14. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.002
摘要:目的 探讨微量元素锶改善大鼠非酒精性脂肪肝的机制。方法 50只SD大鼠随机分为对照组、模型组、18 mg/L锶组、36 mg/L锶组和辛伐他汀组。对照组进食普通饲料,其余4组进食高脂饲料,第6周起给予18 mg/L和36 mg/L锶组浓度分别为18 mg/L和36 mg/L含锶饮用水,第11周起进行灌胃,18 mg/L和36 mg/L锶组分别灌浓度为18 mg/L和36 mg/L含锶水3 mL/kg体重,辛伐他汀组灌辛伐他汀10 mg/kg体重,对照组与模型组灌生理盐水3 mL/kg体重。第14周末处死大鼠,检测血清TG、TC、LDL-C和肝组织TG、TC含量,并行肝组织油红O染色观察脂肪变性情况,免疫组化检测肝组织GRP78、SREBP2、HMGCR和LDLr蛋白表达水平。结果 与对照组比较,模型组的血清TC、LDL-C和肝TC、TG均升高(P<0.05),与模型组比较,36 mg/L锶组血清TC、LDL-C和肝TC、TG均降低(P<0.05)。油红O染色显示模型组肝组织含大量的红染脂质颗粒,18 mg/L锶组、36 mg/L锶组及辛伐他汀组红染颗粒均较模型组不同程度减少(P<0.05)。免疫组化结果显示:模型组大鼠肝组织GRP78、SREBP2、HMGCR和LDLr蛋白表达水平,18mg/L锶组大鼠肝组织GRP78、SREBP2和LDLr蛋白表达水平,36 mg/L锶组大鼠肝组织LDLr蛋白表达水平及辛伐他汀组大鼠肝组织SREBP2和LDLr蛋白表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。36 mg/L锶组大鼠肝组织GRP78、SREBP2和HMGCR蛋白表达水平明显低于模型组,而LDLr蛋白表达水平明显高于模型组;辛伐他汀组大鼠肝组织GRP78和HMGCR蛋白表达水平明显低于模型组(P<0.05);而18 mg/L锶组大鼠肝组织GRP78、SREBP2、HMGCR和LDLr蛋白表达水平较模型组无显著差异(P>0.05)。结论 长期较高浓度锶摄入可改善脂代谢紊乱,减轻NAFLD,其作用机制可能与调节内质网应激、HMGCR活性和LDLr的功能等有关。
丁丽 , 朱恒 , 张海宏 , 杨洋 , 韩冬梅 , 王志东 , 郑晓丽 , 董磊 , 闫洪敏 , 刘静 , 朱玲 , 薛梅 , 郭子宽 , 王恒湘
2017, 27(2):15-20. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.003
摘要:目的 研究小鼠脾脏间充质干细胞(Sp-MSCs)对T淋巴细胞增殖与活化的调节作用。方法 采用组织块法从小鼠脾脏中分离培养出Sp-MSCs,并做多向诱导分化实验。分离小鼠T淋巴细胞,开展淋巴细胞转化试验和混合淋巴细胞反应,分别检测Sp-MSCs对于非特异抗原和同种异体抗原活化的T淋巴细胞的影响。以CFSE流式法检测Sp-MSCs对活化的T淋巴细胞增殖的影响。采用定量PCR分析Sp-MSCs对T淋巴细胞表达的炎性细胞因子的影响。结果 流式检测结果显示Sp-MSsC可以抑制非特异抗原和同种异体抗原引起的T淋巴细胞增殖。Sp-MSCs能够有效抑制淋巴细胞转化试验和混合淋巴细胞反应引起的细胞活化。进一步分析发现,Sp-MSCs抑制T淋巴细胞表达干扰素γ,肿瘤坏死因子α和白细胞介素17A。结论 Sp-MSCs能够抑制T淋巴细胞增殖与活化,抑制T淋巴细胞表达多种炎性细胞因子。
2017, 27(2):21-24. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.004
摘要:目的 建立一种新的裸小鼠胃癌原位移植模型。方法 采用Matrx VIP 3000型气体麻醉系统对实验动物进行麻醉。分别用“包埋法”、“挂线法”、和“胃囊法”建立BALB/c裸小鼠胃癌原位移植瘤模型。术后用Caliper IVIS Kinetic小动物活体成像系统对实体瘤的生长情况进行检测和分析。术后28 d对肿瘤组织进行组织病理学检查。结果 采用包埋法建立胃癌原位移植裸小鼠模型,除了与其它常用方法一样具有高移植成功率以外,还具有操作简便、时间短、难度低、肿瘤组织不易与其它组织直接接触等特点。结论 包埋法能快速制备大批量小鼠胃癌原位移植模型,为胃癌原位移植模型相关研究提供便利。
2017, 27(2):25-28,80. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.005
摘要:目的 对斑马鱼进行几种病原菌的流行病学调查,为后续相关标准的制定提供依据。方法 基于细菌的形态学及生理生化特性为基础的传统方法,并与分子生物学方法相结合,最后分离株人工感染健康斑马鱼,观察实验组发病、死亡情况以判定其对斑马鱼的致病性强弱,从而了解影响斑马鱼健康的主要病原菌。结果 在所有采样单位共检出3种病原菌,包括嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和铜绿假单胞菌。嗜水气单胞菌普遍存在于大多数被检单位,且有较强的致病力。个别单位检出温和气单胞菌和铜绿假单胞菌。温和气单胞菌致病力稍弱;铜绿假单胞菌致病力最弱,感染斑马鱼无典型临床症状,无死亡。结论 嗜水气单胞菌可能造成实验用鱼设施的污染,嗜水气单胞菌已证明可以感染人类,此类潜在的人-鱼感染途径应引起重视。由此建议,嗜水气单胞菌应成为重点监控的病原菌。
2017, 27(2):29-33. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.006
摘要:目的 探讨在大鼠子宫角安置瘘管导管的可行性。方法 对大鼠进行麻醉后,在近子宫体端子宫角放置瘘管导管,并进行组织病理学和妊娠功能的研究。结果 大鼠子宫内膜厚度瘘管模型组内瘘管留置侧子宫角(497.68±81.64)μm与对照组(537.90±77.29)μm和瘘管模型组内对侧子宫角(503.56±76.34)μm相比差异不显著(P>0.05);大鼠胚胎植入数量瘘管模型组(9.67±1.95)个与对照组(12.15±2.06)个相比显著减少(P<0.05);瘘管模型组内瘘管侧子宫角(5.83±3.54)个与对侧子宫角(6.17±3.67)个相比差异不显著(P>0.05)。结论 子宫角瘘管导管模型对大鼠子宫组织结构影响较小,能够满足向子宫腔内长期注射病原微生物或者化学药物等的试验要求。
蓝伦礼 , 江滨 , 刘梦楚 , 邹晓红 , 曹骋 , 曾元儿 , 庞嘉颖
2017, 27(2):33-43. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.007
摘要:目的 探讨不同剂量酵母、腺嘌呤和不同造模持续时间对大鼠痛风性肾病模型的影响。方法 模型组雄性SD大鼠用15 g/kg酵母粉和50 mg/kg、100 mg/kg腺嘌呤分别灌胃,同时分别设置8、10、22、48的造模天数。比较各组肾脏肥大指数的大小,检测大鼠肾功能,尿液指标的变化,肾皮质β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)含量,肝脏黄嘌呤氧化酶(XOD)活性的变化,同时观察大鼠肾脏病理改变。并用免疫组化技术检测肾脏组织NGAL、OAT1和TIMP-1的表达。结果 随着模型组造模剂浓度的增加和造模时间的延长,肾脏病理改变越明显。100 mg/kg腺嘌呤和15g/kg酵母共同造模8 d,与正常对照组比较,该组肾脏病理组织变化明显,炎性细胞浸润肾小管上皮细胞肿胀,肾小管和肾小球结构未被破坏;肾脏肥大指数较正常对照组增大(P<0.01);与正常对照组比较,模型A组,B组、E组、F组肾功能下降(P<0.01),模型A组、B组、E组、F组大鼠的24 h尿量,尿蛋白含量增多(P<0.01)。模型E组大鼠肾组织NGAL、TIMP-1的表达高于正常组大鼠(P<0.01),OAT1的表达低于正常组大鼠(P<0.01)。结论 100 mg/kg腺嘌呤和15 g/kg酵母共同造模8 d为较理想的造模剂量和造模持续时间,痛风性肾病模型大鼠肾损伤受蛋白NGAL、TIMP-1和OAT1的影响。
2017, 27(2):44-48. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.008
摘要:目的 建立盐酸格拉司琼透皮贴剂在Beagle犬中的血药浓度测定方法,通过Beagle犬多剂量给药,揭示盐酸格拉司琼透皮贴剂在Beagle犬体内的药代动力学变化规律,阐明其在Beagle犬体内的药代动力学特征,提供重要的动力学参数。方法 Beagle犬给予盐酸格拉司琼透皮贴剂6次,每次贴片持续72 h,每次撤药和下次给药间隔24 h。用建立的HPLC-MS/MS法测定血浆中的格拉司琼的浓度,根据所得的血浆药物浓度-时间曲线,计算药动学参数。结果 第1次给药和第6次给药后的谷浓度Cmin分别0.0459 ng/mL和0.2593 ng/mL,峰浓度Cmax分别为0.4637 ng/mL和1.3428 ng/mL,AUC0~96分别为18.92 h·ng/mL和40.21 h·ng/mL,第1次给药和第6次给药后的Tmax分别为48.3 h和45.3 h,MRT0-96分别为48.9 h和45.84 h。结论 多次给药后格拉司琼在体内存在一定的蓄积效应,并在多次给药后第16天到达稳态。
2017, 27(2):49-54. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.009
摘要:目的 有研究表明人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)具有多种分化和增殖功能,其可以诱导分化成肝样细胞,从而对肝损伤有一定的修复作用。方法 体外复苏培养人羊膜间充质干细胞,66只健康雌性Wistar大鼠,随机取22只,不做任何处理为正常对照组,余44只采用白酒灌胃30 d的方式建立大鼠慢性酒精性肝损伤模型,建模后将其随机分为模型组(尾静脉注射1 mL PBS),hAMSCs组(经尾静脉注入1 mL hAMSCs(2×106个),每组各22只。于移植后4周,采用全自动生化分析仪分别检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清总胆红素(TBIL)、血清白蛋白(ALB)、血清总蛋白(Tp);同时检测检测各组大鼠肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)、以及丙二醛(MDA)、IL-4含量变化;免疫荧光显微镜观察PKH-26标记的hAMSCs分布情况,TUNEL法检测各组肝细胞凋亡情况。结果 各组大鼠血生化检测结果显示,与正常对照组比较,模型组中ALT、AST、TBIL、Tp含量均显著升高,而与模型组比较,hAMSCs移植组中ALT、AST、TBIL、Tp含量均显著下降(P<0.05),与正常对照组比较,模型组中ALB含量明显下降,而与模型组比较,hAMSCs移植组中ALB含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,hAMSCs移植组SOD、GSH-PX、CAT含量均显著增高,MDA、IL-4含量均显著下降,与正常对照组比较,hAMSCs移植组SOD、GSH-PX、CAT含量均降低,MDA、IL-4含量均升高(P<0.05);移植组可见移植的PKH-26标记阳性的hAMSCs细胞分布于肝脏组织内,其余各组未见此类细胞分布(P<0.05);TUNEL法检测各组肝细胞凋亡可见凋亡细胞数,模型组最多(34.27±5.71),hAMSCs移植组次之(18.42±3.95),正常对照组未见凋亡细胞。结论 人羊膜间充质干细胞移植能够改善大鼠肝硬化的血生化指标水平,hAMSCs移植后可以减轻慢性酒精性肝损伤大鼠的肝脏细胞凋亡。
乔实 , 贾化平 , 梁会泽 , 李华 , 张明明 , 宋文静
2017, 27(2):55-58,80. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.010
摘要:目的 探讨单次静脉注射顺铂致兔急性肾损伤(AKI)的病程进展规律。方法 雄性新西兰兔40只,随机分为5组,每组8只。经耳缘静脉单次注射顺铂(5 mg/kg)制作急性肾损伤模型,按照观察时间点分为注射顺铂后6 h组(T6)、12 h组(T12),24 h组(T24),36 h组(T36)及48 h组(T48),分别于注射前及注射后相应时间点检测兔静脉血血尿素氮(BUN)及血肌酐(SCr)值。应用SPSS 22.0统计软件对数据进行统计分析,P<0.05为差异具有统计学意义。在各实验节点,处死实验兔,获取各组兔肾组织标本,常规石蜡切片,HE染色光镜下观察。结果 与注射前相比,注射顺铂后各组BUN及SCr值均明显升高,建模24 h以后各组所有实验兔达到急性肾损伤标准,损伤呈进行性加重。HE染色光镜下观察以T48组变化更明显。结论 单次静脉注射顺铂可引起兔急性肾功能损害,48 h内呈进行性加重。
龚菁菁 , 王存龙 , 李银银 , 李小红 , 杜小燕 , 陈振文
2017, 27(2):59-63. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.011
摘要:目的 分析糖尿病长爪沙鼠Rxra基因在6种组织中的表达水平,以期探索长爪沙鼠糖尿病发生的分子机制。方法 选取糖尿病长爪沙鼠和正常沙鼠各6只,分别采集动物的骨骼肌、肝脏、脂肪、肾脏、心脏和脑组织,用Real-time PCR和Western blotting检测Rxra基因在各组织中mRNA和蛋白表达水平。结果 Real-time PCR的结果表明,Rxra基因的mRNA水平在糖尿病组动物骨骼肌和脂肪中显著降低,在肝脏中无差异,而在肾脏、心脏和脑组织中则有高表达趋势。Western blotting结果显示,糖尿病组RXRA的蛋白水平在骨骼肌组织中显著降低,在脂肪组织几乎检测不到,在其他各组织表达情况有所不同,但没有统计学差异。结论 Rxra在糖尿病长爪沙鼠骨骼肌和脂肪组织中低表达,在其他4种组织中表达水平无差异,说明Rxra对长爪沙鼠糖尿病的影响主要发生在骨骼肌和脂肪组织中。
潘金春 , 赵维波 , 陈梅玲 , 吴瑞可 , 闵凡贵 , 黄树武 , 邝慧文 , 张钰
2017, 27(2):64-69,85. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.012
摘要:目的 调查2013~2015年广东地区实验小鼠和大鼠的病原携带情况。方法 本文涉及的样品主要来源于监督检测的抽样样品和委托检测的送样样品,共收集到广东省12家监督单位和32家委托单位样品。按照国家标准要求的项目及标准外的螺杆菌和小鼠诺如病毒进行检测。结果 监督检测和委托检测结果存在较大差异。3年中监督检测的小鼠检出4种病原,包括绿脓杆菌(0.7%)、嗜肺巴斯德杆菌(0.3%)、肺炎克雷伯杆菌(0.7%)和鞭毛虫(1.7%),未检出病毒;大鼠检出1种病原即嗜肺巴斯德杆菌(1.1%),未检出病毒和寄生虫。委托检测的小鼠检出15种病原,包括绿脓杆菌(3.7%)、嗜肺巴斯德杆菌(5.2%)、支原体(1.9%)、金黄色葡萄球菌(0.7%)、肺炎克雷伯杆菌(0.8%)、螺杆菌(45.3%),小鼠肝炎病毒(8.5%)、小鼠脑脊髓炎病毒(7.0%)、小鼠诺如病毒(16.2%)、鼠痘病毒(0.3%)、小鼠细小病毒(0.5%)、仙台病毒(0.1%)、鞭毛虫(11.7%)、蠕虫(1.0%)、体外寄生虫(0.1%)。大鼠检出8种病原,包括绿脓杆菌(3.4%)、嗜肺巴斯德杆菌(8.6%)、支原体(0.9%)、金黄色葡萄球菌(2.9%)、泰泽病原体(4.8%)、大肠杆菌(1.0%)、大鼠细小病毒H-1株(3.0%)、大鼠冠状病毒(1.0%),未检出寄生虫。其中,实验小鼠7种病原,包括绿脓杆菌、嗜肺巴斯德杆菌、螺杆菌、鞭毛虫、小鼠肝炎病毒、小鼠脑脊髓炎病毒和小鼠诺如病毒,大鼠2种病原,包括金黄色葡萄球菌和泰泽病原体,检出范围广、检出率较高,而且存在区域分布特点,即设施污染后能在多次送检的动物中检出这些病原。结论 本研究获得广东省实验大小鼠病原流行情况和分布,这些数据的统计为我国实验动物质量标准的制订提供基础数据,同时也为各动物实验设施的质量控制方案制订提供依据。
2017, 27(2):70-73. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.013
摘要:目的 伊维菌素全群药浴法治疗小鼠体外寄生虫。方法 近800只自繁自用基因工程保种小鼠,伊维菌素药浴液浓度为1%(L/L),每只鼠至少药浴游泳1 min,中途用漏勺把鼠头按压入药液3~4次。10日龄内小鼠需单独人工辅助药浴。药浴后换笼,同时环境驱虫,只药浴1次。结果 全群死亡率约2%。随访18个月,未再见到体外寄生虫,鼠群健康,繁殖正常。结论 伊维菌素注射液全群药浴法治疗小鼠体外寄生虫切实可行。
2017, 27(2):74-80. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.014
摘要:光遗传技术是Boyden等科学家在2005发明的利用激光照射实现精准控制神经元活动的神经调控技术,该技术是基因工程,生物医学工程等的完美结合。自发明以来被广泛应用于帕金森氏病、情感神经环路等研究中。2011年,该技术入选Nature Methods杂志2010年度方法。本文对光遗传技术的新进展以及在疾病模型研究中的应用做简要综述。
2017, 27(2):81-85. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.015
摘要:腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是微小病毒科的一种,它能以其广泛的宿主范围及低的免疫原性对人及灵长类进行感染,而且经过改造后的AAV能够更有效的转导特异组织及细胞。腺相关病毒作为一种基因治疗载体其生物学特性已被深入了解,通过改造腺相关病毒的血清型和蛋白衣壳结构能够扩宽其应用范围。本文对AAV病毒载体的衣壳蛋白基因工程修饰、转录水平调控修饰、基因改造和衣壳蛋白共价偶联修饰的靶向机理以及相关的一些研究成果进行介绍。
2017, 27(2):86-92. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.016
摘要:外泌体是具有磷脂双分子膜结构的纳米级囊泡,直径在30~100 nm,广泛分布于血清、唾液、尿液等体液中。外泌体中包含多种蛋白质、核苷酸、甚至病毒等遗传物质,广泛参与细胞间物质交换和信息传递。最近研究发现,肿瘤细胞分泌的外泌体中mRNA和miRNA等遗传物质直接来自母体肿瘤细胞,此外外泌体携带的遗传物质可以直接作用于受体细胞,因此外泌体可能成为肿瘤诊断和治疗的新靶点。本文对外泌体作为肿瘤诊断的标志物以及外泌体对肿瘤治疗的作用作一综述。
2017, 27(2):93-97. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.02.017
摘要:深部脑电刺激是通过对脑部相应区域进行刺激,并记录分析神经电信号,有效分析并治疗多种神经精神障碍疾病。神经刺激器和电信号记录器是该疗法应用设备的核心。本文综述了神经电信号、刺激和记录系统的特点,介绍了系统的架构和基本单元模块,分析了深部脑电刺激在神经疾病中的应用,并对未来发展趋势做了总结。