摘要:目的 敲除大鼠多药耐药基因1(Abcb1), 并在基因敲除大鼠的基础上建立Abcb1人源化大鼠模型,为Abcb1相关药物代谢和药物评价研究提供更接近人类的动物模型。方法 利用大片段转基因技术和CRISPR/Cas9技术相结合,建立人源化大鼠模型,利用PCR,RT-PCR和Real-time PCR 的方法进行鉴定及分析。 结果 将包含人源Abcb1 启动子和cDNA的153 kb BAC片断转入到大鼠基因组,获得稳定表达h-Abcb1基因的大鼠,同时建立了Abcb1基因敲除大鼠。通过将两者杂交建立了Abcb1人源化大鼠模型。人源大鼠与大鼠内源Abcb1表达谱有明显的区别,人源化大鼠不仅表达h-Abcb1基因,在组织表达谱方面也与人类更接近。结论 建立了Abcb1基因敲除大鼠和人源化大鼠模型,Abcb1人源化模型可作为Abcb1基因相关药物代谢研究更接近人类的动物模型。

摘要:目的 探讨慢性束缚应激模型对小鼠社交行为的影响,为应激所致抑郁模型的社会行为学评价方法提供数据支撑。 方法 采用慢性束缚加孤养方法建立应激所致抑郁模型,模型组每日束缚4 h(10:00～14:00),连续进行35 d,单笼饲养。应用糖水偏爱测试确定模型成功,应用社会趋避实验评价慢性束缚应激所致抑郁模型对小鼠社交行为的影响。 结果 糖水偏爱实验结果显示,慢性束缚组糖水偏爱指数明显下降,与正常组比较具有显著性差异(P < 0.01)。社会趋避实验结果显示,正常组对刺激鼠笼的嗅闻时间及频次多于空鼠笼,并具有显著性差异(P < 0.05,P < 0.01);慢性束缚组对刺激鼠笼和空鼠笼的嗅闻时间及频次相比,无显著性差异。慢性束缚组嗅闻刺激鼠笼时间及频次明显少于正常组,二者相比具有显著性差异(P < 0.05,P < 0.01)。慢性束缚组动物第一次嗅闻刺激鼠笼的潜伏期明显比正常组长,二者相比具有极显著性差异(P < 0.01)。慢性束缚组对刺激鼠笼的偏好指数明显小于正常组,二者具有极显著性差异(P < 0.01)。 结论 慢性束缚应激小鼠社交回避的行为学表现,为应激所致抑郁模型社会行为学评价体系的建立提供数据支撑。

摘要:目的 提供中老年实验食蟹猴的一般生理指标、血液生理生化指标的参考值。方法 选取119只11～16岁食蟹猴,雄性80只,雌性39只,分别检测其一般生理指标(体重、体长和腰围)、血液学指标和血液生化学指标,并进行性别间比较。结果 雌雄动物相比,一般生理指标包括体重、体长和腰围差异有显著性(P < 0.01);血常规指标中NEUT#、LYMPH#、EO#、BASO#、NEUT%、LYMPH%、EO%、BASO%、MCV、MCH、RDW-CV、PCT、MONO%、HGB、HCT、MCHC、RDW-SD、MPV差异有显著性(P < 0.01或P < 0.05),其余差异无显著性(P > 0.05);血生化指标中TBIL、ALB、GLO、A/G、ALP、GLU、UREA、CREA、TCH、TG、CK、ALT、GGT差异有显著性(P < 0.01或P < 0.05),其余差异无显著性(P > 0.05)。结论 本研究提供了中老年食蟹猴一般生理指标、血液学和血液生化学的背景数据,为其在生物医学领域的应用提供参考资料。

摘要:目的 扩增西藏小型猪的肌肉生长抑制素(MSTN)基因编码区全长序列,并对序列进行生物信息学分析。方法 提取西藏小型猪肝脏组织的RNA,反转录成为cDNA,利用RT-PCR方法扩增MSTN基因编码区全长序列,将纯化的片段与pMD19-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆并测定其序列,利用生物信息学方法分析其序列特征,并与其他12种物种构建系统进化树。结果 西藏小型猪MSTN基因编码区全长1128 bp,编码375个氨基酸,氨基酸序列同源性分析表明,与版纳微型猪MSTN氨基酸序列相似性最高,为99%。结论 MSTN基因西藏小型猪除了与鸡和斑马鱼亲缘关系较远外,与人、犬、版纳微型猪、绵羊、山羊、牛、马、黑猩猩、大鼠、小鼠的关系都较为接近,其中与版纳微型猪的亲缘关系最为接近。

摘要:目的 测定融水小型猪F1代体重和体尺。方法 选取F1代融水小型猪83头(雌性48头,雄性35头),测定初生至12月龄的体重、体长、体高、胸围、胸宽、胸深、管围、腿围、嘴裂长度共9个生长发育指标,并应用SPSS统计软件和Logistic非线性生长模型进行分析。结果 融水小型猪F1代的初生体重雌雄分别为0.61±0.14 kg和0.55±0.13 kg,6月龄体重雌雄分别为17.21±5.20 kg和16.35±5.23 kg,12月龄体重雌雄分别为26.97±6.49 kg和26.53±5.65 kg。雌雄比较,9项指标所测结果接近,除了初生体重和体长、10月龄胸宽有差异(P < 0.05),其余指标同月龄雌雄之间均无明显差异。应用Logistic模型分析,体重生长拐点在5～6月龄间,体长和腿围生长拐点在2～3月龄间,体高、胸围、胸宽、胸深、管围和嘴裂长度的生长拐点在1～2月龄间。结论 融水小型猪F1代成年体重轻,性情温顺,具备培养成实验用小型猪基本条件。

摘要:目的 研究融水小型猪的线粒体DNA结构和系统进化关系。方法 选取了全基因组鸟枪法的测序策略对融水小型猪的外周血液样本进行测序,使用Illumina基因组分析测序技术构建paired-end文库进行末端测序,最后进行拼接及分析。结果 融水小型猪的完整线粒体序列呈环形,总长为16888 bp,由13个编码蛋白基因、22个转运RNA和两个核糖体RNA构成。线粒体DNA的GC含量约为44 %。系统进化分析、遗传多样性分析和中性检验证明了,在融水小型猪、兰屿猪、海南野猪和滇南7号这一类群中,发生了种群扩张。结论 融水小型猪是中国传统猪种中比兰屿猪更为古老的小型猪。

摘要:目的 测定融水小型猪(rongshui miniature pig,RMP)F1代血常规、血生化与电解质指标。方法 选取4月龄F1代RMP 85头,雌性43头、雄性42头;12月龄36头,雌雄各半。颈静脉采血,分析血常规、血生化与电解质等22项指标。结果 融水小型猪相同月龄时,两性别的血常规指标、血生化和电解质的大部分指标差异不大,但同性别在不同月龄之间的部分指标差异明显。12月龄比4月龄融水小型猪,血常规指标中的白细胞数、血小板数下降,血红蛋白含量升高(P < 0. 05),而红细胞数变化不大(P > 0. 05);血清ALT、AST、ALP、CK(雄性)、LDH(雄性)A/G、BUN、GLU(雌性)、CHOL(雄性)和K⁺下降(P < 0.05);血清总蛋白、TBIL、CR、Ca²⁺升高(P < 0.05),而血清CHOL(雌性)、TG,HDL-C,LDL-C变化不大。有19项生化、电解质指标在或接近人类正常值范围,占86.4％(19／22)。结论 融水小型猪的部分血常规、大部分血生化与电解质指标与人类正常值接近。

摘要:目的 掌握融水小型猪主要器官解剖学及组织学数据。方法 选择6月龄F1代小型猪雌雄各两头,麻醉后测体重,进行大体解剖,颈动脉取血测定全身血量、血浆量,记录脊柱数量和恒齿齿式,取出主要脏器进行拍照、称重及测量,切取脏器的部分组织,用福尔马林固定后做组织切片,在显微镜下观察并拍照。结果 获得了融水小型猪的主要脏器形态图片、组织学显微图片、主要脏器重量、脏器系数及其他基础数据。结论 初步掌握了融水小型猪的器官解剖学和组织学基础数据。

摘要:目的 建立螺旋涂布法,评价本实验室用联合诱导法制备大鼠肝匀浆S9活性优劣,以期大大降低实验成本,并用Ames实验法评价所建立的S9低温保存方法的可行性,提高S9利用率。 方法 采用螺旋涂布法和Ames试验方法对市售和自制两种来源 S9 活化的阳性结果进行比较,并加入甘油保护剂,建立S9酶系统低温储存方法,使其以液态保存于-20℃冰箱中。 结果 Ames实验中市售和自制两种S9在阳性组中都显示出明显活化作用,同一条件下,Ames试验中使用两种S9所得阳性结果并无较大差异,变率间差异无统计学意义。螺旋涂布法中,同一条件下,使用两种 S9 所得阳性结果也无较大差异,突变率间差异无统计学意义,S9(浓度为38%)加入量在1.48～6.62 μL/μL菌液剂量下,对TA100菌有明显诱导作用,回复突变率均为对照组的3倍以上。 结论 可以用螺旋涂布法成功评价大鼠肝S9活性大小,联合诱导法可以替代多氯联苯诱导法制备肝匀浆S9。

摘要:目的 利用单一荧光试剂吖啶橙(acridine orange, AO)和简单的单激光流式细胞仪(FCM)计数骨髓嗜多染红细胞的微核率,达到了解化合物诱导微核作用的目的。方法 分别以环磷酰胺(CP)处理雄性KM小鼠和SD大鼠, 采用AO 荧光染色和单激光流式细胞仪检测小鼠和大鼠骨髓含微核的嗜多染红细胞(MNPCE)及含微核的成熟红细胞(MNNCE)的微核率,并对结果进行比较分析。结果 随着CP浓度的增高,骨髓中MNPCE和MNNCE也相应增多,呈良好的量效关系。实验结果同时和手工计数比较,没有显著差异。结论 AO_FCM 自动化检测方法完全适用于小鼠和大鼠骨髓MNPCE及MNNCE微核率的检测。

摘要:目的 在猪房间隔缺损动物模型上评价改良的封堵器有效性、安全性和相容性。方法 选用西藏小型猪5头,利用房间隔穿刺结合囊扩张的方法建立房间隔缺损 (atrial spetal defect, ASD)猪,用改良的封堵器进行房间隔封堵术,术后进行超声心动图、大体解剖、电镜扫描和光镜观察。结果 5只猪均成功建立了ASD模型并进行封堵术成功,超声心动图观察显示封堵器良好,位置固定,心腔和心肺功能正常。3个月后封堵器与房间隔组织紧密嵌合,表面覆盖一层较厚的光滑的白色组织,电镜下观察到大量心肌纤维,未发现内皮细胞。结论 改良的ASD封堵器操作简便、安全性好,具有良好的生物相容性。

摘要:目的 应用Nucleofector II核转染仪将外源基因EGFP导入西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs),并与脂质体转染的方法进行比较,寻求一种高效转染猪胚胎成纤维细胞的方法。 方法 使用Lonza公司的Nucleofector II核转染仪,参考已报道的转染程序与相应的转染试剂,将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入西藏小型猪PEFs,并与脂质体转染的方法进行对比研究,比较两种方法的转染效率。 结果 转染5 h后,核转染仪组镜下即可见绿色荧光,转染效率高达80%,远远高于脂质体转染的方法。结论 用Nucleofector II核转染仪能实现西藏小型猪PEFs的高效转染,为高效制备转基因克隆西藏小型猪提供了可靠的方法。

摘要:虽然线虫只是代表了一类简单的生物体,但是线虫在现代生物医学研究,尤其是药物靶点研究方面具有巨大的潜在应用价值。其功能完善的细胞结构、与其他高级生物的保守性使得线虫成为一个操作简单、经济有效的高通量体内研究模型。本文总结了模式生物线虫在药物活性评价中的应用。初步探讨了线虫在药物复杂体系活性评价的可行性,以及线虫为从整体水平观察和研究中药复方的药效及机制的前景。

摘要:大鼠脑发育是一个复杂的过程,胎儿期及生后的脑发育过程经历了组织学、细胞学和分子学的显著变化。大鼠脑的基本结构在胚胎期已形成,而不同部位之间的联系和脑功能的完善却在出生后发展,其间的许多变异是许多神经系统疾病的基础,因此生后脑发育过程仍然十分关键。尽管脑细胞微环境的概念已于150多年前被提出,但是对于在生后发育过程中发生显著变化的脑细胞外间隙的研究仍未获得显著进展。本文通过综述大鼠生后发育过程中脑细胞外间隙的解剖及生理特性的变化规律特点,阐述脑细胞外间隙在个体发育中的重要作用,有望为儿科发育相关的神经系统疾病的发生机制及有效治疗途径的探索提供相关依据。

摘要:综合近年来文献可知,中药治疗乳腺癌取得了一定进展,本文对中药治疗人乳腺癌、犬乳腺癌的临床应用和实验研究进展进行对比和总结,从中药成方加减、中药提取物、中药有效成分等几个方面总结中药治疗乳腺癌的途径和方法,揭示中药治疗乳腺癌的作用机制。通过人、犬乳腺癌的中药临床和实验研究对比,使二者互为借鉴,为犬乳腺癌的中药临床治疗提供思路,为人乳腺癌的中药研发提供研究基础和重要模型。

摘要:融水小型猪的种源来自广西融水县,2012年被引到广东繁育并测定了基础数据,包括种质特性、繁殖性能、生长曲线、血液学指标、血生化指标、脏器系数、染色体分析。参照国家和地方有关实验动物标准,初步建立了融水小型猪微生物与寄生虫、环境与设施、饲料、病理学、遗传学等质量控制标准。融水小型猪能适应当地气候,繁殖良好,自然受孕率为88.3%,妊娠期平均112 d,初产平均胎产仔6.1头,经产平均产仔7.9头。融水小型猪体型小,雌雄成年体重(6月龄)分别为17.21±5.20 kg和16.35±5.23 kg,性情温顺,线粒体DNA分析表明融水小型猪比兰屿猪更为古老。通过标准化的饲养管理与质量控制,具有培育成实验用小型猪的基本条件。