摘要:目的 构建上皮组织特异性表达鼻咽癌来源潜伏膜蛋白1（N-LMP1）和人补体受体2（CR2）真核表达载体，转染猪胚胎成纤维细胞并筛选整合有N-LMP1和CR2基因的细胞克隆，为构建与EBV感染相关的猪鼻咽癌模型奠定基础。方法 通过直接合成ED-L2启动子和N-LMP1，从人B淋巴细胞中的RNA经RT-PCR扩增出CR2，将上述3个片段逐个连接到真核表达载体pN1上，构建上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2的载体pN1-ED-L2-N-LMP1-CR2；用脂质体转染猪胚胎成纤维细胞， 经药物G418 筛选和PCR鉴定阳性克隆。结果 成功构建上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2的真核表达载体pN1-ED-L2-N-LMP1-CR2，并成功整合到猪胚胎成纤维细胞的基因组中，获得了整合有目的基因N-LMP1和CR2的猪胚胎成纤维细胞克隆。结论 获得了上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2 的猪胚胎成纤维细胞克隆，为通过细胞核移植方法获得表达N-LMP1和CR2转基因猪提供了供体细胞。

摘要:目的 观察比格犬Myc 标签ERβ₁₂₉₃重组真核表达载体在HEK293T细胞中的表达及定位。方法 以pEGFP-N1-ERβ₁₂₉₃重组真核表达载体为模板，PCR保真酶扩增得到ERβ₁₂₉₃基因编码区全长。Myc标签ERβ₁₂₉₃重组真核载体瞬时转染HEK293T细胞，运用蛋白质印迹技术（Western blotting）和间接免疫荧光技术（indirect immunofluorescence， IF）鉴定pcDNA3.1-Myc-ERβ₁₂₉₃在HEK293T细胞中的表达和定位情况。结果 成功构建pcDNA3.1-Myc-ERβ₁₂₉₃重组真核表达载体，转染至HEK293T细胞中。Western blotting检测有蛋白条带表达，共聚焦显微镜下观察IF处理后的转染细胞，荧光定位于细胞质。结论 前期实验得到比格犬ERβ剪切异构体ERβ₁₂₉₃编码区序列，缺失第四外显子，导致其与配体结合能力减弱或消失，因此目的基因编码蛋白定位在细胞中发生变化。

摘要:目的 探讨沙漠干热环境下中暑对大鼠心肌损伤的影响。方法 48只雄性SD大鼠随机平均分成6组：沙漠干热环境轻度中暑组及其常温对照组，中度中暑组及其常温对照组，重度中暑组及其常温对照组，然后将3个实验组大鼠分别置于干热环境（温度：41℃，湿度：10%），3个对照组大鼠置于常温环境（温度：25℃，湿度35%）中，在建立沙漠干热环境中暑大鼠后，干热环境组及其对照组分别在实验开始70 min （轻度中暑）、110 min （中度中暑）、145 min （重度中暑）被处死并取材。用全自动生化检测仪检测大鼠血清心肌酶CK（磷酸肌酸激酶）、CK-MB（肌酸激酶同工酶）、LDH（乳酸脱氢酶）的变化，用HE染色观察心肌病理学变化，用电子显微镜观察心肌超微结构变化。结果 干热中暑各组大鼠血清心肌酶CK、CK-MB、LDH较常温对照各组显著升高（P<0.05），干热组CK、CK-MB、LDH均随中暑程度加重而升高，其中CK和LDH的轻度中暑组与中度中暑或重度中暑组比较差异具有显著性（P<0.05），但中度中暑组与重中暑度组比较差异无显著性（P >0.05）；干热中暑组CK-MB各个组间比较差异均有显著性（P<0.05）；HE染色结果提示：干热中暑组心肌组织早期即心肌间血管明显出现扩张充血、出血，随热暴露时间延长充血、出血现象逐渐加重，常温对照组未见异常。电子显微镜结果显示：干热环境组心肌细胞部分肌丝紊乱断裂、溶解，Z线模糊消失，线粒体肿胀，线粒体基膜不清晰，见空泡形成，部分毛细血管内皮细胞增生，并随热暴露时间延长，心肌细胞损伤逐渐加重。结论 沙漠干热环境可造成大鼠心肌损伤，并随热暴露时间的延长及中暑程度的加重而损伤逐渐加重。提示沙漠干热环境下中暑的治疗应注意加强心肌损伤的保护。

摘要:目的 研究我国南海区某海洋钻井水基钻井液对诸氏鲻虾虎鱼抗氧化酶的影响。方法 在19.75～158 mg/L浓度下，对3月龄诸氏鲻虾虎鱼染毒，并用试剂盒法测定超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性。结果 SOD对水基钻井液的毒性暴露不太敏感，在染毒第1天只有最低浓度组受到一定程度的抑制，染毒第2 天各浓度组酶活性均受到一定程度的诱导（12.4%～25.5%），这种诱导作用在第4天即有所减弱，之后酶活性的变化变缓。CAT则对水基钻井液表现出较强的敏感性。染毒第1 天，各组酶活性均受到明显的诱导，并且各组酶活性表现出明显的浓度效应关系。最高浓度组酶活性最大诱导率达到97%（P >0.05）。随后虾虎鱼CAT酶活性逐渐下降，第7 天，各染毒组酶活性的抑制率达到58.4%～89.1%。结论 CAT在中毒反应中表现出了敏感性，具备了作为生物标志物的重要条件，有望在今后的实际应用中发挥作用。

摘要:目的 通过重新评价卵蛋白致小鼠哮喘模型，寻找一种简便易行的气道高反应动物模型和相应的检测指标，为研发治疗本类疾病药物和研究气道高反应发病机制提供新的实验手段。方法 小鼠采用卵白蛋白（OVA）致敏；致敏后（15～21）d给予10% OVA雾化吸入激发哮喘，在末次激发24 h内测量小鼠辣椒素引咳的半数有效浓度，处死小鼠取肺组织测定匀浆中NO、IL-13、ET-1的含量。结果 卵蛋白致敏模型小鼠随辣椒素浓度的升高其咳嗽反应阳性率、咳嗽次数明显增加（与对照组相比较P<0.01）。模型组辣椒素引咳的半数有效浓度为89.39 μmol/L，对照组、地塞米松组分别为204.84、220.02 μmol/L；小鼠肺匀浆NO、ET-1、IL-13含量均明显增加，地塞米松可明显抑制NO的升高（与对照组相比较P<0.01）。结论 小鼠经卵蛋白致敏并连续激发7 d与临床气道高反应性（AHR）的多种特征相似，操作简便易行，稳定性高，故可作为气道高反应性的模型。辣椒素引咳阈值的测定、动物肺组织中NO、IL-13、ET-1含量的变化，可作为评价模型严重程度的指标。

摘要:目的 初步研究清脑方（Qingnaofang， QNF）对缺血性眩晕大鼠脑损伤的保护作用及其作用机制。方法 采用手术结扎右侧颈总动脉和锁骨下动脉致大鼠右侧半脑不完全脑缺血建立缺血性眩晕大鼠模型。分为模型组，QNF 1.04、0.52、0.26 g/kg组，盐酸地芬尼多15 mg/kg组，银杏叶片5.76 mg/kg组以及假手术组，观察QNF对旋转刺激缺血性眩晕大鼠跳台逃避潜伏期的影响，取材并测定动物缺血侧组织Lac、LDH、SOD、MDA、NO及NOS的含量或活性。结果 （1）与模型组相比，QNF 1.04、0.52、0.26 g/kg组大鼠跳台逃避电击潜伏期分别缩短53.6%（P<0.01）、33.8%（P<0.05）、56.5%（P<0.01）。（2）QNF 1.04、0.52、0.26 g/kg均可显著降低缺血侧脑组织中Lac的含量以及LDH的活力 （P<0.05，P<0.01），降低其TNOS及iNOS活力 （P<0.01）；QNF 0.52 g/kg剂量能够明显降低缺血侧脑组织中SOD活力；QNF 0.52、0.26 g/kg剂量可显著降低其MDA和NO的含量 （P<0.05，P<0.01）。结论 QNF对缺血性眩晕大鼠脑损伤有一定的保护作用，能够减轻模型动物的眩晕症状，其脑保护作用机制可能与改善缺血脑组织能量代谢，减少氧化应激和炎性损伤有关。

摘要:目的 对兔VX2 肝癌模型制作进行改良，以用于介入治疗学研究，同时探讨瘤灶的CT 表现及CT 在检测瘤灶中的作用。方法 将VX2瘤细胞接种于兔皮下使其成瘤并传代；新西兰兔24只，以改良嵌插法建立移植性肝癌模型，于建模后7、14、21 d分别行超声、CT及血管造影检查，用于检测兔肝VX2 瘤灶，评估瘤灶生长变化；随后处死动物，进行尸解，评估影像检查结果。结果 24只（100%） 动物以改良嵌插法建立移植性肝癌模型全部成功。瘤灶以种植后2周CT显示最清楚和典型，直径1 cm～2 cm 左右，平扫呈低密度或等密度，动脉早期明显强化，门脉期呈低密度，与周围肝组织分界较清楚。肝动脉造影显示肿瘤富血供。而种植后超过3 周的肿瘤大部分发生坏死。结论 嵌插改良法是一种值得推广的建立移植性肝癌模型的方法；在对瘤灶进行影像学评价上应尽量选择CT检查，接种后1 周左右的瘤灶较小而难以观察；2 周左右呈肝动脉源性血供丰富的约1 cm～2 cm的实体瘤，造影征像为肿瘤血管与肿瘤染色；3 周以上瘤灶大多出现明显示坏死；因此对1～2cm大小的兔VX2 肝癌瘤体，最适合行血管造影检查。

摘要:目的 通过雌二醇诱导SD雄鼠慢性前列腺炎，探讨SD雄鼠的内环境改变的关联性作用，为前列腺炎发生机制和治疗提供一条实验性途径。方法 3%戊巴比妥麻醉，无菌条件下去势手术；术后动物恢复5 d，30只雄鼠按照体重随机分组，每组10只。第6天低剂量组皮下注射0.25 mg/kg的雌二醇，高剂量组皮下注射1.25 mg/kg的雌二醇，溶媒对照组注射橄榄油，每天1次，连续30 d。结果 与溶媒对照组比较，低、高剂量组白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）和红细胞压积（HCT）均降低（P<0.01）；前列腺酸性磷酸酶（PAP）明显降低（P<0.01）；高剂量组睾酮含量明显增加（P<0.01），C-反应蛋白（CRP）在低、高剂量组也呈现增加的趋势，但差异没有统计学意义；溶媒对照组和给药组前列腺组织大体解剖表面未见明显差异，光学显微镜下，溶媒对照组前列腺组织结构完整、腺腔和间质无炎性细胞浸润，高剂量组和低剂量组的前列腺间质均可见炎细胞浸润；低、高剂量组大鼠脾脏均可见棕黄色颗粒沉淀，其余脏器无明显改变，胸腺、脾脏及其脏器系数均明显降低。结论 根据本实验结果，雌激素引起的慢性非细菌性前列腺炎可导致内环境血液学、血清生化，激素水平、脏器和脏器系数的一系列改变。

摘要:目的 研究参芪扶正注射液足三里穴位注射对心气虚证的效应与用药剂量的关系。方法 通过负重游泳及灌服大剂量心得安法获得心气虚证大鼠模型，对各治疗组分别进行不同剂量参芪扶正注射液的足三里穴注治疗。连续治疗10 d后，观察并记录大鼠的一般状况和症状；通过ELISA法检测各组血清心钠素（ANP）及环磷酸腺苷（cAMP）含量；通过比色法检测各组血清超氧化物歧化酶（SOD）活性；通过HE染色法检测各组心肌组织病理改变。结果 和正常对照组相比，模型对照组出现疲软无力，舌质发紫，呼吸急促等明显的心气虚症状；血清ANP浓度升高，cAMP浓度降低，SOD活性降低，均具有极其显著性意义（P<0.001）； 心肌组织病理示：炎细胞浸润明显，心肌细胞严重水肿，排列紊乱。和模型组相比，各治疗组症状缓解，血清ANP浓度降低，cAMP浓度升高、SOD活性增强，差异均具有显著性意义（P<0.05或P<0.01或P<0.001），其中参芪0.05 mL组变化最小（P<0.05），参芪0.20 mL组变化最大（P<0.001）；心肌组织病理改变减轻，其中参芪0.20 mL组最接近正常。结论 参芪扶正注射液足三里穴位注射能有效治疗心气虚证，且其疗效与用药剂量在一定剂量范围（0.05～0.20）mL内成正相关。

摘要:目的 筛选用于比格犬ERβ基因RNA干扰实验的细胞和检测所用引物。方法 根据比格犬ERβ氨基末端区域和DNA结合区设计三对引物，用阳性质粒筛选最佳引物应用于RNA干扰效果检测，并利用293T、Hela和vero细胞的cDNA验证该引物的特异性。对这三种细胞内人ERβ基因的存在情况也进行了检测。结果 经过三次重复性实验之后，结果显示引物C36684扩增效率高，且没有非特异条带，该引物对293T、Hela和vero细胞cDNA扩增时同样没有非特异性条带，但293T细胞中存在人的ERβ基因。结论 引物C36684用于检测RNA干扰效率，而Hela细胞则作为RNA干扰实验的细胞工具。

摘要:目的 优化和改良大鼠心肌梗死模型的构建和评价方法，提高模型的可靠性和稳定性。方法 取雄性SD大鼠结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型，在模型的构建过程中从麻醉、插气管、保温、手术操作、术后护理等环节进行优化和改进，并观察不同的麻醉方法和术后时间对心肌梗死程度的影响，用不同的染色方式进行心肌梗死模型的评价。结果 对比大鼠心肌梗死模型构建过程中各组大鼠麻醉时间、术后恢复以及心肌梗死面积的结果，戊巴比妥钠是更合适的麻醉药；结扎手术后时间对模型心肌梗死范围无明显影响（P >0.05），但心肌缺血危险区面积随术后时间的延长明显减少（P<0.01）；TTC与依文思蓝双重染色相对TTC染色能明显观察到心肌缺血危险区和梗死区范围。结论 优化和改进后的大鼠心肌梗死模型，提高了动物福利，制备和评价方法更加客观准确。

摘要:目的 通过采用耻骨后膀胱颈和会阴途径球部尿道部分结扎两种方法，建立雄性大鼠膀胱出口部分梗阻（paritial bladder outlet obstraction， pBOO）模型，并对所建模型进行鉴定和比较，为pBOO后膀胱重构（bladder reconstruction）的深入研究提供一种成活率高，复制性和稳定性较好的动物模型。方法 80只健康雄性Wistar大鼠随机分为三组：I组为假手术组（对照组），20只；Ⅱ组为耻骨后途径膀胱颈部分结扎组，30只；Ⅲ组为会阴途径球部尿道部分结扎组，30只。依据梗阻时间分别将I组、Ⅱ组、Ⅲ组大鼠随机分为2周组和4周组，于术后2周和4周对大鼠行尿动力学检测后，完整切除膀胱测其重量，将精囊腺组织和部分膀胱用4%甲醛固定，HE染色观察组织学变化。结果 Ⅱ组和Ⅲ组成活率分别为73.3%和80.0%，二者无统计学意义；I组、Ⅱ组、Ⅲ组建模手术时间分别为（9.75±2.29）、（17.33±3.54）、（10.77±2.44）min，Ⅱ组与I组和Ⅲ组比较差异均有统计学意义；I组、Ⅱ组、Ⅲ组的2周组和4周组逼尿肌漏尿点压（detrusor leak point pressure， DLPP）分别为（26.31±2.32）、（27.34±3.93）、（24.68±2.39）mmHg和（26.42±2.41）、（34.23±3.01）、（32.63±3.20）mmHg，I组与Ⅱ组和Ⅲ组的4周组比较差异有统计学意义，Ⅱ组和Ⅲ组的2周组和4周组比较差异均有统计学意义。结论 耻骨后途经膀胱颈部分结扎和会阴途径球部尿道部分结扎两种方法都能成功建立雄性大鼠pBOO模型，与耻骨后途径相比，会阴途径成活率高，手术操作时间短，复制性和稳定性好。

摘要:目的 探讨实验动物准备条件对¹⁸F-FDG microPET裸鼠移植瘤模型显像的影响，以选择最佳的实验动物准备条件。方法 36只人表皮样癌细胞A431裸鼠皮下移植瘤模型。随机分为6组（6只/组）；A组：无禁食、室温（20 ～22）℃、无麻醉（注射¹⁸F-FDG后60 min清醒状态）、尾静脉注射¹⁸F-FDG；B组：禁食（6～8）h、加温（30～32）℃、麻醉（吸入2%异氟烷麻醉）、尾静脉注射¹⁸F-FDG；C组：无禁食、加温、麻醉、尾静脉注射¹⁸F-FDG；D组：禁食、室温、麻醉、尾静脉注射¹⁸F-FDG；E组：禁食、加温、无麻醉、尾静脉注射¹⁸F-FDG；F组：禁食、加温、麻醉、腹腔注射¹⁸F-FDG。注射¹⁸F-FDG约1 h后，行microPET显像，测量皮下移植瘤、颈部肌肉、棕色脂肪、脑、肝脏、肾脏、心脏、哈氏腺最大每克组织摄取率（%ID/g_max）。扫描前裸鼠均测血糖。结果 （1）B组、C组、F组裸鼠的血糖水平与肿瘤摄取之间均呈直线负相关。（2）棕色脂肪：A组摄取最高（8.03±1.29），B组摄取降低71.98%（P=0.000）。颈部肌肉：A组摄取最高（16.07±5.20），B组摄取降低最多达81.84%（P=0.000）。各组脑、心脏、肝脏、肾脏、哈氏腺摄取差异无统计学意义。（3）A组皮下移植瘤/组织或器官的摄取率最低。B组移植瘤/颈部肌肉，移植瘤/肝脏，移植瘤/棕色脂肪的摄取率较A组分别升高6.50倍、1.29倍、4.76倍（P均<0.05），肿瘤与组织或器官的图像对比度明显改善。（4）第1次microPET显像，尾静脉注射与腹腔注射皮下移植瘤摄取值差别无统计学意义（P=0.364）。第2次microPET显像，腹腔注射腹腔可见不同程度显像剂浓聚，其他正常组织、器官及皮下移植瘤的摄取均减低。腹腔注射方式，两次皮下移植瘤的摄取值差异有统计学意义（P=0.025）。结论 实验动物准备明显影响¹⁸F-FDG在裸鼠正常组织的分布及皮下移植瘤的摄取。禁食、加温、麻醉及尾静脉注射方式，可以改善肿瘤对¹⁸F-FDG的摄取，保证图像有较好的稳定性及可重复性。

摘要:目的 观察TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在肺纤维化大鼠模型肺组织中的表达，探讨两条通路对肺纤维化的影响及其相互作用。方法 取Wistar大鼠36只，随机分为正常对照组和肺纤维化模型组，每组18只。采用气管内注入博来霉素（BLM）建立Wistar大鼠肺纤维化模型，每组分别于第14、21和28天处死大鼠各6只；取肺组织称重，测定肺组织中HYP、IL-1β水平，观察肺组织Col-I、IL-1β、TGF-β1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-catenin、LEF-1 mRNA的表达，并进行HE染色和Masson胶原染色。结果 （1）与正常对照组比，造模后14～28 d大鼠肺指数均明显升高（P<0.01）；肺组织HE染色呈现明显的肺纤维化病理改变，Masson染色结果可见造模后14～28 d肺间质蓝色胶原呈渐进性增加。（2）造模后第14天，肺组织IL-1β含量、IL-1β mRNA相对含量均显著升高（P<0.01），随后逐渐降低，至造模后第28天IL-1β表达量接近正常水平（P >0.05）。（3）造模后14～28d大鼠肺组织HYP含量、Col-I mRNA相对表达量均明显升高（P<0.01）。（4）与正常组相比，模型组中TGFβ1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-Catenin、LEF-1 mRNA表达显著增加（P<0.01），且TGFβ1、Smad3 mRNA分别与Wnt1、LEF-1、β-catenin mRNA的表达呈显著正相关。结论 TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在博来霉素致大鼠肺纤维化中表达上调，两条通路对肺纤维化可能有促进作用且它们间可能存在一定联系。

摘要:目的 研究PSGL-1缺失对遗传基因工程小鼠外周血血常规的影响，并检测外周血中炎症因子IGFBP-6、TNF-α和MIP-1γmRNA表达水平。方法 用血常规检测方法检测正常C57/BL/6小鼠和PSGL-1基因缺失的基因工程小鼠（PSGL-1^-/-小鼠）的外周血中血常规的差异；其次，提取两种鼠的血液的mRNA，逆转录为cDNA，采用real-time PCR方法，检测C57小鼠与PSGL-1^-/-小鼠外周血中炎症因子 TNF-α和MIP-1γmRNA的差异。结果 与对照组C57小鼠相比，PSGL-1^-/-基因工程小鼠在12周龄时外周血中中性粒细胞（^*P<0.05）、淋巴细胞（^**P<0.01）和白细胞细胞（^***P<0.001）总数显著增加炎症因子TNF-α以及MIP-1γ表达增加（P<0.05）。结论 PSGL-1的缺失改变了小鼠细胞因子并影响了外周血的血细胞组成，MIP-1γ和TNF-α炎症因子上调，有可能影响了小鼠的免疫功能。

摘要:目的 建立小鼠腹腔水液体积的检测方法并评价肾阳虚模型小鼠的水负荷状况。方法 选取正常小鼠12只，根据“阿基米德原理”改进实验方法测量小鼠的腹腔水液体积，对其腹腔水液体积测量的稳定性进行评价；选取正常小鼠5只，利用小鼠腹腔水液检测方法对其进行线性关系考察；将SPF级昆明种雄性小鼠30只，随机分为正常组和肾阳虚模型组，肾阳虚模型组上午按0.08 mg/10 g腹腔注射苯甲酸雌二醇注射，正常组腹腔注射相同剂量的大豆油，下午两组均腹腔注射1 mL的生理盐水造成水负荷，连续15 d。结果 该测量方法的稳定性和线性关系考察均取得了良好的效果；与正常组相比，造模后体重显著性降低（P<0.01），肛温显著性降低（P<0.01），趾温差异无显著性（P >0.05）；自主活动明显减少（P<0.05）；游泳时间明显降低（P<0.01），综合评价说明肾阳虚造模成功；肾阳虚模型组的腹腔水液测量体积整体表现出下降的趋势，腹水指数显著高于正常组（P<0.05）。结论 该检测方法可以快速、准确的测量出小鼠腹腔水液测量体积和腹水指数的变化，可以能较客观地评价中医证候的特点，为中医证候症状描述进一步提供实验数据支持。

摘要:肝脏疾病已经在世界范围内导致严重的致死率和死亡率，动物模型是研究肝脏疾病的有效工具，考虑到非人灵长类实际使用的限制，树鼩作为非人灵长类替代动物具有资源丰富，成本较低，且与人类亲缘关系较近等优势，本文对树鼩在肝脏疾病动物模型中的应用进行综述。