摘要:目的观察链脲佐菌素(STZ)诱导恒河猴糖尿病动物模型胰岛细胞数量变化和激素表达情况。方法健康恒河猴5只,小剂量(30 mg/kg)多次静脉注射STZ,濒死状态时将动物安乐死。取胰腺制成石蜡切片,用免疫组化染色法显示胰岛A、B、D和PP细胞,并对结果进行图像分析和统计学处理。结果与对照组比较,模型组B细胞数量减少,胰岛素表达降低(P<0.01)。A细胞增生,胰高血糖素表达增加(P<0.01)。PP细胞增生,胰多肽表达增加(P<0.05)。D细胞数量与对照组比较无显著性差异。结论恒河猴糖尿病动物模型胰岛各种细胞的数量和激素表达情况与人类糖尿病类似。

摘要:目的评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒。方法选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、可信度试验比较。结果国产与进口试剂盒:同种试剂盒之间灵敏度相差最低为2倍,差异显著(P<0.05),最高为16倍,差异极显著(P<0.01)；特异性试验显示每种试剂盒,与其他4种病毒均无交叉反应；精密性试验显示5种试剂盒批内平均变异系数均小于10%;稳定性试验显示5种试剂盒相对偏差均小于25%；分别选择已知36份小鼠血清进行检测,国产和进口LCMV、MHV、SV、MPV符合率均为100%；国产MAV符合率为86.1%,进口MAV符合率均为100%,二者之间差异极显著(P<0.01)。结论除国产MAV试剂盒敏感性、可信度低于进口外,国产LCMV、MHV、SV、MPV试剂盒与进口同种试剂盒相比,在敏感性、特异性、精密性、稳定性和可信度方面均良好。

摘要:目的研究不同品系大鼠RT1A、RT1B和RT1D基因表达的抗原总数量,以及在CD4+ T细胞和CD8+ T细胞上表达的数量,为免疫学研究提供数据支持。方法采集四种品系BN、Lewis、F344、SHR大鼠的静脉血,制备淋巴细胞,与有荧光标记的单克隆抗体反应,应用流式细胞术检测抗原数量。结果发现RT1A、RT1B和RT1D基因表达的抗原在不同品系大鼠体内表达的数量不同,其中F344大鼠表达的RT1A抗原最多,BN大鼠表达的RT1B抗原和RT1D抗原均为最多。RT1A、RT1B和RT1D基因表达的抗原在CD4+ T细胞和CD8+ T细胞上表达的数量也不同,Lewis大鼠在CD4+ T细胞上表达的RT1A抗原最多, BN大鼠在CD4+ T细胞上表达的RT1B和RT1D抗原最多。F344大鼠在CD8+ T细胞上表达的RT1A抗原最多；F344大鼠在CD8+ T细胞上表达的RT1B和RT1D抗原最多。同一品系大鼠之间雌雄动物RT1A、RT1B和RT1D基因表达的抗原也不同。结论不同品系大鼠RT1A、RT1B和RT1D基因的抗原总表达数量之间差异有显著性,在CD4+ T细胞上和CD8+ T细胞上表达的数量差异也有显著性。

摘要:目的研究烟草烟雾暴露对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道chemokine receptor 6 (CCR6)表达的影响,探讨吸烟加重哮喘气道炎症的免疫学机制。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为对照组、烟雾暴露组、哮喘组和哮喘+烟雾暴露组,每组10只。建立哮喘大鼠模型和哮喘大鼠烟草烟雾暴露模型,采集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)行白细胞计数及分类,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法及免疫组织化学法检测各组大鼠气道CCR6 mRNA及蛋白的表达。结果①哮喘组(69.0±3.5；4.1±1.0；8.9±2.0)、哮喘+烟雾暴露组(86.7±5.2；2.2±1.0；19.0±2.8) BALF中白细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞均高于对照组(10.1±3.8；1.3±0.7；2.2±1.1)、烟雾暴露组(47.7±6.8；0.5±0.3；2.7±1.4) (P均<0.05)；哮喘+烟雾暴露组BALF中白细胞总数和中性粒细胞高于哮喘组,嗜酸粒细胞低于哮喘组(P均<0.05)。②哮喘组(8.15±0.88；0.452±0.013)、哮喘+烟雾暴露组(15.16±0.87；0.531±0.024) CCR6 mRNA及其蛋白表达水平均明显高于对照组(1.01±0.52；0.299±0.027)、烟雾暴露组(5.55±0.54；0.442±0.018)(均P<0.01)；哮喘+烟雾暴露组明显高于哮喘组(均P<0.01)。结论烟草烟雾暴露可通过促使气道CCR6 mRNA及其蛋白高表达,加重哮喘大鼠气道慢性炎症。

摘要:目的建立仙台病毒(SV)RT-PCR检测方法,并对灰仓鼠仙台病毒感染情况进行调查。方法根据NCBI发表的SV(gi:9627219)基因组序列设计引物,建立RT-PCR方法,对方法的特异性和灵敏性进行验证,并用该方法检测60份灰仓鼠的肺脏样本。结果建立的SV RT-PCR方法显示有较好的敏感性和特异性:以仙台病毒为模板扩增产生197 bp的单一目的条带,经测序比对与NCBI数据库中SV相关序列的一致率为98%,而以猴副流感病毒(SV5)、犬瘟热病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒III型及腮腺炎病毒为对照无任何条带产生；能检出的SV cDNA最低浓度是96.8 ng/mL；用该方法检测60份灰仓鼠,SV的感染率为3.33%(2/60)。结论建立的SV RT-PCR方法可用于实验类啮齿动物动物SV 的常规检测,自然条件下灰仓鼠感染SV的问题不容忽视。

摘要:目的对本单位封闭群NIH小鼠发生的皮下肿瘤进行诊断。方法统计发病率、发病体重、分娩胎次等信息,并切除肿瘤组织制作病理切片。结果该肿瘤发病率为1.32%,病理切片诊断为纤维腺瘤。结论本单位饲养繁殖的NIH小鼠发生皮下肿瘤诊断为纤维腺瘤,其发病原因需进一步研究探索。

摘要:目的为上胸段硬膜外阻滞的动物试验研究提供经济、稳定、可靠的模型。方法以大鼠为研究对象,经胸4～5椎间隙,直视下向头端于硬膜外腔置入经拉撕等处理后的临床用硬膜外导管,采用椎旁肌肉缝扎导管,皮下隧道预留缓冲长度等方法固定导管。48 h后大鼠硬膜外腔注入美蓝100 μL/kg,尸检鉴定模型成功和药液的分布范围。结果置管48 h后的成功率为85.8%,硬膜外腔的感染率为0,导管脱出几率5%。结论本研究证实了经胸4～5椎间隙直视下头端置管建立上胸段硬膜外阻滞大鼠模型的可行性,并具有损伤小、稳定性好、成功率高、费用低及周期短等优点。

摘要:目的比较研究Up and Down 法与寇氏法测定破伤风毒素LD₅₀值。 方法NIH小鼠皮下注射破伤风毒素,分别使用寇氏法和Up and Down 法计算LD₅₀值。 结果同一破伤风毒素经寇氏法计算得LD₅₀值为4.97ng/Kg体重,Up and Down 法计算LD₅₀值为4.93 ng/Kg体重,95%置信区间为(4.71～5.13)ng/Kg体重。结论应用Up and Down 法可测出与寇氏法相同结果的LD₅₀值,且动物使用数量仅用8只。

摘要:目的对西藏小型猪和广西巴马小型猪生长激素基因(GH基因)部分序列的多态性进行分析。 方法采用内切酶ApaI和Hin6I对西藏小型猪(108头)和广西巴马小型猪(132头) GH 基因 - 119 bp～+486 bp 之间的区域进行PCR-RFLPs分析。 结果(1)从ApaI酶切产生的结果来看,ApaI酶切产生A(449 bp + 101 bp + 55 bp),B(316 bp + 133 bp + 101 bp + 55 bp)两种等位基因。等位基因A的频率高于等位基因B,等位基因A为优势基因。AA基因型频率高于AB和BB基因型频率；(2)从Hin6I 酶切产生的结果来看,Hin6I 酶切产生G1(605 bp)、G2(498 bp + 107 bp)、G3(449 bp + 156 bp)、G4(449 bp + 107 bp + 49 bp)四种等位基因。等位基因G4的频率高于等位基因G1、G2、G3。等位基因G1频率很低。基因型G2G3、G2G4、G3G4、G4G4的频率较高。(3)由酶切产生的基因和基因型多态性,发现西藏小型猪与广西巴马小型猪在该基因部分序列差异不显著(P>0.05)。 结论国内的优质实验用小型猪,如西藏小型猪和广西巴马小型猪等位基因A频率均较高。

摘要:目的建立一种可同时检测肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌的多重PCR方法。方法根据已公布的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌16SrRNA基因序列设计三对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果三对引物能分别扩增出特异性的417 bp、364 bp、324 bp目的条带。最佳退火温度为52℃,镁离子浓度为2.0 mmol/L,dNTP浓度为200 μmol/L,引物浓度为0.625 μmol/L。在此条件下多重PCR同时检测的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌敏感度均为10 fg。结论本实验建立的多重PCR是一种敏感、特异、高效的方法,为同时检测啮齿动物中肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌奠定了良好的基础。

摘要:目的建立SAdV特异的PCR检测方法并研究实验猴群和猴源性生物制品中SAdV感染或污染情况。 方法 比对分析多株SAdV序列,设计SAdV特异引物,优化PCR实验条件,建立的PCR方法经验证后检测实验猴群和猴源性生物制品,阳性产物测序并构建进化树。 结果 经特异性和敏感性鉴定,在设计的5对引物中确定一对最佳引物,可以区分SAdV和MAD,ICH,CELO且可以检测到的最小DNA量为47.9 pg/mL。PCR方法检测实验猴群,阳性率49.2%,测序及进化分析表明,SAdV感染型别呈广泛基因多样性。主要分布在G亚属和以SAdV-49为代表的分支。 结论 经测序验证,PCR检测方法具有很好准确性,初步应用表明我国实验猴群中SAdV高度流行,应加强实验猴群及相关生物制品中SAdV的监测,避免人类感染SAdV的潜在风险。

摘要:目的分析和研究阿尔兹海默病(AD)转基因模型小鼠(APP/PS1)活体脑部影像学特征。方法本研究利用7.0 T高场强磁共振成像(MRI)技术,对1、3、5、7、9和11月龄AD转基因小鼠模型及对照组活体脑组织的微观结构变化进行对比研究。定量分析了脑组织顶叶皮层及海马区的横向弛豫时间(T₂)、表观扩散系数(ADC)和各向异性分数(FA)随AD小鼠年龄变化情况。结果从9月龄开始AD转基因小鼠顶叶皮层及海马区可见散点状低信号区,并且随年龄增长逐渐增多；AD转基因小鼠顶叶皮层和海马区的T₂磁豫时间在1~9月龄过程中有减小趋势,但与对照组无显著性差异；顶叶皮层及海马区ADC值的计算结果表明,7~11月龄AD转基因小鼠的ADC值明显下降(P≤0.05)；同样APP/PS1小鼠的FA值从5月龄就开始降低(P≤0.05),并且这种差异一直持续到11月龄。结论高场强MRI能够显示AD病变出现早期小鼠顶叶皮层及海马区FA值的明显改变,揭示FA值对早期痴呆症临床诊断具有一定的参考价值。

摘要:目的观察不同因素致亚健康模型大鼠血液生化和血气电解质指标的变化。方法60只雄性Wistar大鼠随机分为5组,即多因素(MF)组、热水游泳(WS)组、睡眠不足(SD)组、单纯束缚(PC)组和正常对照(C)组,每组12只。采用热水游泳、睡眠剥夺和单纯束缚等单因素或多因素联合建立亚健康大鼠模型,各组造模5 d后,处死6只,剩余动物进行恢复性饲养3 d后处死。分别测定造模结束后和恢复3 d时大鼠的血清中的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、血糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和血气电解质等指标。结果(1)与正常对照(C)组比,造模5d后MF组的大鼠BUN和TG水平显著降低(P<0.05, P<0.01),同时CREA、AST、CK、CK/AST和LDH水平显著升高(P<0.01),WS组的大鼠TC、CK、CK/AST和LDH水平亦升高显著(P<0.01),且各模型组的大鼠GLU浓度明显增加(P<0.01)；恢复3 d后,MF组的大鼠TC、AST、ALT、ALB、BUN、CK、CK/AST和LDH水平均明显高于C组(P<0.05, P<0.01)；WS组的大鼠血清AST、CK、CK/AST比值和LDH水平亦显著高于C组(P<0.01),SD组的大鼠CK显著高于C组(P<0.05)；(2)与C组比,造模5d后MF组、SD组和PC组的大鼠PCO₂、Hct和Hb均明显升高(P<0.05, P<0.01),WS组Hct和Hb升高显著且Na⁺显著降低(P<0.01),MF组的大鼠PO₂和SO₂%均显著降低且K⁺明显升高(P<0.05),且各造模组的大鼠HCO-₃♂的浓度均显著升高(P<0.05, P<0.01)；恢复3 d后,除各造模大鼠的血液pH值和PO₂均明显下降(P<0.05, P<0.01)外,MF组、SD组和PC组的大鼠PCO₂升高并伴有SO₂%的降低(P<0.05, P<0.01),MF组和WS组Na⁺仍明显低于C组(P<0.05, P<0.01),SD组的大鼠K⁺和Mg²⁺则明显高于C组(P<0.05, P<0.01)。结论不同因素诱导的亚健康状态大鼠的血液生化、血气电解质指标均出现了不同程度上的改变,故血液生化和血气电解质指标能有效评估亚健康状态机体血液微环境的改变。

摘要:目的在实验豚鼠饲养盒内增加梯形和管形两种不同的模具,进行环境丰富化模具对豚鼠生长及行为影响的研究。方法每组豚鼠饲养4周,每周称1次体重,记录体重变化趋势,并观察豚鼠行为变化。结果放入模具的豚鼠生长情况优越于对照组,管形模具优于其他实验组。结论增加环境丰富化模具有利于豚鼠生长,且管形模具更接近豚鼠自然洞穴状态,更加有利于豚鼠实现自然躲藏行为和良好的生长、生活。

摘要:根据实验动物环境及设施国家标准(GB14925-2010)规定,结合公司的土建基础,综合考虑动物实验的要求,工程设计合理,施工规范。设施的各项指标均符合国家的相关标准。目前该设施总体运行良好,以下就该设施建设过程中的一些体会进行归纳。