摘要:目的制备系统性表达人载脂蛋白C3(APOC3)基因的转基因小鼠,建立高血脂小鼠模型。方法将人APOC3基因插入系统性表达启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立人APOC3转基因 C57BL/6J小鼠。并利用特异引物PCR法鉴定转基因小鼠的基因型,Western blot检测基因表达水平,血生化分析检测不同月龄转基因小鼠与同龄野生型小鼠的血脂指标,脂肪染色观察肝脏脂肪水平。结果建立了高表达人APOC3基因的转基因小鼠品系；转入的人APOC3基因在血液、肝脏、小肠、肌肉、心脏、肾脏、脾脏中均有明显表达；不同月龄转基因小鼠的血浆甘油三酯水平明显高于同龄野生型小鼠；转基因小鼠的肝脏脂肪含量高于野生型小鼠。结论系统性表达人APOC3基因的转基因小鼠表现高脂血症表型,可以作为高血脂以及高血脂相关的心血管病的工具动物。

摘要:目的用抗人B淋巴细胞单克隆抗体(利妥昔单抗注射液,Rituximab)通过静脉滴注的方法敲除中国恒河猴体内B淋巴细胞,并观察其敲除效果,为建立B淋巴细胞缺失的恒河猴动物模型提供基础的实验数据。方法选取健康的中国恒河猴两只,静脉滴注抗人B淋巴细胞单克隆抗体,定期采集外周血、腹股沟淋巴结和十二指肠黏膜组织,制备淋巴细胞悬液,应用流式细胞术的方法系统性测定B淋巴细胞及T淋巴细胞亚群的变化。结果静脉滴注利妥昔单抗注射液后24 h,中国恒河猴外周血中B淋巴细胞的缺失即能达到100%,持续约14 d；腹股沟淋巴结中B淋巴细胞在静注后7 d缺失100%；十二指肠黏膜组织中B淋巴细胞在静脉滴注后7 d缺失达到90%,维持28 d。并且在成功敲除B淋巴细胞的情况下,CD4⁺ T及CD8⁺ T淋巴细胞无明显波动,维持在一个稳定的水平。结论利妥昔单抗注射液能有效去除中国恒河猴体内B淋巴细胞,为建立B淋巴细胞缺失动物模型奠定基础。

摘要:目的研究超声波均质化(homogenization)处理对于仙台病毒在ELISA测试中抗原稳定性的影响。方法对BHK-21细胞内扩增培养的仙台病毒通过差速离心,富集后使用超声波做均质化处理,和未处理的病毒分别包被酶标板,使用标准免疫小鼠血清和SPF小鼠血清对包被平板进行测试,比较样品测试孔间测量数据的变异率。结果对免疫血清做梯度稀释,各梯度样品在未经超声处理仙台病毒抗原包被ELISA检测中测量值的变异率在1.97%~6.02%之间；在经超声处理仙台病毒抗原包被ELISA检测中测量值的变异率在0.53%~2.26%之间；SPF血清测量值的变异率均高于免疫血清；所有样品在经超声处理的病毒抗原包被ELISA检测中测量值的变异率均较小。结论超声波处理有效的提高了仙台病毒抗原的均质性,在ELISA测试中提高了抗原的稳定性。

摘要:目的研究SIVmac239病毒分别通过直肠(rectal infection:IR)及静脉(intravenous infection:IV)感染恒河猴,在感染急性期外周血CD4⁺T细胞数量与其细胞表面的死亡受体(CD95)表达量之间的变化关系。方法将SIVmac239经直肠及静脉途径各感染14只恒河猴。监测病毒载量、CD4⁺ T淋巴细胞数量及CD4⁺/CD8⁺比值的变化,从而明确感染。同时,在感染急性期内9个时间点采集静脉血,并利用流式细胞术分析CD4⁺T细胞表面CD95的表达量。 结果静脉组恒河猴CD95表达量于第2天开始升高,第7天达到最高,同时CD4⁺T淋巴细胞数降到最低。直肠组恒河猴也于感染后第2天开始升高,但第10天才达到最高值,CD4⁺T淋巴细胞数于第17天降到最低。同静脉组相比,直肠组CD95表达量增高及CD4⁺T细胞数降低均较晚出现,且其CD4⁺T细胞数量降至最低晚于CD95表达量达到峰值一周后出现。结论SIVmac239经直肠及静脉感染恒河猴后,伴随CD4⁺T细胞表面CD95表达的升高,CD4⁺T细胞数量逐渐下降。但不同感染途径对CD4⁺T细胞表面CD95的表达量与CD4⁺T淋巴细胞数的变化不尽相同,这可能由于不同感染途径造成CD95在感染急性期CD4⁺T细胞数量降低中发挥的作用不同。

摘要:目的利用多态性微卫星DNA位点分析PLCε基因敲除小鼠的遗传特性。方法用所筛选的15个微卫星DNA位点对28只PLCε基因敲除小鼠的DNA进行了PCR扩增,通过基因片段大小来分析群体的遗传多样性。结果13个微卫星DNA位点中(D1Mit365、D3Mit51、D4Mit235、D6Mit102、D7Mit281、D8Mit113、D9Mit23、D10Mit180、D13Mit88、D16Mit145、D17Mit36、D18Mit94、D19Mit97)每个位点的28只小鼠DNA片段泳动距离一致,呈现单态性,表明该群体符合近交系的遗传特性；而利用Dq(敲基因型)和Dy(野生型)两个位点对28只小鼠的PCR扩增结果进行了鉴别分析,其中敲除基因型小鼠为6只；野生型为7只；杂合型为15只。结论利用微卫星标记技术可以对群体进行遗传质量监测,并能有效地鉴别不同的基因型,为小鼠的遗传质量监测提供了一种可行的方法。

摘要:目的比较三种高尿酸血症大鼠模型的可行性。方法实验大鼠随机分为三个造模组和对照组。造模组分别予5%氧嗪酸钾(5% OA)饲料、10%酵母粉(10% YE)饲料、10%酵母粉+2%氧嗪酸钾(10%YE+2% OA)饲料饲养3周后予普通饲料饲养1周,对照组予普通饲料。各周留取大鼠血、尿标本,检测尿酸、肌酐、尿素氮、白蛋白、甘油三酯、胆固醇等指标的变化。结果与对照组相比,5% OA组血尿酸在各周均升高(P<0.05)；10% YE组血尿酸仅在第2周升高(P<0.05)；10%YE + 2%OA组血尿酸在第1、2周升高(P<0.05),第3周下降至正常。造模组与对照组的体重、血清肌酐、血清尿素氮、血清白蛋白水平无差异。结论5% OA模型可形成较稳定的高尿酸血症状态,10% YE模型难以达到高尿酸血症状态,10%YE + 2% OA模型血尿酸水平欠稳定。

摘要:目的对比分析妊娠晚期腹腔注射缓冲液对近交系SPF级C57BL/6J (B6) 和BALB/c (B/c) 小鼠繁育生理的影响。方法B6和B/c小鼠随机、全同胞兄妹2∶1/1∶1(♀/♂)过夜同居交配,观察交配方式、阴栓与受孕率的关系；受孕鼠在妊娠的第17.5天(妊娠0d=交配后当天)接受腹腔注射酸性磷酸缓冲液,观察注射对母鼠及胚胎的作用及子鼠从离乳到8周的早期生长发育情况。结果B6较B/c雌鼠的受孕率高(29.4% vs. 21.1% ［2∶1］, 33.2% vs. 29.7% ［1∶1］)；交配后10 d~14 d,根据雌鼠增大的腹部、结合体重来判断受孕较观察阴栓更为准确；比较而言,妊娠晚期腹腔注射对B6母鼠及胚胎的影响较大,表现在离乳子鼠数量减少(4.7±3.1 vs. 6.1±2.1,P=0.231),离乳时两性别的子鼠体重(g,雌性:11.7±1.1 vs. 12.7±1.5；雄性:12.8±1.3 vs. 13.6±1.5)显著降低(P均<0.05)及两品系子鼠早期生长发育的方式显著不同(P=0.000)。结论近交系小鼠繁殖生理存在品系差异；两品系受孕鼠对妊娠晚期腹腔注射的耐受不同,并可能影响实验动物产后的哺乳过程及子鼠的早期生长发育。

摘要:目的观察热量限制培养条件下,SH-SY5Y细胞抗氧化应激损伤的能力。方法建立过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型。体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组、损伤组(50、100、250、500、1 000 μmol/L H₂O₂)、低糖组(2 g/L)、低糖+损伤组,进行细胞形态观察、测定各组细胞的噻唑蓝(MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率。 结果 与对照组比较,(50、100、250、500、1 000) μmol/L H₂O₂损伤1 h后MTT代谢率测定细胞活力,50 μmol/ L组与对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05)；其他组与对照组比较,随着H₂O₂浓度的增加,细胞活力呈递减趋势,差异具有显著性(P<0.01)；选定250 μmol/L H₂O₂组为损伤应激源。 用低糖预处理细胞24 h,给与250 μmol/L H₂O₂损伤1 h后测定MTT代谢率显示,与对照组比较, 损伤组活力明显下降,低糖组活力上升(P<0.01);与损伤组比较,低糖 +损伤组活力明显上升(p<0.01)；继续培养至7 h发现,与对照组比较,低糖组活力上升(P<0.01)；与损伤组比较,低糖+损伤组活力明显上升 (P<0.01)。进一步检测LDH漏出率显示,损伤1 h后结果显示,与对照组比较,损伤组漏出率明显增加 (P<0.05),低糖组漏出率稍有减少 (P>0.05)；与损伤组比较,低糖+损伤组漏出率明显减少(P<0.01)；继续培养7h显示,低糖7h组与低糖1 h组比较,漏出稍有增多 (P>0.05),低糖 + 损伤组7 h组与低糖 + 损伤组1 h比较漏出率稍有增加(P<0.05)；细胞形态学观察显示,未加损伤之前,低糖组的细胞形态,与对照组比较无明显改变。加入损伤药物1h后的细胞形态与对照组比较无明显改变。加入损伤药物7 h后的细胞形态, 低糖组和对照组细胞突起伸展良好细长,损伤组可见细胞数目明显减少,死细胞多,突起回缩,细胞明显变圆,贴壁性不好,透光性差。结论热量限制能提高神经细胞的抗氧化应激能力,增加细胞生存率,降低死亡率。

摘要:目的建立RT-SHIV病毒全长rt基因单拷贝PCR扩增方法,用于HIV-1 rt基因体内遗传与变异研究。方法Oligo软件设计RT-SHIV rt基因特异性扩增引物,梯度稀释方法进行特异性和灵敏度筛选,进而优化退火温度和PCR反应最佳循环数等条件,建立rt基因PCR扩增方法；在此基础上将模板进行有限稀释,摸索rt基因单拷贝PCR扩增条件；使用该方法扩增感染猴体内RT-SHIV病毒rt基因,BioEdit软件进行基因序列分析。结果筛选得到一组巢式PCR引物,成功建立了RT-SHIV rt基因PCR扩增方法；当模板浓度为100 copies/μL时,扩增产物为单拷贝序列；测序结果显示RT-SHIV感染猴d266和d294血浆样本分别存在1处和6处氨基酸突变。结论本研究建立的全长rt基因单拷贝PCR扩增方法特异性好、灵敏度高、重复性强,可以应用于各类RT-SHIV病毒的全长rt基因分析。

摘要:目的诱导稳定而可逆的大鼠再生障碍性贫血模型。方法模型A组造模第1天以直线加速器剂量率为240 cGy /min, SSD=100 cm, 全身照射1.2 min,分别于第4、6、8天腹腔注射环磷酰胺35 mg/kg 和氯霉素43.75 mg/kg,共3次；模型B组造模第1天以直线加速器剂量率300 cGy/min, SSD=100 cm, 全身照射1.2 min。分别于第4、5、6天腹腔注射环磷酰胺35 mg/kg和氯霉素43.75 mg/kg,共3次。对照组造模第1天以假照射。于造模9、12、15 d后进行网织红细胞计数、外周血象检查、骨髓活检。结果造模第9天与对照组比较,A组、B组的白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)、血红蛋白(HGB)、网织红细胞计数(RET)均明显降低,差异有显著性(P<0.05)。于造模第15天,A组RBC、HGB值继续下降,WBC、PLT、RET值回升,与对照组比较降低,差异有显著性(P<0.05)；B组WBC、RBC、HGB、PLT值有显著回升,与对照组比较降低,差异有显著性(P<0.05)；RET值与对照组比较升高,差异有显著性(P<0.05)。结论模型A组具有复制周期短,成功率高、重复性好,死亡率低等优点。适合用于治疗药物研究的实验。

摘要:目的评估饲料品质、供应风险及价格,为24个月长期致癌性试验寻找最佳的饲料及饲料供应商。方法将日本进口MF18饲料,美国进口LabDiet饲料以及北京科澳生产的啮齿类饲料样品分别包装,委托专业检测实验室对常规营养成分、毒理及微生物指标进行检测,评估饲料品质；对各来源饲料的运输风险、非可控因素等可能影响饲料品质及稳定供应的方面进行评估；兼顾饲料价格作为参考评估因素。结果经评估, 3种饲料品质均符合饲料国标GB14924-2001*的要求；以毒性研究关注的毒理指标作为评价标准,则3种饲料品质排序为:MF18饲料(最佳)—> LabDiet饲料(较佳)—>科澳国产饲料(佳)；进口饲料的运输及供应稳定性相比存在较大风险；国产饲料价格相对便宜但未成为关键评估因素。结论经过综合评估, 特殊定制的本地国产饲料被认定为是国家药物安全评价监测中心24个月致癌性试验用的最佳饲料。

摘要:目的调查普通环境长爪沙鼠呼吸道细菌及支原体携带情况,为制定长爪沙鼠微生物学等级标准提供依据。方法对普通环境饲养的65只长爪沙鼠进行解剖,取气管分泌物接种血琼脂,分别放入普通培养箱和5% CO₂培养箱中培养48 h,分离菌株后同时进行生化分析和PCR测序鉴定,以期准确判断分离菌株所属菌属；气管浸液提取DNA,用支原体特异性引物进行PCR检测,并分别计算检出率。结果本研究共检出22种细菌及支原体。不同细菌、支原体感染率相差很大,阳性率在1.5%(1/65)到64.6%(42/65)之间,其中部分细菌为大鼠和小鼠致病菌。结论本研究为长爪沙鼠的微生物学等级标准的制定提供了参考数据。

摘要:目的研制河豚毒素中和性单抗,建立基于河豚毒素单抗的河豚毒素检测方法。方法用TTX-KLH免疫Balb/c小鼠,用 TTX-BSA间接 ELISA 筛选,建立杂交瘤细胞系,腹腔接种Balb/c 小鼠诱生腹水, Protein A Sepharose CL4B 亲和柱纯化, SDS-PAGE、间接ELISA鉴定；用常规法确定TTX对昆明小鼠的LD50；将单抗和TTX混合物注入小鼠腹腔,检测单抗对TTX的中和能力；建立检测TTX的竞争ELISA法。结果获得了2株TTX中和性单抗,腹水用Protein A Sepharose CL 4B纯化后抗体纯度大于95%；常规间接ELISA检测,显示单抗5E7的结合能力高于5E4。单抗对2 LD50 TTX攻击昆明小鼠的保护率为50%,建立了基于中和性单抗的TTX检测方法,TTX的最小检出浓度为1.56 μg/mL。结论获得了TTX中和性单抗,对致死剂量TTX攻击昆明小鼠的保护率为50%,建立了基于中和性单抗的TTX检测方法,TTX的最小检出浓度为1.56 μg/mL。

摘要:伴随着鱼类作为科研重要材料的迅猛发展,实验用鱼类福利引起了人们的关注。本文旨在阐述国内外鱼类福利发展的历史和现状,剖析鱼类福利实施困难的因素,提供提高福利的参考对策,以期帮助科研工作者进一步地了解实验用鱼类福利,促进在实验过程中鱼类福利的发展。

摘要:肺癌是世界各国常见的恶性肿瘤,肺癌动物模型在人类肺癌病因、诊断、治疗等方面发挥重要的作用。其中转基因肺癌模型能够更好的模拟肺癌,更有利于肺癌病因及发病过程的研究。本文介绍了近年来转基因肺癌模型的研究进展。

摘要:谷氨酸是脑内必需的兴奋性神经递质之一,兴奋性氨基酸转运体(Excitatory amino acid transporter EAAT)2是最主要的谷氨酸转运体,负责脑内90%以上的谷氨酸再摄取,调节突触间隙的谷氨酸浓度。EAAT2功能紊乱导致胞外谷氨酸过量积聚,在多种神经退行性疾病的发病过程中起重要作用,如阿尔茨海默病、亨廷顿舞蹈病、肌萎缩侧索硬化等。对于人EAAT2启动子的研究发现,NF-kB在星形胶质细胞中对EAAT2表达起关键作用。通过筛选1 040种FDA批准的化合物,发现多种β-内酰胺类抗生素如头孢曲松钠等是EAAT2的转录激活剂,可以增加EAAT2的蛋白表达水平,产生神经保护作用。

摘要:哨兵动物在我国还未作为一个“工具”用于实验动物微生物检测工作,但随着实验动物种类和特殊动物的日益增加,现有方法已经不能满足检测需要。探讨哨兵动物的应用,采用国外先进方法,对提高我国实验动物质量显得非常重要。本文对哨兵动物的概念、使用方法和设置做一概述。

摘要:目的在动物福利及“3R”原则的指导下,建立贵州小型猪常用的实验方法。方法应用对动物刺激小、痛苦少的方法给贵州小型猪肌内注射、灌胃给药、采血、麻醉、静脉注射、处死给药等方法。结果建立了一套符合动物福利要求和“3R”原则的小型猪的实验方法。