摘要: 目的 建立长爪沙鼠 Pnpla3 基因敲减的肝原代细胞的脂变模型,并用于评价灵芝三萜酸的降脂效果。 方法 分离培养长爪沙鼠肝原代实质细胞,以棕榈酸(PA)诱导成肝脂变模型,根据 Pnpla3 三个外显子序列设计、合成三对 Pnpla3 基因的干扰 RNA 载体,并通过 qPCR 及 Western blot 法检测 Pnpla3 的表达量及干扰效率筛选出一对稳转肝实质的干扰载体。以高(1 μmol / L)、中(0. 1 μmol / L)、低(0. 01 μmol / L)三个剂量的灵芝三萜酸培养细胞,并以阳性药物蛋氨酸(7 μmol / L)为对照,检测干扰 Pnpla3 基因后的细胞甘油三酯(TG)的含量以进行降脂效果观察。 结果 诱导 24 h 内,长爪沙鼠肝脂变细胞脂滴增加的较多且大多数细胞形状正常的 PA 400 μmol / L 为造模的合适浓度,以 Pnpla3 的第二外显子为靶点设计的 siRNA2 组敲低效果最好,干扰效率高于 70%。 干扰 Pnpla3 基因可以起到降低细胞内 TG 的作用,单独加入中高剂量的灵芝三萜酸有明显的降脂效果(P< 0. 01),干扰 Pnpla3 基因与加入灵芝三萜酸的降脂效应具有累积作用(P< 0. 01)。 结论 建立了长爪沙鼠肝实质原代细胞的脂变模型,灵芝三萜酸对干扰 Pnpla3 基因后的长爪沙鼠肝实质细胞中 TG 的含量有明显的抑制或减轻作用,灵芝三萜酸降脂效应与磷脂代谢相关 2 个通路(ko00561,ko00564)中 Pnpla3 基因的表达相关。