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张 昆,孙 洋,翟所锴,杨 光.干扰 lncRNA HOXA-AS3 负调控 miR-340-5p 对小细胞肺癌细胞 DMS114 / DDP 顺铂耐药性的影响[J].中国比较医学杂志,2021,31(11):96~101.
干扰 lncRNA HOXA-AS3 负调控 miR-340-5p 对小细胞肺癌细胞 DMS114 / DDP 顺铂耐药性的影响
Interference of lncRNA HOXA-AS3 negatively regulates the effect of miR-340-5p on cisplatin resistance in DMS114 / DDP small cell lung cancer cells
投稿时间:2020-12-01  
DOI:10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2021. 11. 014
中文关键词:  lncRNA HOXA-AS3  miR-340-5p  小细胞肺癌  顺铂  增殖  凋亡
英文关键词:lncRNA HOXA-AS3  miR-340-5p  small cell lung cancer  cisplatin  proliferation  apoptosis
基金项目:
作者单位E-mail
张 昆 淄博市第一医院呼吸内科,山东 淄博 255200 zbkr48@ 163.com 
孙 洋 淄博市第一医院呼吸内科,山东 淄博 255200  
翟所锴 淄博市第一医院呼吸内科,山东 淄博 255200  
杨 光 淄博市第一医院呼吸内科,山东 淄博 255200 whi6938280@ 126.com 
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中文摘要:
       目的 探讨长链非编码 RNA HOXA-AS3( lncRNA HOXA-AS3)对小细胞肺癌耐药性细胞 DMS114 / DDP 的影响及其对微小 RNA-340-5p(miR-340-5p)的调控作用。 方法 采用 qRT-PCR 法检测肺癌组织及癌旁组织 中 HOXA-AS3、miR-340-5p 的表达量;体外培养小细胞肺癌细胞 DMS114,采用顺铂浓度递增法建立耐药细胞 DMS114 / DDP,分别将 si-NC、si-HOXA-AS3、si-HOXA-AS3 与 anti-miR-NC、si-HOXA-AS3 与 anti-miR-340-5p 转染至 DMS114 / DDP 细胞;采用 qRT-PCR 法检测细胞中 HOXA-AS3、miR-340-5p 的表达量;采用 CCK-8 法检测细胞存活率及计算顺铂 IC50值;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测 HOXA-AS3、miR-340-5p 的靶向关系。 结果 肺癌组织中 HOXA-AS3 的表达水平升高(P<0. 05),miR-340-5p 的表达水平降低(P<0. 05);不同浓度的顺铂处理后 DMS114 细胞、DMS114 / DDP 细胞存活率逐渐降低(P<0. 05),且 DMS114 / DDP 细胞 IC50值高于 DMS114 细胞(P<0. 05);与 DMS114 细胞比较,DMS114 / DDP 细胞中 HOXA-AS3 的表达水平升高(P<0. 05);转染 si-HOXA- AS3 可明显降低细胞活力(P<0. 05),提高凋亡率(P< 0. 05);双荧光素酶报告实验证实 HOXA-AS3 可靶向结合 miR-340-5p;共转染 si-HOXA-AS3 与 anti-miR-340-5p 可明显提高细胞活力(P<0. 05),降低凋亡率(P<0. 05)。 结论 干扰HOXA-AS3 表达可抑制细胞增殖及促进细胞凋亡进而增强 DMS114 / DDP 细胞顺铂敏感性,其作用机制可能与上调 miR-340-5p 的表达有关。
英文摘要:
       Objective To explore the effect of lncRNA HOXA-AS3 on cisplatin resistance in small cell lung cancer cells and its regulatory effect on miR-340-5p. Methods The expression levels of HOXA-AS3 and miR-340-5p in lung cancer tissues and adjacent tissues were measured by qRT-PCR. Small cell lung cancer cell line DMS114 was cultured in vitro and drug-resistant cell line DMS114 / DDP was established by increasing the concentration of cisplatin. si-NC, si- HOXA-AS3, si-HOXA-AS3, anti-miR-NC, si-HOXA-AS3 and anti-miR-340-5p were transfected into DMS114 / DDP cells. The expression levels of HOXA-AS3 and miR-340-5p in cells were measured by qRT-PCR. CCK-8 assays were used to measure cell survival rate and calculate the IC50 value of cisplatin. Flow cytometry was used to assess the apoptosis rate. Dual luciferase reporter assays were used to analyze the targeting relationship between HOXA-AS3 and miR-340-5p. Results The expression level of HOXA-AS3 in lung cancer tissue was increased significantly (P<0.05) and that of miR-340-5p was decreased significantly (P<0.05). After treatment with various concentrations of cisplatin, the survival rates of DMS114 and DMS114 / DDP cells were decreased gradually (P<0. 05) and the IC50 value of DMS114 / DDP cells was higher than that of DMS114 cells (P<0. 05). Compared with DMS114 cells, the expression level of HOXA-AS3 in DMS114 / DDP cells was increased significantly (P<0.05). Transfection with si-HOXA-AS3 significantly reduced cell viability (P<0.05) and increased the apoptosis rate (P<0.05). Dual luciferase reporter assays confirmed that HOXA-AS3 targeted and bound to miR-340-5p. Cotransfection of si-HOXA-AS3 and anti-miR-340-5p significantly increased cell viability ( P< 0.05) and reduced the apoptosis rate ( P< 0.05 ). Conclusions Interfering with the expression of HOXA-AS3 inhibits cell proliferation and promotes apoptosis, thereby enhancing the sensitivity of DMS114 / DDP cells to cisplatin. The mechanism of action may be related to upregulation of miR-340-5p expression.
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