摘要:目的 人的ABO 血型常规免疫学检测方法不适用于实验猴猕猴血型检测,而实验猴血型鉴定在器官移植等研究中必不可少?本研究目的是建立一个快速?可靠的恒河猴与食蟹猴ABO 血型核酸鉴定方法?方法本室建立了一种新的ABO 血型的分子学检测方法,利用竞争性等位基因PCR(KASP)技术,通过识别与血型密切相关功能基因的2 个SNP 位点上的碱基,对恒河猴与食蟹猴血型进行分型,并通过设计2 个SNP 位点外围的普通PCR 引物,对KASP 方法鉴定出的血型样本进行Sanger 测序鉴定?结果 比对了15 份用Taqman PCR 方法已确定血型的食蟹猴全血核酸样本,新建立的KASP 分型结果与原血型结果完全一致,为了保证KASP 方法鉴定结果的准确性,实验人员用新建立的普通PCR 方法通过Sanger 测序验证了KASP 方法与测序结果完全一致?为了对新建的KASP 方法重复性进行验证,选取了已知血型的6 份实验猴全血,每份血样做5 个重复,结果显示该方法有极好的重复性?进一步用新建的KASP 方法检测了51 份临床样本,其中食蟹猴样本38 份,恒河猴样本13 份,同一样本的2 个位点的血型结果完全一致,其中A 型血9 份(17. 6%),B 型血19 份(37. 3%),AB 型血23 份(45. 1%),未检出O 型血?同时从A 型?B 型?AB 型的临床样本中,各型分别选了5 个样本,进行普通PCR 扩增及测序分析,证明2个SNP 位点上的序列与KASP 分型结果一致?结论 新建的KASP 血型鉴定方法准确性高,可用于实验恒河猴与食蟹猴的ABO 血型的快速检测?该方法相较于传统的血清学或测序方法,简单快捷,经济可靠,结果易于判读,同时对样本的要求比传统的血清学方法低,新鲜或存放较久的全血?唾液或核酸等都可以用于检测?