• 2023年第0卷第11期文章目次
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    • 中等强度和高强度间歇运动对非酒精性脂肪肝小鼠心肌线粒体自噬的影响

      2023, 33(11):1-9. DOI: 10. 3969/ j.issn.1671-7856. 2023. 11. 001

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      摘要: 目的 探讨中等有氧运动和高强度间歇运动对非酒精性脂肪肝小鼠心肌线粒体自噬的影响及可能机制。 方法 将40 只3 周龄雄性C57BL/6J 小鼠随机分为普通饲养组(Chow 组,n=10)和高脂饲养组(HFD 组,n=30)。第18 周,将HFD 组体重超过普通饮食组20%~30%(包含20%)者判定为肥胖小鼠(n= 26),通过随机抽选2 只小鼠做肝油红O 染色,确定NAFLD 小鼠模型建立成功。随机筛选出16 只NAFLD 小鼠分成中等强度有氧运动组(MICT 组)和高强度间歇有氧运动组(HIIT 组),每组8 只,分别对两组进行8 周的运动训练,干预结束后称重取材。Masson 染色观察心肌纤维化情况;透射电镜观察心肌细胞超微结构;Western blot 检测心肌中线粒体自噬和线粒体生物发生等相关蛋白表达。 结果 (1)与Control 组相比,Model 组体重显著增加、心指数明显下降;与Model 组相比,MICT 组和HIIT 组体重明显增加、MICT 组心指数上升。(2)Masson 结果显示,与Control 组相比,Model 组心肌内胶原纤维含量显著增加,且电镜下心肌肌纤维排列杂乱、断裂,心肌形态杂乱不堪,线粒体肿胀、嵴发生断裂且模糊不清并夹杂多个脂滴;与Model 组相比,MICT 组和HIIT 组心肌内胶原纤维含量显著性减少,透射电镜下心肌肌纤维排列略有恢复,z 线清晰可见,线粒体变性程度略有改善,且脂滴也略有减少,其中,MICT 组对心脏组织结构改善效果优于HIIT 组。(3)Western blot 结果显示,与Control 组相比,Model 组心肌组织中PINK1 和Beclin1 表达水平无明显变化,Parkin、LAMP1 和PGC-1α 表达显著下降(P<0. 01),蛋白表达和LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ比值显著升高(P<0. 05,P<0. 01);与Model 组相比,MICT 组和HIIT 组PINK1 和Beclin1 表达水平无明显变化,PGC-1α表达呈上调趋势,其中MICT 组Parkin、LAMP1 表达显著升高(P<0. 05),p62 蛋白表达和LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ比值明显降低(P<0. 05,P<0. 01),HIIT 组Parkin、LAMP1 表达水平具有上调趋势,LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ比值和p62 蛋白表达明显降低(P<0. 05,P<0. 01)。 结论 不同方式有氧运动均能有效改善NAFLD 小鼠心肌结构和功能损伤,其作用途径可能是通过刺激心肌细胞内线粒体自噬通量,激活自噬,恢复细胞正常自噬功能,从而改善心肌细胞损害,且中等连续有氧运动改善效果更佳。

    • 基于PI3K/ Akt/ NF-κB 信号通路探讨高尿酸血症合并非酒精性脂肪肝机制

      2023, 33(11):10-16. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 002

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      摘要: 目的 基于PI3K/ Akt/ NF-κB 信号通路研究高尿酸血症合并非酒精性脂肪肝(HUA-NAFLD)的发病机制。 方法 64 只SD 大鼠,随机分为空白组、高尿酸血症(HUA)组、非酒精性脂肪肝(NAFLD)组、HUA-NAFLD组,每组16 只,分别于8、12 周末取材,对大鼠血清生化指标进行检测;苏木素-伊红(HE)和油红O 染色法观察肝组织病理变化和脂质沉积情况;蛋白免疫印迹(Western blot)法对肝组织PI3K/ Akt 和NF-κB 信号通路中相关蛋白进行检测。 结果 与其余三组比较,HUA-NAFLD 组大鼠肝指数明显升高(P<0. 05),肝细胞出现大量脂肪空泡,肝索结构模糊,肝组织病变更重。与空白组比较,NAFLD 组高密度脂蛋白(HDL)水平降低,HUA 组尿酸(UA)、低密度脂蛋白(LDL)水平升高,HUA-NAFLD 组HDL 水平降低,总胆固醇(TC)、UA、LDL 甘油三酯(TG)水平升高(P<0. 05);与HUA 组比较,NAFLD 组肌酐(UREA)水平降低(P<0. 05);与HUA-NAFLD 组比较,HUA 组TC、TG、LDL水平降低,NAFLD 组UA、TG、LDL 降低(P<0. 05)。Western blot结果显示,与空白组比较,NAFLD 组AKT、p65 磷酸化水平显著升高,HUA-NAFLD 组AKT、PI3K、p65、IκκB 磷酸化水平显著升高(P<0. 05);与HUA-NAFLD 组比较,HUA、NAFLD 组AKT、p65 磷酸化水平显著下降,HUA 组IκκB 磷酸化水平显著下降(P<0. 05);与HUA 组比较,NAFLD 组p65 磷酸化水平显著升高(P<0. 05)。 结论 HUA-NAFLD 组较单个疾病组生化指标异常更加明显,肝病变程度更重,PI3K/ Akt/ NF-κB 信号通路可能在HUA、NAFLD,以及HUA-NAFLD 发病过程中发挥重要作用。

    • 六君子汤乙酸乙酯提取物干预CAFs 条件培养基下EC9706 细胞能量代谢的机制研究

      2023, 33(11):17-24. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 003

      摘要 (48) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 探索六君子汤乙酸乙酯提取物(EAELD)对癌相关成纤维细胞(CAFs)条件培养基下食管癌EC9706 细胞能量代谢影响的分子机制。 方法 噻唑蓝(MTT)法检测EAELD 对EC9706 增殖活性的影响;比色法检测EAELD 对CAFs 条件培养基(CAFM)下EC9706 细胞上清中乳酸及葡萄糖含量的影响;Seahorse 能量代谢分析系统检测EAELD 对CAFM 下EC9706 细胞能量代谢的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测EAELD 对能量代谢相关分子mRNA 及蛋白表达的影响。 结果 与DMEM 相比,除10 μg/ mL组外,EAELD 对EC9706 细胞增殖活性均有明显抑制作用(P<0. 05),选取抑制浓度(IC30)25 μg/ mL,半抑制浓度(IC50)40 μg/ mL,作为低、高剂量组进行后续实验。在CAFM 培养的EC9706 细胞各组中,EAELD 低、高剂量组都能显著降低非线粒体耗氧、基础呼吸值、最大呼吸值、合成ATP 耗氧量、备用呼吸能力、基础糖酵解、补偿糖酵解、糖酵解潜能(P<0. 01),减少EC9706 细胞上清乳酸含量(P<0. 01),下调GLUT1 的mRNA 表达(P<0. 05,P<0. 01),下调p-PKM2、HK2、PKM2、MCT1 蛋白表达(P<0. 01);EAELD 高剂量组能够下调EC9706 细胞的线粒体耗氧与基础糖酵解比值(P<0. 05),减少EC9706 细胞葡萄糖摄取(P<0. 05),下调p-PKM2、GLUT1 的蛋白表达(P<0. 01,P<0. 05);EAELD低剂量组能够下调MCT1 的mRNA 表达(P<0. 05)。 结论 六君子汤乙酸乙酯提取物能够干预CAFs 条件培养基下EC9706 细胞的能量代谢,其机制可能与EAELD 调控HK2、PKM2、GLUT1、MCT1、MCT4 的mRNA 和蛋白表达相关。

    • 黄芩苷对注意缺陷多动障碍动物模型SHR 大鼠核心症状影响研究

      2023, 33(11):25-32. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 004

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      摘要: 目的 通过旷场和Morris 水迷宫实验,探究黄芩苷调控注意缺陷多动障碍动物模型核心临床症状的疗效及其潜在机制。 方法 将30 只SHR 大鼠随机分为模型组、盐酸哌甲酯(MPH)组、黄芩苷组、黄芩苷+丁苯那嗪组和MPH+丁苯那嗪组,每组6 只,另设6 只WKY 大鼠为对照组。MPH 组(1. 5 mg/ kg)、黄芩苷组(150 mg/kg)按体重(1 mL/100 g)灌胃给药,空白组、模型组给等量生理盐水,MPH+丁苯那嗪组、黄芩苷+丁苯那嗪组在灌胃给药同时,按体重(0. 5 mL/100 g)腹腔注射丁苯那嗪(3 mg/ kg)。连续给药4 周。在规定时间进行旷场和水迷宫实验,记录并分析实结果。 结果 MPH 组和黄芩苷组在旷场实验中运动总距离和平均速度较模型组显著减小(P<0. 05),在水迷宫实验中潜伏期较模型组显著缩短(P<0. 05)、在目标象限运动距离和停留时间占比及穿越平台次数较模型组显著增加(P<0. 05),且这两组间无明显差异;黄芩苷+丁苯那嗪组在旷场实验中运动总距离和平均速度较模型组显著减小(P<0. 05),较黄芩苷组明显增大,在水迷宫实验中潜伏期较模型组显著缩短(P<0. 05),较黄芩苷组显著延长(P<0. 05)、在目标象限运动距离和停留时间占比较模型组明显增加,较黄芩苷组显著减少(P<0. 05)。 结论 黄芩苷能够改善SHR 大鼠多动、冲动、注意力不集中等核心症状,其疗效的发挥可能与调控DA 囊泡转运相关。

    • 基于HIF-1α/ 自噬途径探讨二氯化钴调控3T3-L1 脂肪细胞炎症反应及胰岛素抵抗的机制

      2023, 33(11):33-38. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 005

      摘要 (33) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 探讨低氧诱导剂二氯化钴(CoCl2 )调控3T3-L1 脂肪细胞自噬活性从而改善脂肪细胞炎症反应和胰岛素抵抗的机制。 方法 常规培养和诱导分化3T3-L1 脂肪细胞成为成熟的脂肪细胞,CoCl2 作为低氧诱导剂在不同时间、不同浓度条件下干预成熟的脂肪细胞,确认CoCl2 干预脂肪细胞自噬活性的最佳时间和浓度,随后根据此时间和浓度分组,分为0 h(对照组)、12 h、24 h、48 h CoCl2 处理组,收集细胞样本进行相关指标测定。MTT法评价各组细胞存活情况;Western blot 分析各组细胞HIF-1α 及其下游蛋白葡萄糖转运蛋白Glut-1、自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1 的表达情况;免疫荧光法检测各组细胞的自噬水平;ELISA 法检测各组细胞上清液中炎症因子TNF-α 和IL-6 分泌情况。 结果 150 μmol/ L CoCl2 是调控3T3-L1 脂肪细胞自噬水平的最佳干预浓度;150 μmol/ L CoCl2 干预成熟的脂肪细胞24 h 时,自噬活性水平增高,细胞存活率无显著的减低,脂肪细胞中HIF-1α、LC3-Ⅱ、Beclin-1、Glut-1 蛋白的表达水平也显著升高,但炎症因子TNF-α 和IL-6 分泌水平无明显增加;48 h 时自噬水平减低,细胞存活率出现显著减低,脂肪细胞中HIF-1α、LC3-Ⅱ、Beclin-1、Glut-1 蛋白的表达水平减低,炎症因子TNF-α和IL-6 分泌水平出现增加趋势。 结论 150 μmol/ L CoCl2 可以调控脂肪细胞自噬水平增加,自噬水平的增加以依赖HIF-1α 的方式活化,从而使自噬发挥保护脂肪细胞的作用使其免受炎症损伤和改善脂肪细胞胰岛素抵抗。

    • 大蒜素通过JAK2/ STAT3 信号通路改善高糖诱导的人腹膜间皮细胞-间充质转化

      2023, 33(11):39-47. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 006

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      摘要: 目的 探讨大蒜素改善高糖诱导的人腹膜间皮细胞-间充质转化的相关机制。 方法 培养人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)后将其进行两次分组,分组1:①对照组;②8. 5 mmol/ L D-葡萄糖诱导组(8. 5 mmol/ L DG 组);③17 mmol/ L D-葡萄糖诱导组(17 mmol/ L DG 组);④34 mmol/ L D-葡萄糖诱导组(34 mmol/ L DG 组);⑤68 mmol/ L D-葡萄糖诱导组(68 mmol/ L DG 组)。其中除对照组外,其余组分别用8. 5、17、34、68 mmol/ L 的D-葡萄糖诱导48 h。分组2:①对照组;②34 mmol/ L D-葡萄糖诱导组(HG 组);③34 mmol/ L D-葡萄糖+低剂量大蒜素诱导组(AL-L 组);④34 mmol/ L D-葡萄糖+中剂量大蒜素诱导组(AL-M 组);⑤34 mmol/L -葡萄糖+高剂量大蒜素诱导组(AL-H 组);⑥34 mmol/ L D-葡萄糖+JAK2 抑制剂诱导组(JAK2 组)。其中HG 组用34 mmol/ L 的D-葡萄糖诱导48 h,AL-L 组、AL-M 组、AL-H 组用34 mmol/ L 的D-葡萄糖预处理6 h 后分别用10、20 和40 ng/ mL 大蒜素诱导48 h,JAK2 组加入1 μmol/ L AG490 预处理6 h 后用34 mmol/ L 的D-葡萄糖诱导48 h。ELISA 检测HPMCs 上清的IL-6、TNF-α 和IL-1β 的含量;CCK-8 检测细胞增殖并观察形态;Western blot 检测JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin、α-SMA、MCP-1、p65、p-p65 蛋白的表达情况。 结果与对照组相比,高糖诱导组HPMCs 的相对存活率明显降低(P<0. 01),细胞形态表现异常,促进上皮细胞-间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)发生的α-SMA、N-cadherin 和Vimentin 表达明显上调,抑制EMT 发生的E-cadherin 蛋白表达明显下调,JAK2/ STAT3 信号通路被激活从而导致EMT 的发生(P<0. 01);而大蒜素能明显促进高糖诱导后的HPMCs 增殖,恢复异常的细胞形态,调节与EMT 发生的相关蛋白水平从而改善HPMCs 的上皮间质转分化;与高糖诱导组相比,大蒜素处理组HPMCs 的促炎症因子IL-1β、IL-6 和TNF-α 明显降低,促炎症蛋白p-p50 和MCP1 表达明显下调,表明大蒜素能改善EMT 引起的炎症。 结论 大蒜素可通过抑制JAK2/ STAT3 信号通路调节EMT 发生的标志蛋白、炎症信号蛋白及炎症因子水平从而改善高糖诱导的EMT及炎症。

    • 抑制线粒体内膜蛋白OMA1 对Rot 诱导帕金森病细胞模型凋亡的影响

      2023, 33(11):48-54. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 007

      摘要 (55) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 探究抑制线粒体内膜蛋白OMA1(overlapping activity with m-AAA protease,OMA1)对鱼藤酮(rotenone,Rot)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响。 方法 体外培养SH-SY5Y 细胞,使用Rot(终浓度为0. 05、0. 1、0. 2、0. 3、0. 4 μmol/ L)处理SH-SY5Y 细胞24 h,选择最佳浓度的Rot(0. 2 μmol/ L)开展后续实验。实验分为对照组(细胞不经特殊处理)、PD 模型组(0. 2 μmol/ L 的Rot 处理细胞24 h)、空载转染组(正常对照组基础上转染OMA1 siRNA 的阴性对照序列)、OMA1 siRNA 组(0. 2 μmol/ L 的Rot 处理细胞24 h 后转染OMA1 siRNA)。CCK-8 检测细胞生存率、倒置相差显微镜观察各组细胞形态学、Western blot 检测OMA1 及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2 蛋白表达的变化、TUNEL 凋亡试剂盒检测细胞凋亡。 结果 与对照组相比,随着Rot 浓度的升高,SH-SY5Y 细胞生存率呈浓度依赖性降低(P<0. 05);与对照组相比,PD 模型组中OMA1 的表达及凋亡蛋白Caspase-3 表达升高,Bax/ Bcl-2 值升高(P<0. 01);与PD 模型组相比,OMA1 siRNA 组细胞形态学变化逐渐恢复、凋亡蛋白Caspase-3 表达降低、Bax/ Bcl-2 值降低,TUNEL 凋亡染色提示凋亡减轻(P<0. 01)。 结论 抑制线粒体内膜蛋白OMA1 可以改善Rot 诱导的PD 细胞模型引起的凋亡,对神经元可能具有保护作用。

    • 基于数据挖掘的骨肉瘤动物模型应用分析

      2023, 33(11):55-62. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 008

      摘要 (73) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 总结骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)动物模型造模要点,为完善其造模方法和评价指标提供参考与建议。 方法 通过检索中国知网、万方数据库、PubMed 中OS 动物模型相关文献,总结其实验动物种类、性别、造模方法、癌细胞株种类、检测指标等,建立数据库进行统计分析。 结果 共纳入284 篇文献,统计分析发现OS 模型动物首选BALB/ c-nu/ nu 裸鼠(227 例,75. 17%),其次是SD 大鼠(20 例,6. 62%)。造模方式多选用背部皮下细胞液移植法(66 例,21. 85%)、腋部皮下细胞液移植法(55 例,18. 21%)或原位细胞液移植法(51 例,16. 89%)等;癌细胞株种类以人源MG-63 细胞(100 例,33. 11%)、鼠源UMR-106 细胞(39 例,12. 91%)为主;检测指标主要选择肿瘤组织表观指标(238 例,83. 80%)、肿瘤组织HE 染色(129 例,45. 42%)、动物表观指标(94 例,33. 10%)、肿瘤组织免疫组化(89 例,31. 34%)。 结论 目前OS 模型多选用4~ 6 周龄BALB/ c-nu/ nu 裸鼠作为实验动物,采用人源MG-63 细胞异位移植法(背部、腋下移植)建立OS 动物模型,模型检测指标以动物表观指标、肿瘤表观指标、肿瘤组织病理进行整体评价。但目前依旧缺少与临床吻合度高的动物模型制备及评价标准,本文通过文献挖掘、数据分析总结其优缺点,以期为建立良好的OS 模型提供参考,更好地应用于OS 机制研究及新药开发。

    • lncRNA SNHG16 通过调控miR-570 对肝癌细胞索拉非尼耐药的机制研究

      2023, 33(11):63-70. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 009

      摘要 (22) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 分析长链非编码RNA SNHG16(long non-coding RNA SNHG16,lncRNA SNHG16)通过调控微小RNA-570(miR-570)对肝癌细胞索拉非尼耐药的机制研究。 方法 采用实时荧光RT-PCR 检测人体正常肝组织、肝癌细胞组织中HepG2、HepG2-R 细胞的lncRNA SNHG16、miR-570 表达,并对HepG2-R 细胞做转染,后分别记为HepG2-R+pcDNA 组、HepG2-R+pcDNA SNHG16 组、HepG2-R+anti-miR-NC 组、HepG2-R+anti-miR-570 组、HepG2-R+pcDNA SNHG16+miR-NC 组、HepG2-R+pcDNA SNHG16+miR-570 组,用于后续试验,且将miR-NC、miR-570、si-NC、si-SNHG16 用相同方式转染至HepG2 细胞,分别记为miRNC 组、miR-570 组、si-NC 组、si-SNHG16 组。用MTT法、流式细胞仪、Transwell 试验检测细胞增殖、凋亡及侵袭,Western blot 法测定细胞CyclinD1、P21、MMP-9、MMP-2表达变化。 结果 与人体正常肝组织组相比,肝癌细胞组织组的lncRNA SNHG16 表达升高,miR-570 表达下降(P<0. 05)。与正常细胞HepG2-P 组相比,HepG2-R 组的lncRNA SNHG16 及IC50 值提高,miR-570、HepG2-R 细胞在索拉非尼浓度为1、2、4、8、16 μmol/ L 中的抑制水平下降(P<0. 05)。HepG2-R+pcDNA SNHG16 作为过表达组,其lncRNA SNHG16 表达显著升高(P<0. 05),与HepG2-R+pcDNA 组对比,HepG2-R+pcDNA SNHG16 组的迁移的细胞个数及CyclinD1、P21、MMP-9、MMP-2 的表达水平降低,抑制率、凋亡率及P21 的表达水平上升(P<0. 05)。与HepG2-R+anti-miR-NC 组相比,HepG2-R+anti-miR-570 组miR-570 表达水平降低(P<0. 05),与HepG2-R+anti-miRNC组比较,HepG2-R+anti-miR-570 组CyclinD1、MMP-9、MMP-2 表达水平降低,抑制率、凋亡率及P21 的表达水平升高(P<0. 05)。双荧光素酶报告实验显示,与miR-NC 组相比,miR-570 使WT-SNHG16 荧光素酶活性降低(P<0. 05),而对MUT-SNHG16 荧光素酶活性影响较小(P>0. 05)。过表达lncRNA SNHG16 可使HepG2-R 细胞中miR-570 表达下降(P<0. 05),与HepG2-R+pcDNA SNHG16+miR-NC 组相比,HepG2-R+pcDNA SNHG16+miR-570 组迁移的细胞个数及CyclinD1、MMP-9、MMP-2 的表达水平升高,抑制率、凋亡率及P21 的表达水平降低(P<0. 05)。 结论 lncRNA SNHG16 可调控HepG2-R 肝癌细胞的耐药性,其机制与lncRNA SNHG16 靶向调控miR-570 有关,为临床治疗肝癌细胞提供了新的靶点。

    • 小鼠慢性酒精中毒性脑损伤模型的建立

      2023, 33(11):71-77. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 010

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      摘要: 目的 建立有效稳定的小鼠慢性酒精中毒性脑损伤模型。 方法 将40 只C57BL/6J 小鼠随机分成对照组和模型组,模型组小鼠除基础饮用水中添加5%(v/ v)酒精外,同时灌胃28%(v/ v)酒精,灌胃剂量前两周呈梯度增长(从0 逐渐增加至6 g/ kg 体重),随后4 周维持在6 g/ kg 体重,对照组饮用水中不添加酒精同时灌胃等量生理盐水。实验结束后,通过行为学实验测定小鼠的认知功能和运动能力,通过组织病理染色检测小鼠脑组织的形态学变化。 结果 与对照组比较,模型组小鼠在行为学实验中表现出认知功能和运动功能障碍,模型组小鼠脑组织病理染色显示海马区形态损伤和细胞坏死。 结论 实验有效建立了小鼠慢性酒精中毒性脑损伤模型,该模型可应用于慢性酒精中毒性脑病的机制和药物研究。

    • LncRNA FGD5-AS1 对口腔鳞状细胞癌细胞恶性表型的影响

      2023, 33(11):78-87. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 011

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      摘要: 目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)FGD5-AS1 对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响与机制。 方法 利用在线数据库分析FGD5-AS1 在OSCC 中的表达。以在滕州市中心人民医院口腔科收集的30例OSCC患者的肿瘤组织、正常组织和体外培养的人口腔黏膜细胞(HOK)和OSCC 细胞(SCC-9、HSC-4、SCC-25、CAL-27)为研究对象,采用qRT-PCR 法检测FGD5-AS1 和miR-129-5p表达。将FGD5-AS1 表达最高的CAL-27 细胞分成Control 组、si-NC 组、si-FGD5-AS1 组、si-FGD5-AS1+NC inhibitor 组和si-FGD5-AS1+miR-129-5p inhibitor 组,CCK-8 法和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡水平;划痕愈合实验检测细胞迁移能力;Transwell 小室检测细胞侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1 与miR-129-5p 的靶向关系;Western blot 检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)蛋白表达。构建体内异种移植瘤模型,并分为sh-NC 组、sh-FGD5-AS1 组、miR-129-5p inhibitor 组和sh-FGD5-AS1+miR-129-5p inhibitor 组,检测肿瘤体积和肿瘤;qRT-PCR 检测移植瘤组织FGD5-AS1、miR-129-5p 表达;免疫组化检测移植瘤组织HMGB1、Ki67 表达。 结果 数据库分析显示,OSCC肿瘤组织中FGD5-AS1 的表达水平是正常组织的4 倍,且FGD5-AS1 表达与OSCC 患者分级较差相关。与正常组织或人口腔黏膜细胞相比,肿瘤组织和OSCC 细胞系中FGD5-AS1 表达明显升高,miR-129-5p 表达明显降低(P<0. 05),选择FGD5-AS1 表达水平最高的CAL-27 细胞进行转染实验。沉默FGD5-AS1 可升高细胞凋亡率,降低细胞活力、划痕愈合率及侵袭细胞数,并增强miR-129-5p 表达,下调HMGB1 表达(P<0. 05)。miR-129-5p 是FGD5-AS1的靶基因,抑制miR-129-5p 表达可逆转沉默FGD5-AS1 对OSCC 细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。体内实验显示,沉默FGD5-AS1 明显抑制移植瘤生长和HMGB1、Ki67 表达(P<0. 05),抑制miR-129-5p 则相反;抑制miR-129-5p 可逆转沉默FGD5-AS1 对肿瘤生长和HMGB1、Ki67 表达的抑制作用(P<0. 05)。 结论 FGD5-AS1 在OSCC 细胞中上调,干扰FGD5-AS1 可通过靶向调控miR-129-5p/ HMGB1 轴,抑制OSCC 细胞增殖、迁移、侵袭,促进凋亡。

    • 金丝桃苷通过AMPK/ mTOR/ ULK1 信号通路对肾病综合征大鼠自噬反应的影响

      2023, 33(11):88-95. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 012

      摘要 (71) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 探究金丝桃苷(Hyp)对肾病综合征(nephrotic syndrome, NS)大鼠肾自噬及AMPK/ mTOR/ULK1 通路的影响。 方法 32 只6 周龄SD 大鼠分为正常组(N 组)、肾病综合征组(NS 组)、金丝桃苷组(Hyp 组,60 mg/ kg Hyp)、金丝桃苷+AMPK 抑制剂组(Hyp+CC 组,60 mg/ kg Hyp+0. 2 mg/ kg CC),每组8 只。除N 组外,其余各组大鼠采用一次性尾静脉注射阿霉素(6. 5 mg/ kg)建立NS 模型,模型成功率为75. 0%。Hyp 组大鼠灌胃给予60 mg/ kg 的Hyp,Hyp+CC 组给予60 mg/ kg 的Hyp 灌胃和0. 2 mg/ kg CC 腹腔注射,N 组和NS 组给予等量溶剂,每天1 次,连续14 d。给药结束后,全自动分析仪检测24 h 尿液总蛋白(UTP)、血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)和白蛋白(ALB)水平;HE 染色观察肾组织病理形态;透射电子显微镜(TEM)观察肾组织超微结构变化;Western blot 检测肾中自噬、足细胞及AMPK/ mTOR/ ULK1 通路蛋白表达;免疫荧光染色观察自噬体和足细胞的定位。 结果相比于N 组,NS 组肾小球体积变大、肾小管萎缩或部分消失、基底膜增厚;UTP、BUN、Scr、基底膜厚度、足突宽度及p-AMPK/ AMPK 比值显著增加(P<0. 05),ALB、LC3-Ⅱ/ Ⅰ、Beclin-1、Atg5、Atg7、NPHS2 蛋白水平、NPHS2、Beclin-1相对荧光强度及p-AMPK/ AMPK、p-ULK1/ ULK1 比值显著降低(P<0. 05)。相比于NS 组,Hyp 治疗可改善肾小球形态,降低UTP、BUN、Scr、基底膜厚度、足突宽度及p-AMPK/ AMPK 比值(P< 0. 05),增加ALB、LC3-Ⅱ/ Ⅰ、Beclin-1、Atg5、Atg7、NPHS2 蛋白水平、NPHS2、Beclin-1 相对荧光强度及p-AMPK/ AMPK、p-ULK1/ ULK1 比值(P<0. 05)。相比于Hyp 组,Hyp+CC 组肾小球体积变大、肾小管萎缩或部分消失、基底膜增厚;UTP、BUN、Scr、基底膜厚度、足突宽度及p-AMPK/ AMPK 比值显著增加(P<0. 05),ALB、LC3-Ⅱ/ Ⅰ、Beclin-1、Atg5、Atg7、NPHS2 蛋白水平、NPHS2、Beclin-1 相对荧光强度及p-AMPK/ AMPK、p-ULK1/ ULK1 比值显著降低(P<0. 05)。 结论 Hyp 可能通过激活AMPK/ mTOR/ ULK1 通路促进肾细胞自噬活性,减轻NS 大鼠的足细胞损伤等肾病变。

    • 非人灵长类帕金森动物模型中的行为学评估

      2023, 33(11):96-103. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 013

      摘要 (99) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种神经退行性疾病,目前发病机制不明,患者会出现与疾病相关的运动和非运动症状。啮齿类动物模型只能部分精准模拟患者的症状,导致相关的临床前研究存在局限性,非人灵长类动物模型能够较好的弥补这种缺陷,对非人灵长类PD 模型的运动和非运动症状的量化有利于发病机制和治疗的研究,本综述中总结了不同行为学量化方式,同时对比了不同方法之间的优劣性,为进行PD 猴模型研究提供了行为学测试的参考。

    • CREB通过调节突触可塑性调节记忆及与阿尔茨海默病的联系

      2023, 33(11):104-109. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 014

      摘要 (56) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种发病机制复杂,不可逆转的神经退行性疾病。AD 患者表现为记忆缺失,突触可塑性受损。本文关注与突触可塑性密切相关的环腺苷酸反应元件结合蛋白(cAMP responsive element-binding protein,CREB),总结CREB 的结构、激活途径、下游基因及对记忆的调控作用,关注CREB与AD 的联系,为基于神经可塑性的AD 的研究提供参考。

    • miRNA 在缺血性脑卒中神经保护领域的研究进展

      2023, 33(11):110-117. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023.11. 015

      摘要 (74) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:缺血性脑卒中是一种具有高残疾率和死亡率,严重者可危及生命的脑血管疾病,在全球范围内具有沉重的社会经济负担。缺血性脑卒中的病因及病理过程是由多种分子过程介导,这些分子机制部分转录后被动态调节。越来越多证据表明,微小RNA(micro-ribonucleic-acid,miRNA)作为转录后基因沉默的重要介质在基因表达和缺血性脑卒中病理过程中起着至关重要的作用。在本综述中,我们介绍了miRNA 在缺血性脑卒中不同机制中的神经保护作用。由于通过特定的药物和非药物治疗促进或抑制miRNA 的表达可能有益于缺血性脑卒中的恢复,本文还详细论述了关于miRNA 在缺血性脑卒中的临床诊断和治疗相关作用,旨在对本领域临床和基础研究提供一定的参考。

    • miRNAs 对消化系统肿瘤肝转移影响的研究进展

      2023, 33(11):118-125. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 016

      摘要 (42) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:肝是最常见的肿瘤远处转移脏器,miRNAs 的表达对肿瘤肝转移的过程非常重要。本文整理分析了相关miRNAs 调节消化系统中恶性肿瘤发生肝转移起调节作用的研究进展。查阅相关文献介绍miRNAs 在结直肠癌、胃癌、胰腺癌、胆囊癌等几类消化系统肿瘤肝转移过程中发挥的调节作用,为肿瘤肝转移诊断、治疗及研究提供帮助。

    • 淋巴管生成的调节及其在心肌梗死中的作用研究进展

      2023, 33(11):126-132. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 017

      摘要 (48) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:淋巴管系统调节组织液内稳态、脂质代谢、免疫功能,在体内发挥着重要作用。心肌梗死后,增强淋巴管生成可加快清除浸润的免疫细胞,减少促炎细胞因子的生成,减少水肿、炎症和纤维化,促进受损心脏功能恢复。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)-C 及血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)-3 是淋巴管生成通路的组成部分,在心脏损伤后维持组织液平衡和心肌功能方面具有至关重要的作用。淋巴管与免疫系统之间密切相关,不同的免疫细胞群对淋巴重塑产生刺激或抑制作用。巨噬细胞是广泛分布在器官和组织中的先天免疫细胞,在器官发育、宿主防御、急性和慢性炎症、组织稳态和重塑等多种生理和病理过程中发挥着重要作用。还需要确定淋巴管生成的更多机制,为临床刺激淋巴管生成治疗心脏疾病提供有效的靶点。本文综述了心肌梗死后心脏及淋巴管基本的病理变化、淋巴管生成的调控因素以及巨噬细胞对淋巴管生成的影响。

    • 猴痘病毒的感染与猴痘的动物模型

      2023, 33(11):133-141. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 018

      摘要 (40) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:猴痘是猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)感染引起的传染性疾病。猴痘病毒的宿主依然没有完全明确,啮齿类与非人灵长类动物被认为是潜在的宿主。猴痘正在全世界范围内逐渐扩散,但我国一直以来并未开展猴痘的动物模型的研究。作为一种严重危害人类健康的病原体,猴痘病毒有多种感染类型;其在人群中的传播呈现新的特点。因此本文论述了猴痘病毒发现的经过与早期疫情、不同的感染类型和共感染。此外,本文还介绍了啮齿类和非人灵长类动物的实验性感染与猴痘动物模型。

    • 小胶质细胞-星形胶质细胞的交互作用及其介导的神经炎症在阿尔茨海默病中的研究进展

      2023, 33(11):142-149. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 019

      摘要 (20) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种侵袭性神经退行性疾病,其发病原因迄今未清。神经炎症是中枢神经系统(central nervous system,CNS)中由小胶质细胞和星形胶质细胞激活的一种慢性炎症反应,与多种炎症因子的释放和血脑屏障(blood brain barrier,BBB)的破坏密切相关。研究表明,神经炎症是继β-淀粉样蛋白(amyloid-β protein,Aβ)沉积和神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)后AD 的第三大病理改变。本文总结了小胶质细胞-星形胶质细胞的交互作用,并对其在神经炎症和AD 中的作用进行整理和讨论,以期为AD 的发病机制及防治研究提供理论支持和实验参考。

    • HBV 感染DLBCL 患者的分子机制及预后研究

      2023, 33(11):150-154. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 11. 020

      摘要 (37) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:近年来乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者患弥漫大B 细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)的概率呈上升趋势,且其病因复杂,治疗棘手,因此受到国内外学者的广泛关注。本文在回顾分析国内外学者研究的基础上,进一步探讨了HBV 感染致DLBCL 发生、发展的机制及相关患者的临床预后情况,最终发现在基因组、转录组层面,HBV 可能主要通过诱导BCL6、FOXO1、ZFP36L1 等基因的改变,以及通过HBV 的X蛋白激活各种调控基因,从而诱导淋巴细胞克隆性增生,最终形成淋巴瘤;而针对患者的临床预后评估,主要通过分析比较患者发病年龄、性别、脏器受累情况、国际预后指数(IPI)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平、增殖指数(Ki-67)、bcl-2、bcl-6、炎症指标等因素,旨在为DLBCL 的临床诊治及基础研究提出理论依据。

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