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2017, 27(9):1-6. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.001
摘要:目的 优化不同方法刺激THP-1细胞定向分化为M1、M2巨噬细胞及DC细胞,为M1、M2和DC三种体外细胞模型研究奠定基础。方法 首先用PMA和GM-CSF/M-CSF两种方法刺激诱导THP-1细胞分化,再分别添加不同细胞因子诱导其分化为M1、M2和DC细胞,观察细胞形态的变化,并用流式细胞术检测细胞表面分子的表达情况。结果 两种方法刺激细胞CD分子表达的整体趋势基本一致。THP-1-M1细胞表面CD80和CD86表达量显著增加;THP-1-M2细胞高表达CD163和CD209;THP-1-DC细胞CD14表达量显著降低,高表达CD80、CD86和CD11c。PMA刺激后,M1、M2和DC细胞均贴壁生长;GM-CSF/M-CSF刺激后,只有DC细胞部分贴壁生长,M1和M2细胞仍呈悬浮生长。结论 两种方法均能成功地诱导THP-1细胞向不同细胞亚型分化,但是诱导出来的细胞在形态上存在一定差异,可根据实验需求选择刺激方法。
徐慧雯 , 郝文婷 , 陈德生 , 张雅文 , 陆云娟 , 李向阳 , 秦苏萍 , 潘伟
2017, 27(9):7-10. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.002
摘要:目的 建立DBA/1J小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型,从形态学、病理学及免疫学等多方面对该模型进行鉴定。方法 将牛Ⅱ型胶原(type Ⅱ collagen,CⅡ)与佐剂混合并充分乳化,于DBA/1J小鼠尾根部皮下注射进行初次免疫,21 d后同样的方法进行再次免疫。观察小鼠体重变化、关节肿胀程度等形态学指标,进行踝关节病理检查,并用CBA法检测血清中细胞因子的水平。结果 造模组小鼠体重于首免后35 d开始下降并持续低于对照组。于28 d,造模组小鼠出现足爪红肿,35 d足爪肿胀厚度显著高于对照组(P < 0.05),至62 d发病率高达90%。病理学检测显示,造模组小鼠关节腔变窄,滑膜组织增生,炎症细胞浸润,软骨结构不同程度破坏。相比于对照组,造模组小鼠血清中炎性因子IL-6、IFN-γ、MCP-1显著升高(P < 0.05),而抗炎因子IL-10轻微下降(P > 0.05)。结论 DBA/1J小鼠尾根部皮下注射牛Ⅱ型胶原可成功诱导CIA模型。
梁耀月 , 董世芬 , 程龙 , 宋敬怡 , 施佳晨 , 马丹 , 孙建宁
2017, 27(9):11-16. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.003
摘要:目的 采用基因芯片技术研究气滞血瘀证模型大鼠舌部全基因表达谱的变化以及差异基因涉及的生物过程和通路,以期为研究血瘀证相关理论和药物治疗提供科学依据。方法 采用高脂饲料复合慢性不可预知刺激复制气滞血瘀动物模型,利用基因芯片技术分析正常大鼠与模型大鼠舌中全基因表达谱的变化以及所涉及通路。结果 气滞血瘀证大鼠与正常大鼠比较,结果显示差异表达基因有277个,其中上调基因68个,下调基因209个。GO和Pathway分析结果显示气滞血瘀证分别与炎症、脂代谢、免疫反应等生物过程以及补体与凝血级联通路、PPAR信号通路、细胞色素P450异物代谢通路等7条通路的改变有关。结论 CYP450以及补体与凝血级联通路、PPAR信号通路中的差异基因可能涉及血瘀证的发病机制,为血瘀证以及相关药物的研究提供依据。
刘助红 , 王静 , 李秀珍 , 尹雪琴 , 张钰 , 郭鹏举 , 黄韧
2017, 27(9):17-23. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.004
摘要:目的 构建猴D型逆转录病毒的p27蛋白,并建立流式免疫荧光微球检测技术用于猴D型逆转录病毒的检测。方法 通过PCR扩增p27基因片段,与pGEX-4T-1表达载体进行连接,转化至BL21(DE3)进行表达。通过SDS-PAGE分析蛋白表达的形式及最佳诱导时间。采取GST树脂纯化目标蛋白,包被磁珠,建立流式免疫荧光微球检测技术,用于临床样本的检测。结果 重组蛋白以可溶的上清液进行表达,诱导的最佳时间为4 h。包被磁珠后,成功建立流式免疫荧光微球检测技术,对阳性血清稀释81倍仍可检测为阳性,对猴类其他病原的阳性血清无交叉反应,特异性强,与ELISA法同时对24份临床样本进行检测,其中3份样品的流式免疫荧光微球检测结果为阳性,ELISA检测结果为2份阳性,1份阴性,两种方法的检测结果符合率为96%。结论 成功表达猴D型逆转录病毒p27蛋白,并运用该蛋白建立了灵敏度高,特异性强,样本需求少的流式免疫荧光微球检测技术,为后续推广应用多重流式免疫荧光微球检测技术奠定了基础。
李舸 , 刘晓霖 , 陈锐 , 刘书华 , 李韵峰 , 关雅伦 , 李雪娇 , 裴中 , 黄韧 , 张钰
2017, 27(9):24-29. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.005
摘要:目的 基于威斯康辛通用测试仪的延迟应答测试是评价非人灵长类学习记忆能力的常用方法,该实验在进行过程中受到很多因素影响,如何设定规范的训练和评价参数,对正确评价猴的学习记忆能力具有重要的参考意义和价值。方法 本研究选取8~9岁雄性食蟹猴作为实验研究对象,利用改良的威斯康辛通用测试仪检测,通过食蟹猴获取食物的正确率来评价训练次数,评价频率,间隔评价时间,延迟时间和陷阱食盒数量等实验因素对结果的影响。结果 当减少训练阶段的训练次数(小于10次)时,食蟹猴获取食物的正确率不稳定且呈现出显著的下降趋势;在获得足够训练的前提下,评价频率对食蟹猴获取食物的正确率影响较小;常规训练后3个月进行评价,食蟹猴仍然能够获得65%的获取食物正确率;增加延迟时间后,会导致部分食蟹猴获取食物的正确率显著降低;此外,当增加到3个以上陷阱食盒时,导致食蟹猴获取食物正确率普遍低于65%以下。结论 合理的设置训练和评价阶段的实验参数对非人灵长类学习记忆功能的评价具有重要的影响和意义。
2017, 27(9):30-35. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.006
摘要:目的 制备小鼠MHV、LCM、ECT和HANT液相芯片,建立转基因小鼠传染病抗体的xMAP多重检测方法。方法 将荧光微球分别与小鼠MHV、LCM、ECT和HANT蛋白进行偶联,并且对最佳蛋白偶联量、检测抗体最佳工作浓度和Streptavidin-PE最佳工作浓度进行优化,制备小鼠MHV、LCM、ECT和HANT液相芯片,对56个转基因小鼠血清样品、阴性血清、阳性血清和质控血清进行xMAP多重检测。并应用传统的ELISA方法对xMAP检测结果进行验证。结果 1)小鼠MHV、LCM、ECT和HANT蛋白的最佳偶联量分别为20 μg、20 μg、40 μg和20 μg,检测抗体最佳浓度分别为2 μg/mL、2 μg/mL、2 μg/mL和4 μg/mL;Streptavidin-PE抗体最佳浓度均为2 μg/mL;(2)xMAP检测结果显示,14号、23号、55号和56号转基因小鼠血清MHV MFI值和index值均高于质控血清,其余小鼠血清的MFI值和index值均低于质控血清,表明14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV抗体阳性,其余小鼠MHV、LCM、ECT和HANT抗体阴性;(3)ELISA检测结果显示,14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV A450值和index值均高于质控血清,其余小鼠血清的A450值和index值均低于质控血清,表明14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV抗体阳性,其余小鼠MHV、LCM、ECT和HANT抗体阴性,该ELISA检测结果与xMAP检测结果相一致。结论 建立的xMAP多重检测技术可应用于转基因小鼠的传染病检测。
许雅琦 , 徐德峰 , 赵子建 , 马忠华 , 赵谋明 , 张婷 , 苏国万
2017, 27(9):36-40. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.007
摘要:目的 对SD大鼠皮肤进行脱毛参数研究,为建立皮肤光老化动物模型提供基本实验条件。方法 以毛发残存量和皮损面积为评价指标,分别考察Na2S作用浓度及时间对脱毛效果的影响,在此基础上进一步通过D-最优设计优化Na2S脱毛参数。结果 Na2S浓度是影响脱毛能力的关键因素,5%以下几乎无脱毛效果,7%以上则开始出现皮损并逐步加重,6%为脱毛基础浓度;在6% Na2S浓度下作用5 min开始脱毛,10 min时皮肤表面较光滑,15 min时非常光滑,15 min之后皮损显现,20 min时皮损加重,25 min时肉眼可见皮肤灼烧样外观,D-最优设计表明7% Na2S作用10 min效果最好,未见皮损且无残余毛发。结论 基于D-最优设计的SD大鼠皮肤化学脱毛可实现高效脱毛。
艾西木江·热甫卡提 , 尤力都孜·买买提 , 阿不都热衣木·肉孜 , 热比姑丽·伊斯拉木
2017, 27(9):41-47. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.008
摘要:目的 探讨土大黄根提取物对实验性银屑病模型小鼠组织器官形态学的影响。方法 将BALB/c小鼠背部无毛区涂抹以5%咪喹莫特(5% IMQ)乳膏连续6 d,建立银屑病样动物模型;以0.2 mL/10 g容积灌胃给予相应药物,观察阳性对照药物(地塞米松、消银颗粒、异常粘液质成熟剂),土大黄根提取物(1、2、4 g/kg)对小鼠背部皮肤、胸腺、骨髓、脾脏形态学,及其对胸腺和脾脏脏器指数的影响。结果 与模型组比较,低剂量组(1 g/kg)小鼠仍可见上皮增厚、角化不全;中剂量组(2 g/kg)小鼠大部分区域上皮恢复正常,也可见部分区域上皮增厚;高剂量组(4 g/kg)小鼠大部分区域上皮恢复正常,但表皮增厚情况存在个体差异。与阳性对照药物组(地塞米松、消银颗粒、异常粘液质成熟剂)比较,低剂量组(1 g/kg)小鼠仍可见明显的上皮增厚、角化不全;中剂量组(2 g/kg)小鼠背部皮肤变化与消银颗粒、异常粘液质成熟剂对照组基本相似;高剂量组(4 g/kg)小鼠背部皮肤变化与地塞米松药物对照组基本相似。对照组、模型组、阳性对照药物组(地塞米松、消银颗粒、异常粘液质成熟剂)、土大黄根提取物组(L、M、H,1、2、4 g/kg)小鼠胸腺、骨髓及脾脏形态学未见明显差异。与模型组比较,地塞米松组胸腺和脾脏脏器指数降低(P< 0.01);消银颗粒组、异常粘液质成熟剂组、土大黄根提取物组(1、2、4 g/kg)对小鼠胸腺和脾脏脏器指数的影响没有统计学差异(P> 0.05)。与地塞米松组比较,土大黄根提取物组(1、2、4 g/kg)小鼠胸腺和脾脏脏器指数升高(P< 0.01)。结论 土大黄根提取物能抑制咪喹莫特诱导的实验性银屑病小鼠背部皮肤组织病理学变化,呈剂量依赖性;但对胸腺、骨髓、脾脏形态学未见明显影响。
2017, 27(9):48-52. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.009
摘要:目的 通过静脉注射大肠杆菌方法制备高动力型感染性休克犬模型。方法 杂种犬22只,随机分为对照组(n=11)和实验组(n=11)。麻醉犬后,经右股静脉置入双腔中心静脉导管,对照组使用微量泵向犬股静脉内泵入生理盐水,实验组以同样方法泵入大肠杆菌,经右股动脉置入PICCO导管,在0~48 h各时点应用PICCO监测全身血流动力学情况。结果 实验组的心率(HR)、心排量(CO)、每搏量(SV)在12 h均显著升高(P< 0.05),收缩压(SBP)、外周血管阻力(SVR)在12 h显著降低(P < 0.05),而其他血流动力学指标如中心静脉压(CVP)、肺动脉楔压(PAWP)、氧输送(DO2)、氧消耗(VO2)、氧摄取率(O2ER)差异均无显著性(P> 0.05)。实验组从12 h起即可观察到明显的尿量减少;动脉收缩期峰值血流速度(PSV)和阻力指数(RI)与对照组相比差异均有显著性(P< 0.05)。结论 运用微量泵向犬股静脉泵入活大肠杆菌可以成功制备高动力型感染性休克犬模型,可为研究感染性休克提供实验基础。
2017, 27(9):53-59. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.010
摘要:目的 探究内质网蛋白SEL1L在维持哺乳动物中枢神经系统正常生理活动中的作用。方法 利用Cre/loxp技术,构建神经元(neuron)特异性SEL1L基因敲除小鼠(NKO),按照不同性别分为实验组(NKO)与野生型组(WT),每组10只。比较分析小鼠在出生后不同日龄的存活时间、体重及抓力、平衡协调性、运动、焦虑情绪等行为学指标等差异,对SEL1L在中枢神经系统中的生理功能做出判断。结果 NKO小鼠存活时间为(6±3)周;其体重在第3周、第5周、第8周分别为WT小鼠的54.64%、40.54%、38.57%;NKO雄性小鼠的抓力在第3、5、8周分别为WT雄性小鼠的44.24%、48.09%、49.04%,NKO雌性小鼠为WT雌性小鼠的39.39%、50.19%、49.69%;第3、5、8周的NKO雄性小鼠的平衡协调性反应出的运动时间分别为WT小鼠的26.92%、41.58%、37.48%,NKO雌性小鼠为WT小鼠的46.02%、47.67%、38.48%;第3、5、8周的NKO雄性小鼠在旷场实验中运动路程、进入中心区域时间分别为WT小鼠的(24.63%,9.57%)、(25.87%,11.63%)、(51.96%、9.97%),NKO雌性小鼠为WT小鼠的(35.62%,25.93%)、(42.75%,9.77%)、(34.77%,14.49%),且表现出明显的焦虑情绪。差异有显著性(P< 0.001)。结论 NKO小鼠在存活时间、体重、平衡协调性、运动、焦虑情绪等行为学指标等方面都明显差于野生型小鼠,说明SEL1L蛋白在维持中枢神经正常功能中是必须的。
方天 , 黄海荣 , 程熙 , 胡文娟 , 刘彪 , 许龙祥 , 董敏 , 恽时锋
2017, 27(9):60-64. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.011
摘要:目的 建立肺癌人源性肿瘤组织异种移植(patient-derived tumor xenograft,PDX)裸鼠模型,检测原代肺癌组织标本和第三代(F3)PDX模型组织标本内组织形态结构的变化和p63、napsin A和TTF-1的表达差异性。方法 取临床肺癌新鲜手术切除标本12例,裸鼠皮下移植建立PDX模型,HE染色比较原代患者肿瘤组织与移植瘤组织结构和细胞形态变化与否;免疫组化的方法检测原代组织和F3代组织标本内p63、napsin A和TTF-1的表达水平的差异性。显微镜观察。结果 成功建立传至第三代的PDX模型5例,4例肺鳞癌,1例肺腺癌。PDX模型和患者原代肿瘤具有相同的组织学特点和排列结构;p63在肺鳞癌患者及其PDX模型癌细胞中表达阳性率为84.3%和96%,两者之间差异无显著性(P > 0.05),而在肺腺癌中呈阴性表达。Napsin A在肺腺癌患者及其PDX F3癌细胞中阳性表达率分别为66%和72.4%,两者之间差异无显著性(P > 0.05)。TTF-1在肺腺癌患者及其PDX F3癌细胞中阳性表达率分别为91%和85%,两者之间差异也无显著性(P > 0.05)。Napsin A和TTF-1在肺鳞癌中均呈阴性表达。结论 本实验室所建立的肺癌PDX模型基本保留了部分原代肿瘤的组织学特性,为临床前药效的个性化筛选评估以及生物标志物的鉴定提供了有效的研发资源。
2017, 27(9):65-70. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.012
摘要:目的 探讨miR-143通过负向调控B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)抑制食管癌细胞的增殖。方法 RT-PCR法检测食管癌细胞TE-1、EC109、EC9706、KYSE150、KYSE510、SEG-1及人正常食管上皮细胞HEEC中miR-143表达,使用脂质体LipofectamineTM 2000将miR-143 mimics和miR-143 NC转入EC9706细胞中,48 h后,RT-PCR法检测miR-143表达,CCK-8法检测细胞活力,EdU染色检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR及Western blot检测Bcl-2蛋白及mRNA的表达。结果 miR-143在食管癌细胞TE-1,EC109,EC9706,KYSE150,KYSE510及SEG-1中的表达量[(1.36±0.13),(1.08±0.10),(0.89±0.09),(0.95±0.09),(1.32±0.14),(0.96±0.11)]显著低于miR-143在人正常食管上皮细胞HEEC(2.38±0.15)中的表达量(P< 0.01)。与miR-143 NC组比较,miR-143 mimics组miR-143表达量显著升高(P< 0.01),细胞活力下降(P< 0.01),细胞增殖能力降低(P< 0.01),细胞周期阻滞在G1期(P< 0.01),同时Bcl-2蛋白及mRNA表达量显著降低(P< 0.01)。结论 miR-143过表达能通过下调Bcl-2表达抑制EC9706细胞增殖。
袁徐蕾 , 杨梅 , 韩文莉 , 谭冬梅 , 范尧 , 谭毅
2017, 27(9):71-75. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.013
摘要:目的 初步探究音乐对成年小鼠学习记忆能力是否产生影响。方法 80只C57小鼠随机分成10组,每组雌雄各半。空白对照组:不给予音乐刺激,高频音乐3组、中频音乐3组、低频音乐3组,分别用高频、中频、低频各3首进行音乐刺激,每天5 h,连续6 d。第7天进行水迷宫测试,期间保持音乐刺激不变,测试指标为潜伏期,经过平台次数和平台象限停留时间。结果 音乐组与空白组相比,小鼠逃避潜伏期明显缩短(P< 0.05),经过平台次数和平台象限停留时间虽有增多,但差异无显著性(P> 0.05)。各音乐组之间检测指标差异无显著性(P> 0.05)。结论 所选9首音乐能提高成年小鼠学习记忆能力,而不同频率音乐之间产生的影响未发现显著性差异。推测音乐刺激对小鼠的影响与音乐分类的标准、刺激周期长短、刺激时间点选择等因素密切相关。
2017, 27(9):76-79. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.014
摘要:目的 生物安全实验室的感染性动物实验大部分经空气传播的致病因子可利用安全隔离装置有效控制,啮齿类动物饲养笼具作为一种常用设备对其要求仍不明确。本研究将测试本实验室(负压屏障设施)模拟感染动物实验在使用开放和密闭2种啮齿类动物笼具的病原暴露风险,并评价本设施的硬件条件和管理措施对于风险控制的水平。方法 使用具有卡那霉素抗性的大肠杆菌(Kan+,E.coli,DH5α)作为指示微生物,测试开放笼盒饲养、密闭笼盒(与外界无压力梯度)饲养、生物安全柜动物换笼等操作的暴露风险,并对负压设施内外的指示微生物进行监测。结果 动物在负压屏障设施中使用开放笼具饲养存在病原暴露风险,负压屏障设施一定程度上可以控制病原的播散;动物在无压力梯度的密闭笼盒的饲养环节未能检测到指示菌;密闭笼盒使用生物安全柜设备进行换笼操作可有效控制病原暴露风险。结论 在负压屏障设施内使用密闭笼盒,在笼盒与外界无压力梯度的情况下亦可保障生物安全风险的有效控制。
2017, 27(9):80-82. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.015
摘要:大鼠心肌缺血再灌注造模是一个极其精细的实验过程,在动物实验中,初学者难免会遇到阻碍,笔者有幸进行了整个实验的操作,现就本类实验的经验及遇到的一些挫折进行分享。
丁燕霞 , 李琳 , 朱莉莉 , 王姗妮 , 支文玲 , 王梅梅 , 俞远京 , 周智君 , 高常青
2017, 27(9):83-86. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.016
摘要:目的 对中南大学实验动物屏障设施的初期运行管理进行总结。方法 在实践的基础上,制订了一系列的管理措施,分别对屏障设施运行中人员、动物和物品的管理、规章制度的完善和设施的消毒净化进行了修改完善。结果 通过严格执行各项管理措施,保证了实验动物的质量,建立科学、优质、高效的实验动物服务平台,更好的服务于本校的教学科研。结论 只有通过严格的管理,才能保证实验动物屏障设施的正常运行。
2017, 27(9):87-91. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.017
摘要:在进行动物实验时需要选择合适的麻醉剂来保证实验操作的顺利进行,获得可靠的实验数据,同时又将实验动物所遭受的痛苦降至最低,保证实验动物的福利。近年来,关于实验动物的福利伦理问题已越来越引起人们的关注。本文主要对动物实验常用的麻醉剂(包括吸入性麻醉剂:乙醚、七氟烷、异氟烷,非吸入性麻醉剂:戊巴比妥钠、水合氯醛、氯胺酮、乌拉坦)的选择及使用过程中可能存在的福利伦理问题做一综述。
张磊阳 , 贺敏 , 李玥 , 裘福荣 , 陈文文 , 吴雨 , 杨蒋伟 , 蒋健
2017, 27(9):92-97. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.018
摘要:近年来抑郁症发病率逐年上升,严重危害了人类的身心健康,但是其发病机制尚未明确。而动物模型可以模拟人类抑郁症的疾病状态,被广泛运用于抑郁症发病机制研究和抗抑郁新药的研发。抑郁症动物模型根据造模方式不同可以分为以下几类:应激造模,手术造模,药物诱发造模和遗传造模。这些模型可以从不同的方面来解释抑郁症的发生,比如神经递质及其受体和转运蛋白、神经营养因子、神经内分泌系统、炎症假说等,在抑郁症的研究中发挥重要作用。该综述就常用的啮齿类动物抑郁症模型进行概述和评价,为抑郁症的研究提供参考。
2017, 27(9):98-103. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.019
摘要:非人灵长类动物与人类具有相似的遗传、解剖和生理结构,广泛应用于生物医学研究。猴B病毒(猴疱疹病毒1型)是一种非人灵长类所携带的人兽共患病原体,当感染其自然宿主恒河猴时没有明显的临床症状,但感染人类时,可引起人类致死性脑炎、脑脊髓炎和神经系统后遗症的发生。本文将简要分析猴B病毒感染人类造成严重后果的原因。
2017, 27(9):104-110. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.020
摘要:腹膜粘连是腹部外科手术术后的常见并发症,可导致肠梗阻、慢性盆腹腔疼痛、不孕等,并可增加再入院率、再次手术的风险及经济负担。建立合适的腹膜粘连动物模型对于研究腹膜粘连及其并发症的发病机制、治疗和预防等具有重要的作用。粘连模型动物中以大鼠最为常用,根据腹膜粘连形成的不同因素,其造模的方式也多种多样,但目前尚无任何一种造模方式及评价方法可代表所有情况。本文对目前大鼠腹膜粘连模型常用的造模方式、评价方法作一综述。